CARACTERIZAÇÃO DA RESISTÊNCIA AOS ANTIMICROBIANOS DE Staphylococcus spp. ISOLADOS DE MASTITE BOVINA

A mastite pode ser causada por muitos agentes infecciosos diferentes, e é a doença infecciosa mais comumente encontrada em bovinos leiteiros de criação intensiva. Os objetivos deste trabalho foram: (i) isolar bactérias do gênero Staphylococcus do leite de vacas com mastite e (ii) identificar os antimicrobianos para os quais elas apresentam maior sensibilidade e resistência in vitro. Foi realizado um estudo retrospectivo com 122 Staphylococcus spp. isolados de leites de vacas com mastite enviados ao Hospital Veterinário de Uberaba (HVU), no período de janeiro de 2010 a junho de 2014. As bactérias foram identificadas de acordo com suas características morfológicas e bioquímicas. O teste de sensibilidade aos antimicrobianos foi realizado pelo método Kirby-Bauer de difusão em disco. Foram testados os seguintes antibióticos: ampicilina; amoxicilina/ácido clavulâmico; cefalexina; ceftiofur; ciprofloxacina; eritromicina; enrofloxacina; gentamicina; oxacilina; penicilina; sulfa/trimetoprim ; tetraciclina e tilmicosin. Destes isolados, 59% (72/122) eram de Staphylococcus coagulase-positivo (SCP) e 41% (50/122) de Staphylococcus coagulase-negativo (SCN). Os melhores resultados observados foram para Amoxicilina/ácido clavulânico, Ceftiofur, Ciprofloxacina, Florfenicol e Gentamicina, e sugerem que estas bases podem ser opções terapêuticas para mastite estafilocócica da região de Uberaba,

PERFIL MICROBIOLÓGICO DE SÊMENS COMERCIAIS DE TOUROS DA REGIÃO DE UBERABA-MG / MICROBIOLOGICAL PROFILE OF COMMERCIAL SEMEN OF BULLS IN THE REGION OF UBERABA-MG

Os microrganismos presentes no trato reprodutivo dos bovinos podem contaminar o sêmen e reduzir o número e a qualidade dos embriões produzidos, resultando em doenças nas receptoras e nos animais nascidos. O macho sendo a fonte de infecção pode desencadear a transmissão direta porém, outros meios de contaminação não podem ser descartadas como: o meio ambiente; a manipulação pelo funcionário; e a água utilizada na preparação do diluente. O presente trabalho teve como objetivo detectar os principais agentes presentes em sêmens comerciais avaliados em espermoculturas e o número de unidades formadoras de colônias por mL (UFC/mL). Foi realizado um estudo retrospectivo, através dos registros de resultados de espermoculturas mantidos no Laboratório de Medicina Preventiva Veterinária do Hospital Veterinário de Uberaba no período de 2006 a 2012. Estas amostras foram submetidas à diluição seriada base 10 para a contagem de colônias, por plaqueamento em profundidade (Pour Plate) e as placas contendo entre 30 e 300 colônias foram selecionadas para posterior identifica&

ANÁLISE DOS FATORES DE RISCO E PREVALÊNCIA DA LEUCOSE ENZOÓTICA BOVINA EM TRÊS MICRORREGIÕES DO TRIÂNGULO MINEIRO / ANALYSIS OF RISK FACTORS AND PREVALENCE OF ENZOOTIC BOVINE LEUKEMIA IN THREE MICRO REGIONS OF THE TRIANGULO MINEIRO

A Leucose Enzoótica Bovina (LEB) é uma infecção viral que acomete bovinos e pode manifestar-se na forma de linfocitose persistente ou pela presença de linfossarcomas. Está mundialmente distribuída e causa perdas econômicas, principalmente na pecuária leiteira. Este trabalho objetivou avaliar a prevalência da Leucose Enzoótica Bovina em rebanhos bovinos de três microrregiões do Triângulo Mineiro (Araxá, Frutal e Uberaba) e correlacionar com os achados epidemiológicos como: tipo de atividade, manejo sanitário e reprodutivo e o grau de tecnificação das propriedades. Para a avaliação soroepidemiológica, foram colhidas 853 amostras de soro de bovinos fêmeas, mestiças, com idade superior a 24 meses para a caracterização da prevalência de anticorpos séricos antivírus da Leucose dos Bovinos por meio da prova de Imunodifusão em Gel de Ágar (IDGA). Também foi aplicado um questionário objetivando conhecer algumas características das propriedades estudadas. Após a determinação do númer

Perfil microbiológico de sêmens comerciais de touros da região de uberaba-mg / microbiological profile of commercial semen of bulls in the region of uberaba-mg

Os microrganismos presentes no trato reprodutivo dos bovinos podem contaminar o sêmen e reduzir o número e a qualidade dos embriões produzidos, resultando em doenças nas receptoras e nos animais nascidos. O macho sendo a fonte de infecção pode desencadear a transmissão direta porém, outros meios de contaminação não podem ser descartadas como: o meio ambiente; a manipulação pelo funcionário; e a água utilizada na preparação do diluente. O presente trabalho teve como objetivo detectar os principais agentes presentes em sêmens comerciais avaliados em espermoculturas e o número de unidades formadoras de colônias por mL (UFC/mL). Foi realizado um estudo retrospectivo, através dos registros de resultados de espermoculturas mantidos no Laboratório de Medicina Preventiva Veterinária do Hospital Veterinário de Uberaba no período de 2006 a 2012. Estas amostras foram submetidas à diluição seriada base 10 para a contagem de colônias, por plaqueamento em profundidade (Pour Plate) e as placas contendo entre 30 e 300 colônias foram selecionadas para posterior identifica&

Análise dos fatores de risco e prevalência da leucose enzoótica bovina em três microrregiões do triângulo mineiro / analysis of risk factors and prevalence of enzootic bovine leukemia in three micro regions of the triangulo mineiro

A Leucose Enzoótica Bovina (LEB) é uma infecção viral que acomete bovinos e pode manifestar-se na forma de linfocitose persistente ou pela presença de linfossarcomas. Está mundialmente distribuída e causa perdas econômicas, principalmente na pecuária leiteira. Este trabalho objetivou avaliar a prevalência da Leucose Enzoótica Bovina em rebanhos bovinos de três microrregiões do Triângulo Mineiro (Araxá, Frutal e Uberaba) e correlacionar com os achados epidemiológicos como: tipo de atividade, manejo sanitário e reprodutivo e o grau de tecnificação das propriedades. Para a avaliação soroepidemiológica, foram colhidas 853 amostras de soro de bovinos fêmeas, mestiças, com idade superior a 24 meses para a caracterização da prevalência de anticorpos séricos antivírus da Leucose dos Bovinos por meio da prova de Imunodifusão em Gel de Ágar (IDGA). Também foi aplicado um questionário objetivando conhecer algumas características das propriedades estudadas. Após a determinação do númer

Characterization of -trypsin at acid pH by differential scanning calorimetry.

Trypsin is a serino-protease with a polypeptide chain of 223 amino acid residues and contains six disulfide bridges. It is a globular protein with a predominance of antiparallel -sheet and helix in its secondary structure and has two domains with similar structures. We assessed the stability of -trypsin in the acid pH range using microcalorimetric (differential scanning calorimetry) techniques. Protein concentrations varied in the range of 0.05 to 2.30 mg/ml. Buffer solutions of 50.0 mM -alanine and 20.0 mM CaCl2 at different pH values (from 2.0 to 4.2) and concentrations of sorbitol (1.0 and 2.0 M), urea (0.5 M) or guanidinium hydrochloride (0.5 and 1.0 M) were used. The data suggest that we are studying the same conformational transition of the protein in all experimental situations using pH, sorbitol, urea and guanidinium hydrochloride as perturbing agents. The observed van't Hoff ratios (deltaHcal/deltaHvH) of 1.0 to 0.5 in the pH range of 3.2 to 4.2 suggest protein aggregation. In contrast, deltaHcal/deltaHvH ratios equal to one in the pH range of 2.0 to 3.2 suggest that the protein unfolds as a monomer. At pH 3.00, -trypsin unfolded with Tm = 54 C and deltaH = 101.8 kcal/mol, and the change in heat capacity between the native and unfolded forms of the protein (deltaCp) was estimated to be 2.50 0.07 kcal mol-1 K-1. The stability of -trypsin calculated at 298 K was deltaG D = 5.7 kcal/mol at pH 3.00 and deltaG D = 15.2 kcal/mol at pH 7.00, values in the range expected for a small globular protein.

Characterization of á-trypsin at acid pH by differential scanning calorimetry

Trypsin is a serino-protease with a polypeptide chain of 223 amino acid residues and contains six disulfide bridges. It is a globular protein with a predominance of antiparallel á-sheet and helix in its secondary structure and has two domains with similar structures. We assessed the stability of á-trypsin in the acid pH range using microcalorimetric (differential scanning calorimetry) techniques. Protein concentrations varied in the range of 0.05 to 2.30 mg/ml. Buffer solutions of 50.0 mM á-alanine and 20.0 mM CaCl2 at different pH values (from 2.0 to 4.2) and concentrations of sorbitol (1.0 and 2.0 M), urea (0.5 M) or guanidinium hydrochloride (0.5 and 1.0 M) were used. The data suggest that we are studying the same conformational transition of the protein in all experimental situations using pH, sorbitol, urea and guanidinium hydrochloride as perturbing agents. The observed van't Hoff ratios (deltaHcal/deltaHvH) of 1.0 to 0.5 in the pH range of 3.2 to 4.2 suggest protein aggregation. In contrast, deltaHcal/deltaHvH ratios equal to one in the pH range of 2.0 to 3.2 suggest that the protein unfolds as a monomer. At pH 3.00, á-trypsin unfolded with Tm = 54ºC and deltaH = 101.8 kcal/mol, and the change in heat capacity between the native and unfolded forms of the protein (deltaCp) was estimated to be 2.50 ± 0.07 kcal mol-1 K-1. The stability of á-trypsin calculated at 298 K was deltaG D = 5.7 kcal/mol at pH 3.00 and deltaG D = 15.2 kcal/mol at pH 7.00, values in the range expected for a small globular protein.

Linear competitive inhibition of human tissue kallikrein by 4-aminobenzamidine and benzamidine and linear mixed inhibition by 4-nitroaniline and aniline.

Hydrolysis of D-valyl-L-leucyl-L-arginine p-nitroanilide (7.5-90.0 microM) by human tissue kallikrein (hK1) (4.58-5.27 nM) at pH 9.0 and 37 degrees C was studied in the absence and in the presence of increasing concentrations of 4-aminobenzamidine (96-576 microM), benzamidine (1.27-7.62 mM), 4-nitroaniline (16.5-66 microM) and aniline (20-50 mM). The kinetic parameters determined in the absence of inhibitors were: Km = 12.0 +/- 0.8 microM and k cat = 48.4 +/- 1.0 min(-1). The data indicate that the inhibition of hK1 by 4-aminobenzamidine and benzamidine is linear competitive, while the inhibition by 4-nitroaniline and aniline is linear mixed, with the inhibitor being able to bind both to the free enzyme with a dissociation constant Ki yielding an EI complex, and to the ES complex with a dissociation constant Ki', yielding an ESI complex. The calculated Ki values for 4-aminobenzamidine, benzamidine, 4-nitroaniline and aniline were 146 +/- 10, 1,098 +/- 91, 38.6 +/- 5.2 and 37,340 +/- 5,400 microM, respectively. The calculated Ki' values for 4-nitroaniline and aniline were 289.3 +/- 92.8 and 310,500 +/- 38,600 microM, respectively. The fact that Ki'>Ki indicates that 4-nitroaniline and aniline bind to a second binding site in the enzyme with lower affinity than they bind to the active site. The data about the inhibition of hK1 by 4-aminobenzamidine and benzamidine help to explain previous observations that esters, anilides or chloromethyl ketone derivatives of Nalpha-substituted arginine are more sensitive substrates or inhibitors of hK1 than the corresponding lysine compounds.

Linear competitive inhibition of human tissue kallikrein by 4-aminobenzamidine and benzamidine and linear mixed inhibition by 4-nitroaniline and aniline

Hydrolysis of D-valyl-L-leucyl-L-arginine p-nitroanilide (7.5-90.0 `M) by human tissue kallikrein (hK1) (4.58-5.27 nM) at pH 9.0 and 37ºC was studied in the absence and in the presence of increasing concentrations of 4-aminobenzamidine (96-576 `M), benzamidine (1.27-7.62 mM), 4-nitroaniline (16.5-66 `M) and aniline (20-50 mM). The kinetic parameters determined in the absence of inhibitors were: Km = 12.0 + or - 0.8 `M and k cat = 48.4 + or - 1.0 min-1. The data indicate that the inhibition of hK1 by 4-aminobenzamidine and benzamidine is linear competitive, while the inhibition by 4-nitroaniline and aniline is linear mixed, with the inhibitor being able to bind both to the free enzyme with a dissociation constant Ki yielding an EI complex, and to the ES complex with a dissociation constant Ki', yielding an ESI complex. The calculated Ki values for 4-aminobenzamidine, benzamidine, 4-nitroaniline and aniline were 146 + or - 10, 1,098 + or - 91, 38.6 + or - 5.2 and 37,340 + or - 5,400 `M, respectively. The calculated Ki' values for 4-nitroaniline and aniline were 289.3 + or - 92.8 and 310,500 + or - 38,600 `M, respectively. The fact that Ki'>Ki indicates that 4-nitroaniline and aniline bind to a second binding site in the enzyme with lower affinity than they bind to the active site. The data about the inhibition of hK1 by 4-aminobenzamidine and benzamidine help to explain previous observations that esters, anilides or chloromethyl ketone derivatives of Nalpha-substituted arginine are more sensitive substrates or inhibitors of hK1 than the corresponding lysine compounds