Assuntos
Celulose , Oligodesoxirribonucleotídeos , Reação em Cadeia da Polimerase/métodos , RNA Mensageiro/análise , RNA Mensageiro/genética , Transcrição Gênica/genética , Sequência de Bases , DNA Complementar/genética , Globinas/genética , Humanos , Linfócitos/química , Dados de Sequência Molecular , Técnicas de Amplificação de Ácido NucleicoAssuntos
Química Encefálica , Encéfalo/ultraestrutura , Polirribossomos/ultraestrutura , RNA Mensageiro/isolamento & purificação , Acrilamida , Acrilamidas , Animais , Fracionamento Celular/métodos , Centrifugação com Gradiente de Concentração/instrumentação , Centrifugação com Gradiente de Concentração/métodos , Géis , Indicadores e Reagentes , Ratos , Espectrofotometria/métodosAssuntos
DNA Recombinante/isolamento & purificação , DNA/isolamento & purificação , Reação em Cadeia da Polimerase/métodos , RNA Mensageiro/isolamento & purificação , Sequência de Bases , Celulose , DNA Polimerase I/metabolismo , DNA Recombinante/metabolismo , Escherichia coli/enzimologia , Indicadores e Reagentes , Dados de Sequência Molecular , Oligodesoxirribonucleotídeos , Biossíntese de Proteínas , RNA Mensageiro/genética , RNA Mensageiro/metabolismo , DNA Polimerase Dirigida por RNARESUMO
Polysomes prestained with Coomassie blue were fractionated on sucrose density gradients giving rise to visible bands corresponding to different size classes of aggregates. Coomassie blue staining enhanced the capacities of brain and liver polysomes to synthesize proteins in vitro, including the synthesis of neuron-specific enolase. This positive action of the dye was restricted to polysomes and was not manifested when mRNAs isolated from prestained polysomes were tested in in vitro translation or reverse transcription, indicating that the action of the dye consists in stabilization of polysomal structure.
Assuntos
Polirribossomos/análise , Corantes de Rosanilina , Animais , Centrifugação com Gradiente de Concentração , Técnicas In Vitro , Masculino , Fosfopiruvato Hidratase/biossíntese , Polirribossomos/metabolismo , Biossíntese de Proteínas , RNA Mensageiro/análise , Coelhos , Ratos , Ratos Endogâmicos , Coloração e RotulagemRESUMO
The effects of T-2 toxin on protein synthesis were tested in two reticulocyte lysate in vitro systems pretreated with micrococcal nuclease. One of the test systems contained purified globin mRNA and was initiation dependent. The other contained rat brain polysomes and incorporated amino acids by an elongation dependent process. T-2 toxin inhibited the translation of globin mRNA at all concentrations tested, from 10(-8) M to 10(-4) M. Rat brain polysomes were much less sensitive to T-2 toxin than globin mRNA. While high concentrations of the toxin (10(-4) M) led to partial inhibition of protein synthesis by polysomes, low concentrations (10(-8) M and 10(-6) M) stimulated protein synthesis. Comparison of the above results with those obtained by other workers suggest that the T-2 toxin may inhibit not only the initiation step of translation, but also elongation and termination, depending upon the concentration of the toxin and the nature of the translation system. A similar mechanism may operate for all the trichothecene toxins that exert their effect through binding to ribosomal peptidyl transferase.