The Primary Mode of Action of Lippia graveolens Essential Oil on Salmonella enterica subsp. Enterica Serovar Typhimurium.

Essential oils are known to exhibit diverse antimicrobial properties, showing their value as a natural resource. Our work aimed to investigate the primary mode of action of Cuban Lippia graveolens (Kunth) essential oil (EO) against Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium (S. enterica ser. Typhimurium). We assessed cell integrity through various assays, including time-kill bacteriolysis, loss of cell material with absorption at 260 and 280 nm, total protein leakage, and transmission electron microscopy (TEM). The impact of L. graveolens EO on membrane depolarization was monitored and levels of intracellular and extracellular ATP were measured by fluorescence intensity. The minimum inhibitory and bactericidal concentrations (MIC and MBC) of L. graveolens EO were 0.4 and 0.8 mg/mL, respectively. This EO exhibited notable bactericidal effects on treated cells within 15 min without lysis or leakage of cellular material. TEM showed distinct alterations in cellular ultrastructure, including membrane shrinkage and cytoplasmic content redistribution. We also observed disruption of the membrane potential along with reduced intracellular and extracellular ATP concentrations. These findings show that L. graveolens EO induces the death of S. enterica ser. Typhimurium, important information that can be used to combat this foodborne disease-causing agent.

Estandarización de un ensayo de adhesión de Escherichia coli para el cribado de agentes antibiopelículas / Standardization of an Escherichia coli adhesion assay for anti-biofilm agents screening

Introducción: Las biopelículas constituyen un factor clave en el desarrollo de enfermedades infecciosas y la resistencia a fármacos para su control. Nuevas estrategias terapéuticas incluyen productos naturales como agentes antibiopelículas. Sin embargo, la comparación de los resultados suele ser difícil debido a la falta de homogeneidad y estandarización en los métodos empleados para estudiar la formación de biopelículas in vitro. Objetivo: Estandarizar un ensayo de adhesión en microplaca de Escherichia coli para su uso en el cribado de potenciales agentes antibiopelículas. Métodos: Se utilizó el método de adherencia en microplaca y la tinción con violeta cristal. Se evaluó la influencia de condiciones experimentales como la concentración bacteriana, el medio de cultivo y el tiempo de incubación. Resultados: Se identificaron como condiciones óptimas para la formación de biopelículas: el medio Luria Bertani (LB), la concentración bacteriana a 105 UFC/mL y un tiempo de incubación de 24 h. Conclusiones: Los resultados mostraron que las condiciones de cultivo influyen en la formación de biopelículas. Se determinaron las condiciones de cultivo óptimas para la formación de biopelículas de E. coli, que podrían emplearse en futuros estudios acerca del efecto de productos naturales sobre la inhibición o destrucción de biopelículas.

Introduction: Biofilms are a key factor in the development of infectious diseases and drug resistance for their control. New therapeutic strategies include natural products as anti-biofilm agents. However, comparing results is often difficult due to the lack of homogeneity and standardization of the methods used to study biofilm formation in vitro. Objective: To standardize an Escherichia coli microplate adhesion assay for potential anti-biofilm agents screening. Methods: The microplate adhesion method and crystal violet staining were used. The influence of experimental conditions such as bacterial concentration, culture medium, and incubation time were evaluated. Results: Optimal conditions for biofilm formation included: Luria Bertani (LB) medium, bacterial concentration at 105 CFU/mL, and an incubation time of 24 hours. Conclusions: The results showed that culture conditions influence biofilm formation. Optimal culture conditions for the formation of E. coli biofilms were determined, which could be used in further studies on the effect of natural products on the inhibition or destruction of biofilms.

Evaluation of the subchronic toxicity of kefir by oral administration in Wistar rats.

INTRODUCTION: Kefir is obtained by fermentation of milk with complex microbial populations present in kefir grains. Several health-promoting benefits have been attributed to kefir consumption. OBJECTIVE: The objective of this work was to conduct a subchronic toxicity study, offering the rats normal or high-doses of kefir and evaluating growth, hematology and blood chemistry, as well as assessing bacterial translocation and the integrity of the intestinal mucosa of animals. METHODS: Wistar rats were randomly divided into three groups (n = 6/group): control group received 0.7 mL of water, kefir group received 0.7 mL/day of kefir, (normodose), and Hkefir group received 3.5 mL/day of kefir (fivefold higher dose). Feeding was carried out by gavage. The animals were housed in individual cages and maintained under standard conditions for 4 weeks. RESULTS: The normodose and high-dose of kefir supplementation did not harm the animals since growth, hematology and blood chemistry in rats, as well as the potential pathogenicity in tissues were within normal limits, demonstrating that consumption of normodose and highdose of kefir are safe. In addition, administration of the normodose of kefir reduced cholesterol levels and improved the intestinal mucosa of the rats. CONCLUSION: These results demonstrate that the consumption of kefir is safe. Importantly, while damages are not seen for the high-dose, the normodose consumption is recommended due to the pronounced beneficial effects, as safety is concerned.

Introducción: El kéfir es obtenido por fermentación de la leche con una población microbiana compleja presente en sus granos. Al consumo de kéfir se le atribuyen múltiples efectos beneficiosos sobre la salud. Objetivo: Evaluar la toxicidad subcrónica del kéfir en ratas Wistar, administrado por vía oral en dosis normal (normodosis) y sobredosis. Se evaluaron además, los parámetros de peso corporal, hematología, química sanguínea, translocación bacteriana e integridad de la mucosa intestinal. Métodos: Se conformaron tres grupos de seis animales de manera aleatoria: grupo control, recibió 0,7 mL de agua; grupo kéfir recibió 0,7 mL/día de kéfir (normodosis) y grupo Hkéfir recibió 3,5 mL/día de kéfir (dosis cinco veces superior). La administración se llevó a cabo mediante sonda. Los animales se alojaron individualmente, y se mantuvieron bajo las mismas condiciones de manejo y alimentación durante 4 semanas. Resultados: La administración de kéfir en dosis normal y sobredosis no afectó los parámetros evaluados en los animales, el peso corporal, indicadores hematológicos, de química sanguínea, y la patogenicidad potencial en los tejidos se encontraron dentro de límites normales, lo que demostró que el consumo de kéfir en dosis normal y sobredosis es seguro. Además, se evidenció que la administración de normodosis de kéfir redujo los niveles de colesterol y mejoró la mucosa intestinal de las ratas. Conclusión: Se demostró que el consumo de kéfir es seguro. Destacar que, la administración de sobredosis no evidenció daños, no obstante, se recomienda el consumo de normodosis, debido a los marcados efectos beneficiosos y de seguridad.

Evaluation of the subchronic toxicity of kefir by oral administration in Wistar rats / Evaluación de la toxicidad subcrónica del kéfir por administración oral en ratas Wistar

Introduction: Kefir is obtained by fermentation of milk with complex microbial populations present in kefir grains. Several health-promoting benefits have been attributed to kefir consumption. Objective: The objective of this work was to conduct a subchronic toxicity study, offering the rats normal or high-doses of kefir and evaluating growth, hematology and blood chemistry, as well as assessing bacterial translocation and the integrity of the intestinal mucosa of animals. Methods: Wistar rats were randomly divided into three groups (n = 6/group): control group received 0.7 mL of water, kefir group received 0.7 mL/day of kefir, (normodose), and Hkefir group received 3.5 mL/day of kefir (fivefold higher dose). Feeding was carried out by gavage. The animals were housed in individual cages and maintained under standard conditions for 4 weeks. Results: The normodose and high-dose of kefir supplementation did not harm the animals since growth, hematology and blood chemistry in rats, as well as the potential pathogenicity in tissues were within normal limits, demonstrating that consumption of normodose and highdose of kefir are safe. In addition, administration of the normodose of kefir reduced cholesterol levels and improved the intestinal mucosa of the rats. Conclusion: These results demonstrate that the consumption of kefir is safe. Importantly, while damages are not seen for the high-dose, the normodose consumption is recommended due to the pronounced beneficial effects, as safety is concerned (AU)

Introducción: El kéfir es obtenido por fermentación de la leche con una población microbiana compleja presente en sus granos. Al consumo de kéfir se le atribuyen múltiples efectos beneficiosos sobre la salud. Objetivo: Evaluar la toxicidad subcrónica del kéfir en ratas Wistar, administrado por vía oral en dosis normal (normodosis) y sobredosis. Se evaluaron además, los parámetros de peso corporal, hematología, química sanguínea, translocación bacteriana e integridad de la mucosa intestinal. Métodos: Se conformaron tres grupos de seis animales de manera aleatoria: grupo control, recibió 0,7 mL de agua; grupo kéfir recibió 0,7 mL/día de kéfir (normodosis) y grupo Hkéfir recibió 3,5 mL/día de kéfir (dosis cinco veces superior). La administración se llevó a cabo mediante sonda. Los animales se alojaron individualmente, y se mantuvieron bajo las mismas condiciones de manejo y alimentación durante 4 semanas. Resultados: La administración de kéfir en dosis normal y sobredosis no afectó los parámetros evaluados en los animales, el peso corporal, indicadores hematológicos, de química sanguínea, y la patogenicidad potencial en los tejidos se encontraron dentro de límites normales, lo que demostró que el consumo de kéfir en dosis normal y sobredosis es seguro. Además, se evidenció que la administración de normodosis de kéfir redujo los niveles de colesterol y mejoró la mucosa intestinal de las ratas. Conclusión: Se demostró que el consumo de kéfir es seguro. Destacar que, la administración de sobredosis no evidenció daños, no obstante, se recomienda el consumo de normodosis, debido a los marcados efectos beneficiosos y de seguridad (AU)

Optimización de un medio de cultivo para el crecimiento de Gardnerella vaginalis / Optimization of a cultural medium for growing Gardnerella vaginalis

Se presenta una técnica para la optimización del medio de cultivo Caldo Triptona Soya suplementado con suero equino para el crecimiento de Gardnerella vaginalis. Se utilizó un diseño experimental 2² donde se evaluó la influencia de dos componentes del medio y un diseño compuesto central para mejorar los rendimientos celulares. Con la mejor variante de este estudio se realizaron corridas para caracterizar el crecimiento bacteriano empleando diferentes estimaciones. Se obtuvo que la dirección hacia los mayores crecimientos se localizó hacia mayores concentraciones de triptona soya y suero equino. La variación en la concentración de los componentes evaluados no influyó en la expresión de las proteínas antigénicas dado por los perfiles electroforéticos obtenidos.

The optimization of the cultural medium Soy Triptone Broth supplemented with equine serum to grow Gardnerella vaginalis is presented in this paper. An experimental design 2² was used in which the influence of two components of this medium was evaluated; and a central design aimed at improving cell performances. With the best variant of this study, the runs allowed characterize the bacterial growth using different estimations. The greatest growths were observed in higher concentrations of soy triptone and equine serum. The variation of the evaluated component concentrations did not have an impact on the expression of antigenic proteins given by the obtained electrophoretic profiles.

Evaluación de un método de aglutinación con partículas látex sensibilizadas para el diagnóstico de Gardnerella vaginalis / Evaluation of a sensitized latex particles-based agglutination method for Gardnerella vaginalis diagnosis

Introducción: la vaginosis bacteriana constituye una de las infecciones ginecológicas más prevalentes, asociada a afecciones obstétricas y ginecológicas como son: partos prematuros, bajo peso al nacer, rotura prematura de membranas ovulares, endometritis posparto, inflamación pélvica y riesgo de infertilidad, entre otras. Objetivo: incrementar la calidad del diagnóstico de vaginosis bacteriana. Métodos: se evaluó una técnica de aglutinación por látex para el diagnóstico de Gardnerella vaginalis, empleando un reactivo elaborado en la planta de Medios Diagnosticadores del Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria (CENSA), a través del estudio de 500 muestras de exudados vaginales de mujeres que acudieron al Departamento de Microbiología del Hospital Docente Materno Infantil Diez de Octubre, durante los meses de febrero a julio de 2004. Resultados: la técnica evaluada mostró una sensibilidad de 98,05 por ciento y una especificidad de 89,02 por ciento, al compararla con 3 de los 4 criterios propuestos por Amsel y otros en 1983 para el diagnóstico de la vaginosis bacteriana, complementado con la técnica de coloración de Gram. El valor global de la prueba fue de 91,80 por ciento. Las pacientes cuyas edades oscilaron entre los 20 y 24 años mostraron la mayor incidencia a la infección con 28,04 por ciento de positividad al patógeno. Se diagnosticó la presencia de Gardnerella vaginalis mediante la técnica de látex en 37,8 por ciento de las muestras estudiadas. Conclusión: la técnica resultó rápida y sencilla; se pudo realizar en las propias consultas de ginecología por el personal paramédico y con ello establecer el tratamiento específico el mismo día(AU)

Background: Bacterial vaginosis is one of the most prevailing gynaecological infections associated to obstetric and gynaecological problems such as preterm deliveries, low birhtweight, premature rupture of ovular membranes, postpartum endometritis, pelvic inflammation and risk of sterility, among others. Objective: to increase the quality of diagnosis of bacterial vaginosis. Methods: latex agglutination technique was evaluated for Gardnerella vaginalis diagnosis by using a reagent produced at the Diagnosing Media plant of the National Center of Agricultural Health(known as CENSA) and 500 vaginal smears from females who went for testing to the microbiology department of Diez de Octubre maternal and child hospital from February to July,2004. Results: the evaluated technique showed 98.05 percent sensitivity and 89.02 percent specificity rates when compared to three of the four Amsel et al´s criteria for bacterial diagnosis in 1983, supplemented by the Gram staining method. The overall value of this test was 91.80 percent. The patients aged 20-24 years showed the highest incidence rate of infection, with 28,04 percent positive samples to this pathogen. Gardnerella vaginalis was detected in 37.8 percent of the studied specimens through the latex technique. Conclusion: this technique was rapid and simple; it was performed at the gynaecological service offices by the paramedic staff, and thus, the specific treatment to be followed for this illness was quickly determined(AU)

Evaluación de un método de aglutinación con partículas látex sensibilizadas para el diagnóstico de Gardnerella vaginalis / Evaluation of a sensitized latex particles-based agglutination method for Gardnerella vaginalis diagnosis

Introducción: la vaginosis bacteriana constituye una de las infecciones ginecológicas más prevalentes, asociada a afecciones obstétricas y ginecológicas como son: partos prematuros, bajo peso al nacer, rotura prematura de membranas ovulares, endometritis posparto, inflamación pélvica y riesgo de infertilidad, entre otras. Objetivo: incrementar la calidad del diagnóstico de vaginosis bacteriana. Métodos: se evaluó una técnica de aglutinación por látex para el diagnóstico de Gardnerella vaginalis, empleando un reactivo elaborado en la planta de Medios Diagnosticadores del Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria (CENSA), a través del estudio de 500 muestras de exudados vaginales de mujeres que acudieron al Departamento de Microbiología del Hospital Docente Materno Infantil Diez de Octubre, durante los meses de febrero a julio de 2004. Resultados: la técnica evaluada mostró una sensibilidad de 98,05 por ciento y una especificidad de 89,02 por ciento, al compararla con 3 de los 4 criterios propuestos por Amsel y otros en 1983 para el diagnóstico de la vaginosis bacteriana, complementado con la técnica de coloración de Gram. El valor global de la prueba fue de 91,80 por ciento. Las pacientes cuyas edades oscilaron entre los 20 y 24 años mostraron la mayor incidencia a la infección con 28,04 por ciento de positividad al patógeno. Se diagnosticó la presencia de Gardnerella vaginalis mediante la técnica de látex en 37,8 por ciento de las muestras estudiadas. Conclusión: la técnica resultó rápida y sencilla; se pudo realizar en las propias consultas de ginecología por el personal paramédico y con ello establecer el tratamiento específico el mismo día.

Background: Bacterial vaginosis is one of the most prevailing gynaecological infections associated to obstetric and gynaecological problems such as preterm deliveries, low birhtweight, premature rupture of ovular membranes, postpartum endometritis, pelvic inflammation and risk of sterility, among others. Objective: to increase the quality of diagnosis of bacterial vaginosis. Methods: latex agglutination technique was evaluated for Gardnerella vaginalis diagnosis by using a reagent produced at the Diagnosing Media plant of the National Center of Agricultural Health(known as CENSA) and 500 vaginal smears from females who went for testing to the microbiology department of Diez de Octubre maternal and child hospital from February to July,2004. Results: the evaluated technique showed 98.05 percent sensitivity and 89.02 percent specificity rates when compared to three of the four Amsel et al´s criteria for bacterial diagnosis in 1983, supplemented by the Gram staining method. The overall value of this test was 91.80 percent. The patients aged 20-24 years showed the highest incidence rate of infection, with 28,04 percent positive samples to this pathogen. Gardnerella vaginalis was detected in 37.8 percent of the studied specimens through the latex technique. Conclusion: this technique was rapid and simple; it was performed at the gynaecological service offices by the paramedic staff, and thus, the specific treatment to be followed for this illness was quickly determined.