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Sci Rep ; 6: 21661, 2016 Feb 23.
Artigo em Inglês | MEDLINE | ID: mdl-26902886

RESUMO

Cell surface antigens are important targets for monoclonal antibodies, but they are often difficult to work with due to their association with the cell membrane. Phage display is a versatile technique that can be applied to generate binders against difficult targets. Here we used antibody phage display to isolate a binder for a rare and specialized cell, the human corneal endothelial cell. The human corneal endothelium is a medically important cell layer; defects in this layer account for about half of all corneal transplants. Despite its importance, no specific antigens have been found to mark this cell type. By panning a phage library directly on human corneal endothelial cells, we isolated an antibody that bound to these cells and not the other types of corneal cells. Subsequently, we identified the antibody's putative target to be CD166 by immunoprecipitation and mass spectrometry. This approach can be used to isolate antibodies against other poorly-characterized cell types, such as stem cells or cancer cells, without any prior knowledge of their discriminating markers.


Assuntos
Anticorpos Monoclonais/isolamento & purificação , Antígenos CD/metabolismo , Moléculas de Adesão Celular Neuronais/metabolismo , Células Endoteliais/metabolismo , Endotélio Corneano/metabolismo , Proteínas Fetais/metabolismo , Biblioteca de Peptídeos , Anticorpos de Cadeia Única/isolamento & purificação , Anticorpos Monoclonais/genética , Anticorpos Monoclonais/metabolismo , Especificidade de Anticorpos , Antígenos CD/genética , Biomarcadores/metabolismo , Moléculas de Adesão Celular Neuronais/genética , Células Endoteliais/citologia , Endotélio Corneano/citologia , Proteínas Fetais/genética , Fibroblastos/citologia , Fibroblastos/metabolismo , Expressão Gênica , Humanos , Imunoprecipitação , Especificidade de Órgãos , Cultura Primária de Células , Ligação Proteica , Proteínas Recombinantes/genética , Proteínas Recombinantes/isolamento & purificação , Proteínas Recombinantes/metabolismo , Anticorpos de Cadeia Única/genética , Anticorpos de Cadeia Única/metabolismo
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