Efeitos antibiofilme e citotóxico de um novo nanosistema carreador de clorexidina e fluconazol / Antibiofilm and cytotoxic effects of a new nanocarrier of chlorhexidine and fluconazole

Os objetivos do presente estudo foram montar e caracterizar um novo nanocarreador dual de clorexidina (CLX) e fluconazol (FLZ), bem como avaliar seu efeito sobre biofilmes microcosmos e sua citotoxicidade sobre queratinócitos orais. Para montar o nanocarreador dual, CLX e FLZ foram adicionados a nanopartículas de óxido de ferro (NPsOF) previamente revestidas por quitosana (QTS), seguido de um processo de solubilização sob agitação magnética. O nanocarreador foi, então, caracterizado por microscopia eletrônica de transmissão, difração de raios X, espectroscopia no infravermelho por transformada de Fourier e análise termogravimétrica. A suscetibilidade de Candida albicans e Candida glabrata no estado planctônico ao nanocarreador dual foi determinada pelos valores de concentração inibitória mínima, utilizando o método da microdiluição em caldo. Um pool de saliva de 2 doadores saudáveis suplementado com espécies de Candida foi usado como inóculo para a formação de biofilmes microcosmos. Os biofilmes foram cultivados (72 h) sobre discos de vidro posicionados no Amsterdam Active Attachment model e tratados (24 h) com NPsOF-QTS carreando 39 µg/mL de CLX + 156 µg/mL de FLZ (NPsOF-QTS-CLX39-FLZ156), 78 µg/mL de CLX + 312 µg/mL de FLZ (NPsOF-QTS-CLX78-FLZ312) e 156 µg/mL de CLX + 624 µg/mL de FLZ (NPsOF-QTS-CLX156-FLZ624). NPsOF (218,5 µg/mL), QTS (218,5 µg/mL) e 156 µg/mL de CLX + 624 µg/mL de FLZ (CLX156-FLZ624) foram testados como controles. Posteriormente, foram realizadas as análises de quantificação das unidades formadoras de colônias (UFCs), produção de ácido lático (LA), composição da matriz extracelular (ME) e viabilidade celular por microscopia confocal de varredura a laser (MCVL). Para o ensaio de citotoxicidade, queratinócitos orais humanos (linhagem NOKsi) foram expostos a diferentes concentrações do nanocarreador dual, por 24 ou 48 h, e a viabilidade celular foi determinada pelo ensaio de redução de MTT. Os dados foram analisados por ANOVA ou teste de Kruskal-Wallis, seguidos dos testes de Fisher LSD ou Tukey (α = 0,05). Os testes de caracterização físico-química mostraram que um nanocarreador dual com dimensões em torno de 6 nm foi obtido, sem comprometer a propriedade cristalina e a estabilidade de NPsOF. Os compostos que formam o nanocarreador estabeleceram uma interação sinérgica em relação ao efeito sobre células planctônicas de Candida. Para os ensaios de biofilme, NPsOF-QTS-CLX156-FLZ624 foi o composto mais eficaz na redução de UFCs de Streptococcus mutans, Lactobacillus spp., C. albicans e C. glabrata, diferindo significativamente dos outros grupos, e esses achados foram confirmados por MCVL. NPsOF-QTS-CLX39-FLZ156, NPsOF-QTS-CLX78-FLZ312 e CLX156- FLZ624 mostraram efeitos antibiofilme similares. O nanocarreador dual também reduziu significativamente a produção de AL e a quantidade de carboidratos e ácidos nucleicos da ME. Um efeito citotóxico dose-dependente sobre queratinócitos orais foi observado para o nanocarreador dual, independentemente do período de exposição testado (24 ou 48 h). NPsOF-QTS-CLX-FLZ e CLX-FLZ reduziram significativamente a viabilidade dos queratinócitos em concentrações de CLX e FLZ iguais ou superiores a 7,8 e 31,25 µg/mL, respectivamente. Por fim, a nanoterapia testada no presente estudo é promissora e constitui um grande avanço dentro dos métodos alternativos aos antimicrobianos tradicionais para o controle da candidíase oral(AU)

The objectives of the present study were to assemble and characterize a new dual nanocarrier of chlorhexidine (CHX) and fluconazole (FLZ), and evaluate its effect on microcosm biofilms and its cytotoxicity against oral keratinocytes. To assemble the dual nanocarrier, CHX and FLZ were added to iron oxide nanoparticles (IONPs) previously coated by chitosan (CS), followed by a solubilization process under magnetic stirring. The nanocarrier was then characterized by transmission electron microscopy, X-ray diffraction, Fourier transform infrared spectroscopy, and thermogravimetric analysis. The susceptibility of Candida albicans and Candida glabrata in the planktonic state to the dual nanocarrier was determined by the minimum inhibitory concentration values, using the broth microdilution method. A saliva pool from 2 healthy donors supplemented with Candida species was used as an inoculum for microcosm biofilm formation. Biofilms were grown (72 h) on glass discs positioned in the Amsterdam Active Attachment model and treated (24 h) with IONPs-CS carrying 39 µg/mL CHX + 156 µg/mL FLZ (IONPsCS-CHX39-FLZ156), 78 µg/mL CHX + 312 µg/mL FLZ (IONPs-CS-CHX78-FLZ312), and 156 µg/mL CHX + 624 µg/mL FLZ (IONPs-CS-CHX156-FLZ624). IONPs at 218.5 µg/mL, 218.5 µg/mL CS, and 156 µg/mL CHX + 624 µg/mL FLZ (CHX156-FLZ624) were tested as controls. Next, analyses of the quantification of colony-forming units (CFUs), lactic acid production (LA), composition of the extracellular matrix (EM), and viability by confocal laser scanning microscopy (CLSM) were performed. For the cytotoxicity assay, human oral keratinocytes (NOKsi lineage) were exposed to different concentrations of the dual nanocarrier, for 24 or 48 h, and cell viability was determined by the MTT reduction assay. Data were analyzed by ANOVA or Kruskal-Wallis test, followed by Fisher LSD or Tukey tests (α = 0.05). The physico-chemical characterization tests showed that a dual nanocarrier with dimensions around 6 nm was assembled, without compromising the crystalline property and stability of IONPs. The compounds that form the nanocarrier established a synergistic interaction in relation to the effect on Candida planktonic cells. Regarding biofilm assays, IONPs-CS-CHX156-FLZ624 was the most effective compound in reducing CFUs from Streptococcus mutans, Lactobacillus spp., C. albicans, and C. glabrata, differing significantly from the other groups, and these findings were confirmed by CLSM. IONPs-CS-CHX39-FLZ156, IONPs-CS-CHX78-FLZ312, and CHX156-FLZ624 showed similar antibiofilm effects. The dual nanocarrier also significantly reduced LA production and the amount of carbohydrates and nucleic acids from the EM. A dose-dependent cytotoxic effect against oral keratinocytes was observed for the dual nanocarrier, regardless of the exposure period tested (24 or 48 h). IONPs-CSCHX-FLZ and CHX-FLZ significantly reduced keratinocyte viability at CHX and FLZ concentrations equal to or greater than 7.8 and 31.25 µg/mL, respectively. In conclusion, the nanotherapy tested in the current study is promising and constitutes a major advance in alternative methods to traditional antimicrobials for oral candidiasis control(AU)

Atenolol increases dental mineralization in male offspring of treated hypertensive rats and normotensive rats

Abstract This study evaluates how atenolol affects dental mineralization in offspring of female spontaneously hypertensive rats (fSHR) and normotensive Wistar rats (fW). fSHR and fW were treated with atenolol (100 mg/Kg/day, orally) during pregnancy and lactation. Non-treated fSHR and fW were the control groups. Enamel and dentin hardness were analyzed (Knoop, 15 g load, 10s) in mandibular incisor teeth (IT) and molar teeth (MT) obtained from the male offspring of atenolol-treated and non-treated fWistar and fSHR. Data were analyzed by ANOVA, followed by Tukey post hoc test (p < 0.05). Atenolol reduced the arterial blood pressure (SBP) in fSHR, but it did not change the SBP in fW. The offspring of non-treated fSHR had lower enamel (IT and MT) and dentin (IT) hardness than the offspring of non-treated fW (p < 0.05). Atenolol increased enamel and dentin hardness in the IT obtained from the offspring of fSHR and fW (p<0.05), but the offspring of fSHR presented higher values (p < 0.05). Atenolol did not alter enamel width in the IT obtained from any of the groups, but it increased enamel and dentin hardness in the IT obtained from the offspring of fSHR and fW. Atenolol affected the IT obtained from the offspring of fSHR. Atenolol increased only enamel hardness in the MT obtained from the offspring of fW. In conclusion, maternal hypertension reduces tooth hard tissues, and treatment with atenolol increases tooth hardness in male offspring of hypertensive and normotensive female rats.

Traumatic dental injuries in young children / Traumatismos dentais em crianças pequenas / Traumatismos dentales en niños pequenos

Introduction: Dental trauma is a frequent occurance in Dentistry. They often occur in early childhood, between 0 to 3 years old, when children begin to learn their first steps, to play and run, because their habilities are not refined. Objective: The purpose of this article is to verify the occurance of traumatic dental injury in primary teeth in a children population. Material and Method: seventy-eight child from 0 to 6 years old male and female were evaluated. The study was conducted in Regional Hospital of Presidente Prudente. Children were evaluated by a questionary about occurance of traumatic injury, cause and search for attendance. The data were collected and submited to Spearman correlation test. Results: Traumatic dental injury occurs in deciduous teeth in (44,8%) of the population, more common in males (68,5%), at two years old (28,5%) and in front superior region (91,5%) in the upper central incisors (48,5%). Conclusion: By the use of correlation test of Spearman, it was possible to verify that there is a positive correlation between the factors: darkness and mobility, darkness and search for treatment, early loss and satisfactory treatment and search for treatment and satisfactory treatment(AU)

Introdução: O traumatismo dentário é uma ocorrência frequente em odontologia. Muitas vezes ocorrem na primeira infância, entre 0 a 3 anos, quando as crianças começam a aprender seus primeiros passos, a brincar e correr, porque suas habilidades não são refinadas. Objetivo: O objetivo deste artigo é verificar a ocorrência de lesões dentárias traumáticas em dentes primários em uma população infantil. Material e Método: Foram selecionadas 78 crianças de 0 a 6 anos do sexo masculino e feminino do Hospital Regional de Presidente Prudente, 35 crianças foram avaliadas, pois haviam sofrido trauma, e seus pais preencheram um questionário sobre ocorrência de lesão traumática, causas e atendimento. Os dados foram coletados por meio de questionário e submetidos ao teste de correlação de Spearman (P<0,05). Resultados: ocorreu lesão dentária traumática em dentes decíduos em (44,8%) da população, mais comum nos homens (68,5%), aos dois anos de idade (28,5%) e na região frontal superior (91,5%) nos incisivos centrais superiores (48,5%). Conclusão: Foi possível verificar que há uma correlação positiva entre os fatores: escurecimento e mobilidade, escurecimento e busca de tratamento, perda precoce e tratamento satisfatório e busca tratamento e tratamento satisfatório(AU)

Introducción: El traumatismo dental es una ocurrencia frecuente en odontología. Muchas veces ocurren en la primera infancia, entre 0 a 3 años, cuando los niños empiezan a aprender sus primeros pasos, a jugar y correr, porque sus habilidades no son refinadas. Objetivo: El objetivo de este artículo es verificar la ocurrencia de lesiones dentales traumáticas en dientes primarios en una población infantil. Material Y Métodos: Se seleccionaron 78 niños de 0 a 6 años del sexo masculino y femenino del Hospital Regional de Presidente Prudente, 35 niños fueron evaluados, pues habían sufrido trauma, y sus padres llenaron un cuestionario sobre ocurrencia de lesión traumática, causas y atención. Los datos fueron recolectados en un cuestionario y se sometió a la prueba de correlación de Spearman (P <0,05). En la mayoría de los casos, se observó un aumento en la incidencia de la enfermedad de Chagas, %) en los incisivos centrales superiores (48,5%). Conclusión: Fue posible verificar que hay una correlación positiva entre los factores: oscurecimiento y movilidad, oscurecimiento y búsqueda de tratamiento, pérdida precoz y tratamiento satisfactorio y busca tratamiento y tratamiento satisfactorio(AU)

Microorganisms related to early childhood caries in a sample of an oral preventive-educative program: a longitudinal study / Microorganismos relacionados a cárie precoce da infância em uma amostra de um programa preventivo de cárie dentária: um estudo longitudinal

Objetivo: Premature acquisition of cariogenic microorganisms seems to be related to higher prevalence and activity of caries lesions. The aim of the study was to evaluate the prevalence of Streptococcus mutans and Streptococcus sobrinus in infants enrolled in a dental preventive program and in their mothers, as well as to assess the influence of bacterial prevalence, diet and oral hygiene in dental caries prevalence. Material and methods: After clinical examinations (n = 50), saliva and oral biofilms were collected and stored prior to real-time PCR at 6, 12, 18 and 24 months of age. Results: No correlation was observed between the presence of cariogenic pathogens and diet or hygiene habits at all ages; however, association increased with number of erupted teeth. Salivary levels of bacteria were lower in children than in their mothers at all ages, and children with carious lesions had high ingestion of sugared food. Conclusion: As the levels of cariogenic pathogens were low in the patients that were enrolled in a preventive program, we can conclude that control of oral biofilm as eruption of infants' teeth occurs and sugar ingestion should be considered of great importance in preventive dentistry, because the association between them was highly positive. (AU)

Objetivo: A aquisição precoce de microorganismos cariogênicos está correlacionada a alta prevalência e atividade de lesões de cárie. O objetivo deste estudo foi avaliar a prevalência de Streptococcus mutans e Streptococcus sobrinus em bebês e pares de mães, matriculados no programa educativo e preventivo da Bebê Clínica da Faculdade de Odontologia de Araçatuba (UNESP), como também foi avaliada influência da prevalência bacteriana, dieta e higiene oral na prevalência de cárie dentária. Material e métodos: Após exame clínico (n=50), foram coletados saliva e biofilme e submetidos a real-time PCR aos 6, 12, 18 e 24 meses de idade. Resultados: Não foi observada correlação entre a presence de patógenos cariogênicos e hábitos de dieta e higiene em todas as idades avaliadas. Níveis salivares foram mais baixos nas crianças do que em suas mães em todas as idades, e as crianças portadoras de lesões cariosas tinham maior ingestão de alimentos açúcarados. Conclusão: Uma vez que os níveis de patógenos cariogênicos foram baixos nos pacientes que frequentam um programa preventivo, podemos concluir que o controle de biofilme durante a erupção dentária e da ingestão de açúcares pode ser considerada medida de grande relevância em prevenção odontológica, uma vez que a associação foi altamente positiva. (AU)

A severidade da lesão de cárie induz maior atividade de sistemas antioxidantes e consequente redução do estresse oxidativo na saliva de crianças / Carious lesion severity induces higher activity of antioxidant systems and consequent reduction of oxidative stress in saliva of children

O objetivo deste estudo foi avaliar a relação entre os níveis de biomarcadores de estresse/ dano oxidativo na saliva de crianças e a severidade de cárie dentária classificada pelo Sistema Internacional de Classificação e Gerenciamento de Cárie (ICCMS™, termo em inglês International Caries Classification and Management System). Amostras de saliva não estimuladas foram coletadas de pacientes de 1-3 anos de idade, após 2 horas de jejum, no período da manhã, em uma creche do município de Birigui, SP, Brasil. As crianças foram divididas em 4 grupos (n=30/grupo), de acordo com a severidade de cárie, sendo livre de cárie (grupo A), lesão de cárie em estágio inicial (grupo B), lesão de cárie intermediaria (grupo C) e lesão de cárie em estágio avançado (grupo D). Foram avaliados os seguintes biomarcadores salivares de estresse oxidativo: dano oxidativo ou malonaldeído (MDA), mensurado pelo método de TBARS; capacidade antioxidante total (TAC), medida pelo ensaio do poder antioxidante férrico redutor; atividade antioxidante enzimática da superóxido dismutase (SOD) e atividade antioxidante não enzimática do ácido úrico (UA). Os dados foram analisados por ANOVA, seguido do teste de Student-Newman-Keuls, coeficientes de correlação de Pearson e Spearman, e regressão linear multivariada (p <0,05). Os resultados demonstraram que a quantidade de proteína total, TAC, atividade antioxidante enzimática e não-enzimática salivar aumentaram de acordo com a severidade das lesões de cárie, levando a redução do dano oxidativo salivar. Podemos concluir que quanto maior a severidade das lesões de cárie, maior atividade dos sistemas antioxidantes salivares, havendo, consequentemente, diminuição gradual do dano oxidativo salivar(AU)

The objective of this study was to evaluate the relationship between the levels of biomarkers of oxidative stress / oxidative damage in children's saliva and the severity of dental caries classified by the International Caries Classification and Management System (ICCMSTM). Unstimulated saliva samples were collected from patients 0-3 years old after 2 hours of fasting in the morning in a day care center in Birigui municipality. The children were divided into 4 groups (n = 30 / group), according to caries severity, being caries free (group A), early caries lesion (group B), intermediate caries lesion (group C) and advanced carious lesion (group D). The following salivary biomarkers of oxidative stress were evaluated: oxidative or malonaldehyde damage (MDA), measured by the TBARS method; total antioxidant capacity (TAC), as measured by the ferric reducing antioxidant power test; enzymatic antioxidant activity of superoxide dismutase (SOD) and non-enzymatic antioxidant activity of uric acid (UA). Data were analyzed by ANOVA, followed by Student-Newman-Keuls test, Pearson and Spearman correlation coefficients, and multivariate linear regression (p <0.05). The results showed that the concentration of total protein, TAC, enzymatic antioxidant and non-enzymatic salivary activity increased according to the severity of caries lesions, leading to reduction of salivary oxidative damage. We can conclude that the greater the severity of caries lesions, the greater the activity of the salivary antioxidant systems, and consequently the gradual decrease of salivary oxidative damage(AU)