Pathogenesis of the Candida parapsilosis Complex in the Model Host Caenorhabditis elegans.

Caenorhabditiselegans is a valuable tool as an infection model toward the study of Candida species. In this work, we endeavored to develop a C. elegans-Candidaparapsilosis infection model by using the fungi as a food source. Three species of the C. parapsilosis complex (C.parapsilosis (sensustricto), Candidaorthopsilosis and Candidametapsilosis) caused infection resulting in C. elegans killing. All three strains that comprised the complex significantly diminished the nematode lifespan, indicating the virulence of the pathogens against the host. The infection process included invasion of the intestine and vulva which resulted in organ protrusion and hyphae formation. Importantly, hyphae formation at the vulva opening was not previously reported in C. elegans-Candida infections. Fungal infected worms in the liquid assay were susceptible to fluconazole and caspofungin and could be found to mount an immune response mediated through increased expression of cnc-4, cnc-7, and fipr-22/23. Overall, the C. elegans-C. parapsilosis infection model can be used to model C. parapsilosis host-pathogen interactions.

Caracterização biofísica e funcional de Gir2, uma proteína altamente acídica de Saccharomyces cerevisiae / Biophysical and functional characterization of Gir2, a highly acidic protein of Saccharomyces cerevisiae

Gir2 é uma proteína ainda não caracterizada de Saccharomyces cerevisiae que possui o domínio RWD na porção N-terminal. Este domínio, também conhecido com GI, é encontrado em Gcn2, a quinase que fosforila eIF2, e em Yih l e seu ortólogo de mamíferos, Impact. Sugeriu-se que proteínas contendo o domínio RWD podem interagir com Gcnl levando à inibição da atividade quinase de Gcn2. Neste trabalho, demonstramos a caracterização biofísica e funcional de Gir2. Com o objetivo de obter informações estruturais e funcionais sobre esta proteína, Gir2 foi expressa em Escherichia coli, em fusão com uma cauda de histidinas, e purificada. A proteína recombinante, de massa esperada de 34 kDa, mostrou um retardamento anormal da migração em SDS-PAGE (62 kDa). Demonstramos por espectrometria de massa e mapeamento da proteína utilizando a massa dos peptídeos trípticos (PMF), que a proteína tem a massa molecular esperada. A modificação dos grupos carboxilatos dos aminoácidos acídicos mediada por EDC reverteu a migração anômala eri SD3-PAGE. ,Por gel filtração, verificamos que Gir2 tem raio de Stokes maior que o esperado. Por ,analises de CD, mostramos que Gir2 é termo-estável e tem estrutura bastante desordenada. Utilizando formas truncadas de His6-Gir2 e proteólise limitada, determinamos que o N-terminal é a região com características desestruturadas. Com base nestes achados, sugerimos que Gir2 pertence ao grupo das proteínas intrsecamente desestruturadas - IUPs. A ,proteína expressa na levedura comporta-se de forma similar, ou seja, migra com massa inolecular aumentada no SDS-PAGE e, além disso, migra como um rastro, sugerindo que Gir2 é potencialmente modificada pós-traducionalmente. Apesar de Gir2 possuir o domínio RVWD, não conseguimos demonstrar, por análises fenotípicas e ensaios de interação, que esta proteína é capaz de bloquear ou diminuir a atividade de Gen2 durante a carência de aminoácidos e estresse osmótico