RESUMO
Molecular surveillance provides a powerful approach to monitoring the resistance status of parasite populations in the field and for understanding resistance evolution. Oxamniquine was used to treat Brazilian schistosomiasis patients (mid-1970s to mid-2000s) and several cases of parasite infections resistant to treatment were recorded. The gene underlying resistance (SmSULT-OR) encodes a sulfotransferase required for intracellular drug activation. Resistance has a recessive basis and occurs when both SmSULT-OR alleles encode for defective proteins. Here we examine SmSULT-OR sequence variation in a natural schistosome population in Brazil â¼40years after the first use of this drug. We sequenced SmSULT-OR from 189 individual miracidia (1-11 per patient) recovered from 49 patients, and tested proteins expressed from putative resistance alleles for their ability to activate oxamniquine. We found nine mutations (four non-synonymous single nucleotide polymorphisms, three non-coding single nucleotide polymorphisms and two indels). Both mutations (p.E142del and p.C35R) identified previously were recovered in this field population. We also found two additional mutations (a splice site variant and 1bp coding insertion) predicted to encode non-functional truncated proteins. Two additional substitutions (p.G206V, p.N215Y) tested had no impact on oxamniquine activation. Three results are of particular interest: (i) we recovered the p.E142del mutation from the field: this same deletion is responsible for resistance in an oxamniquine selected laboratory parasite population; (ii) frequencies of resistance alleles are extremely low (0.27-0.8%), perhaps due to fitness costs associated with carriage of these alleles; (iii) that four independent resistant alleles were found is consistent with the idea that multiple mutations can generate loss-of-function alleles.
Assuntos
Mutação , Oxamniquine/farmacologia , Schistosoma mansoni/efeitos dos fármacos , Esquistossomose/parasitologia , Esquistossomicidas/farmacologia , Alelos , Animais , Brasil , Criança , Pré-Escolar , Resistência a Medicamentos/genética , Éxons/genética , Fezes/parasitologia , Frequência do Gene , Estudo de Associação Genômica Ampla , Humanos , Lactente , Conformação Molecular , Reação em Cadeia da Polimerase , Polimorfismo de Nucleotídeo Único , Schistosoma mansoni/genéticaRESUMO
Os glicoconjugados de Leishmania tem sido extensivamente estudados, mas ainda poucose sabe sobre o quanto polimorfismos intra e interespecíficos contribuem com o desenvolvimentodas diferentes imunopatologias das leishmanioses. Por este motivo, duas espécies de importânciaepidemiológica foram examinadas, L. braziliensis e L. infantum, agentes causadores dasleishmanioses cutânea e visceral, respectivamente. O LPG de L. braziliensis não possui cadeiaslaterais enquanto o LPG de L. infantum carrega em sua estrutura oligômeros de até três β-glicoses como cadeias laterais. Por outro lado a estrutura dos GIPLs destas espécies eradesconhecida e foi objeto de estudo deste trabalho.A análise estrutural dos GIPLs mostrou que L. infantum possui GIPLs pequenos e ricosem manose, sugerindo predominância de GIPLs do tipo I e híbridos enquanto L. braziliensisapresenta GIPLs grandes e ricos em galactose, sugestivo do tipo II. Para analisar o papel destasmoléculas na interação com o hospedeiro, macrófagos peritoneais murinos foram tratados comLPG ou GIPLs e a produção de nitrito, citocinas, bem como a ativação de MAPKs foramavaliados.De forma geral, macrófagos estimulados com LPG de L. braziliensis, demonstraram umaprodução maior de TNF-α, IL-1β, IL-6 e NO do que os estimulados com LPG de L. infantum,adicionalmente, células tratadas com LPG de ambas as espécies mostraram uma resposta proinflamatória mais proeminente. Além disto, os GIPLs mostraram a capacidade de inibir aprodução de IL-12 e NO em macrófagos estimulados com IFN-γ e LPS. Finalmente, osglicoconjugados destas duas espécies resultaram em uma cinética diferencial na ativação deMAPKs. O LPG de L. braziliensis mostrou uma ativação transiente enquanto o de L. infantumuma ativação gradual. Os GIPLs de ambas espécies falharam em ativar MAPKs
Assuntos
Animais , Cobaias , Camundongos , Glicoconjugados/imunologia , Leishmania braziliensis/imunologia , Leishmaniose Tegumentar Difusa/imunologiaRESUMO
Os glicoconjugados de Leishmania tem sido extensivamente estudados, mas ainda poucose sabe sobre o quanto polimorfismos intra e interespecíficos contribuem com o desenvolvimentodas diferentes imunopatologias das leishmanioses. Por este motivo, duas espécies de importânciaepidemiológica foram examinadas, L. braziliensis e L. infantum, agentes causadores dasleishmanioses cutânea e visceral, respectivamente. O LPG de L. braziliensis não possui cadeiaslaterais enquanto o LPG de L. infantum carrega em sua estrutura oligômeros de até três β-glicoses como cadeias laterais. Por outro lado a estrutura dos GIPLs destas espécies eradesconhecida e foi objeto de estudo deste trabalho.A análise estrutural dos GIPLs mostrou que L. infantum possui GIPLs pequenos e ricosem manose, sugerindo predominância de GIPLs do tipo I e híbridos enquanto L. braziliensisapresenta GIPLs grandes e ricos em galactose, sugestivo do tipo II. Para analisar o papel destasmoléculas na interação com o hospedeiro, macrófagos peritoneais murinos foram tratados comLPG ou GIPLs e a produção de nitrito, citocinas, bem como a ativação de MAPKs foramavaliados.De forma geral, macrófagos estimulados com LPG de L. braziliensis, demonstraram umaprodução maior de TNF-α, IL-1β, IL-6 e NO do que os estimulados com LPG de L. infantum,adicionalmente, células tratadas com LPG de ambas as espécies mostraram uma resposta proinflamatória mais proeminente. Além disto, os GIPLs mostraram a capacidade de inibir aprodução de IL-12 e NO em macrófagos estimulados com IFN-γ e LPS. Finalmente, osglicoconjugados destas duas espécies resultaram em uma cinética diferencial na ativação deMAPKs. O LPG de L. braziliensis mostrou uma ativação transiente enquanto o de L. infantumuma ativação gradual. Os GIPLs de ambas espécies falharam em ativar MAPKs
