Identification of the first blaCMY-2 gene in Salmonella enterica serovar Typhimurium isolates obtained from cases of paediatric diarrhoea illness detected in South America.

The objectives of this study were to investigate clinical isolates of Salmonella enterica serovar Typhimurium resistant to ß-lactam antibiotics, to characterise their mechanisms of antibiotic resistance and to evaluate the possible biological cost of expressing resistance genes. Two oxyimino-cephalosporin-resistant Salmonella isolates obtained from children with diarrhoea were characterised. The occurrence of plasmid-encoded blaCMY-2 genes was confirmed by molecular methods and conjugation assays; transcription levels were determined by quantitative real-time PCR (qRT-PCR). The genomic context of the ß-lactamases, replicon type and addiction systems were analysed by PCR. Genomic relatedness of both isolates was studied by pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) and multilocus sequence typing (MLST) assays. Growth curves, motility and invasiveness assays in Caco-2 cells were performed to analyse the bacterial fitness of both isolates. Both isolates carried a blaCMY-2-like allele in an IncI plasmid and belonged to the same MLST sequence type (ST19); nevertheless, they showed extensive differences in their PFGE profiles and virulotypes. Isolate STM709 appeared to lack the Salmonella virulence plasmid and displayed less motility and invasiveness in cultured cells than isolate STM910. qRT-PCR showed that isolate STM709 had higher blaCMY-2 mRNA levels compared with STM910. Altogether, the results suggest that a plasmid carrying blaCMY-2 could be disseminating among different clones of S. Typhimurium. Different levels of blaCMY-2 mRNA could have an effect on the fitness of this micro-organism, resulting in lower invasiveness and motility.

Desarrollo y ensayo de dos procedimientos para la detección rápida de Streptococcus agalactiae en exudados vaginorrectales / Development and testing of two procedures for the quick detection of Streptococcus agalactiae in rectal-vaginal exudates

Introducción: la infección por Estreptococo grupo B (EGB) puede afectar gravemente a la madre y al feto durante la gestación y al recién nacido luego del parto. Actualmente, eldiagnóstico de colonización durante el embarazo se realiza por métodos microbiológicos a partir de exudados vaginorrectales. Objetivo: desarrollar métodos rápidos y de bajo costo para la detección del antígeno grupo específico de EGB en exudados vaginorrectales.Material y método: se utilizaron dos cepas de EGB, una autóctona (IH23) y la cepa de referencia O90R, que solo expresa el polisacárido específico de grupo. Para cada una se preparó un antisuero policlonal que se utilizó para el desarrollo de un test inmunocromatográfico y uno de aglutinación de látex. Como controles se emplearon cultivos bacterianos, polisacáridos purificados de EGB y muestras vaginorrectales. Resultados: los límites de detección obtenidos para la inmunocromatografía fueron de 210 μg/ml y 50 μg/ml para los polisacáridos purificados de sobrenadante y pared, respectivamente, no lográndose detectar antígenos de EGB en las muestras clínicas analizadas. El límite dedetección del látex fue 65 μg/ml frente al polisacárido purificado de sobrenadante de cultivo de IH23 y 6,5 x 107 UFC/ml de IH23. La sensibilidad y especificidad para el látex fue de 30% y90%, respectivamente. Conclusiones: los métodos desarrollados no alcanzaron el límite de detección requerido parasu aplicación en muestras clínicas. Esto concuerda con lo descripto en la bibliografía para ensayos rápidos basados en reacciones antígeno-anticuerpo y muestra la necesidad deagregar pasos previos de extracción y concentración o mejorar la calidad de los reactivos inmunológicos empleados.

Introduction: group B streptococcal infection (GBS) may seriously affect mother and fetuses during pregnancy, and the newborn after delivery. Today, diagnosis of colonization during pregnancy is done by means of microbiological methods of vaginal and rectal exudates. Objective: to develop fast and low cost methods to detect the GBS specific group antigen in vaginal-rectal exudates. Method: we used two EGB strains, one of the (IH23)autochthonous and the reference strain O90R, that only expresses the group specific polysaccharide. We prepareda polyclonal antiserum for each one of them which was used to conduct an immunochromatographic test and alatex agglutination test. We used bacterial culture, EGB purified polysaccharides and vagina,-rectal samples as control. Results: detection limits obtained for the immunochromatographic test were 210 μg/ml and 50 μg/ml for purifiedpolysaccharides and cell wall, respectively, there being no EGB antigens detected in the clinical samples analyzed. Latex detection limit was 65 μg/ml compared to purified polysaccharides of IH23 culture supernatant and 6,5 x 107 UFC/ml of IH23. Sensitivity and specificity for latex was 30% and 90% respectively.Conclusions: the methods used failed to reach the detection limit required for its application in our clinical samples. This agrees with what is described in bibliography about quick tests based on antigen-antibody reactions and indicated the need to add previous extractionand concentration steps or to improve the quality of the immunologic reagents used.

Introdução: a infecção por Estreptococo grupo B (EGB) pode afetar gravemente a mãe e o feto durante a gravidez e o recém nascido imediatamente depois do parto. Atualmente, o diagnóstico de colonização durante a gestação é feita por métodos microbiológicos empregando exsudados vaginorretais.Objetivo: desenvolver métodos rápidos de baixo custo para a detecção do antígeno grupo específico de EGB emexsudados vaginorretais. Material e método: foram utilizadas duas cepas deEGB, uma autóctone (IH23) e a cepa de referência O90R, que expressa somente o polissacarídeo específico do grupo.Para cada uma foi preparado um antisoro policlonal utilizado para o desenvolvimento de um teste imunocromatográfico e um de aglutinação de látex. Foram empregadoscultivos bacterianos, polissacarídeos purificados de EGB e amostras vaginorretais como controles. Resultados: os limites de detecção obtidos para a imunocromatografia foram de 210 μg/ml e 50 μg/ml para ospolissacarídeos purificados de sobrenadante e parede, respectivamente, no sendo possível detectar antígenos de EGB nas amostras clínicas analisadas. O limite dedetecção do látex foi 65 μg/ml quando comparado com o polissacarídeo purificado de sobrenadante de cultivo deIH23 y 6,5 x 107 UFC/ml de IH23. A sensibilidade e especificidade para o látex foi de 30% y 90%, respectivamente. Conclusões: os métodos desenvolvidos não alcançaramo limite de detecção requerido para sua aplicação em amostras clínicas. Estes resultados são similares aos dadosdescritos na bibliografia para ensaios rápidos baseados em reações antígeno-anticorpo e mostram a necessidade de agregar passos prévios de extração econcentração ou melhorar a qualidade dos reativos imunológicos utilizados.