Comparison of dot-ELISA and standard ELISA for detection of Neisseria meningitidis outer membrane complex-specific antibodies.

Dot-ELISA using the outer membrane complex antigens of Neisseria meningitidis as a target was standardized for rapid detection of meningococcal-specific antibodies in human serum. We investigated the level of meningococcal-specific IgG, IgA, and IgM in serum using dot-ELISA with outer membrane antigens prepared from Neisseria meningitidis serotype B:4.19:P1.15,3,7,9 (a strain isolated from a Brazilian epidemic). The dot-ELISA is based on the same principles as the standard ELISA and is useful for detection of anti-N. meningitidis B antibodies in serum of patients with meningococcal infections. For the assay, outer membrane complexes (OMCs) were absorbed by nitrocellulose membrane and blocked with a 5% skim milk solution. Serum samples were drawn upon hospital admission and during convalescence from patients with meningococcal septicemia, and single samples were drawn from uninfected controls. We retrospectively examined a total of 57 serum samples: 35 from patients infected with N. meningitidis B, 12 from patients infected with Haemophilus influenzae b, and 10 from health individuals. When performed at room temperature, dot-ELISA took approximately four hours to perform, and the optimum antigen concentration was 0.42 microg per dot. The specificity of IgG, IgM, and IgA demonstrates that dot-ELISA using OMCs from N. meningitidis B as a target is suitable for serologic verification of clinically suspected meningococcal disease in patients and for titer determination of antibodies produced during different phases of natural infection. Furthermore, the sensitivity of dot-ELISA was comparable to that of standard ELISA. Overall, dot-ELISA is simple to perform, rapid, and low cost. Further validation of the test as a screening tool is required.

Comparison of dot-ELISA and standard ELISA for detection of Neisseria meningitidis outer membrane complex-specific antibodies

Dot-ELISA using the outer membrane complex antigens of Neisseria meningitidis as a target was standardized for rapid detection of meningococcal-specific antibodies in human serum. We investigated the level of meningococcal-specific IgG, IgA, and IgM in serum using dot-ELISA with outer membrane antigens prepared from Neisseria meningitidis serotype B:4.19:P1.15,3,7,9 (a strain isolated from a Brazilian epidemic). The dot-ELISA is based on the same principles as the standard ELISA and is useful for detection of anti-N. meningitidis B antibodies in serum of patients with meningococcal infections. For the assay, outer membrane complexes (OMCs) were absorbed by nitrocellulose membrane and blocked with a 5 percent skim milk solution. Serum samples were drawn upon hospital admission and during convalescence from patients with meningococcal septicemia, and single samples were drawn from uninfected controls. We retrospectively examined a total of 57 serum samples: 35 from patients infected with N. meningitidis B, 12 from patients infected with Haemophilus influenzae b, and 10 from health individuals. When performed at room temperature, dot-ELISA took approximately four hours to perform, and the optimum antigen concentration was 0.42 µg per dot. The specificity of IgG, IgM, and IgA demonstrates that dot-ELISA using OMCs from N. meningitidis B as a target is suitable for serologic verification of clinically suspected meningococcal disease in patients and for titer determination of antibodies produced during different phases of natural infection. Furthermore, the sensitivity of dot-ELISA was comparable to that of standard ELISA. Overall, dot-ELISA is simple to perform, rapid, and low cost. Further validation of the test as a screening tool is required.

Em busca de lipossomas inteligentes para a administração de drogas para a tuberculose / Searching smart liposomes for drug administration in tuberculosis

A tuberculose pulmonar é uma doença infectocontagiosa, cuja transmissão se dá através das vias aéreas. Possui evolução crônica e é causada no homem pelo Mycobacterium tuberculosis, M. bovis, M. africanum e M. microti. A tuberculose tem ressurgido nos dias atuais de uma forma mais intensa em decorrência do advento especial do vírus HIV, representando um sério problema em saúde pública. O longo tempo em que o paciente deve receber medicação, associado a um grande número de efeitos adversos, é uma das causas de insucesso do tratamento da doença. Esta situação pede medicamentos de liberação modificada para tratamento de tuberculose, afim de se melhorar a adesão ao tratamento aliada a um maior bem-estar para este paciente. Os lipossomas são modernos veículos da medicina. Quando em vacinas, eles funcionam como uma alternativa às formas de subunidades e aos adjuvantes clássicos, gerando produtos eficazes, de efeito duradouro, sem causar reações de hipersensibilidade e de possível liofilização. Estas formas farmacêuticas são muito específicas, conseguindo atingir até mesmo regiões bem determinadas, como receptores celulares, além de gerarem menos efeitos secundários. Os lipossomas têm menos toxicidade uma vez que necessitam de doses pequenas para cumprirem seu efeito terapêutico. O objetivo deste artigo científico é desenvolver lipossomas contendo em seu interior um importante fármaco anti-tuberculoso, a rifampicina.

Produção e Aplicação de Novos Anticorpos Monoclonais na Padronização de Técnicas Imunológicas para a Detecção das Bactérias Escherichia coli O157: H7, Vibrio colerae O1 e Toxinas Stx1, Stx2 em Alimentos / Production and Aplication of New Monoclonal Antibodies in the Padronization of Immunological Methods for the Detection of the Bacteria Escherichia coli O157: H7 Vibrio colerae O1 and Stx1, Stx2 toxins in food

O presente trabalho descreve a produção e utilização de novos anticorpos monoclonais para a detecção das bactérias Vibrio cholerae, Escherichia coli O157:H7 assim como para as toxinas Stx1 e Stx2 em amostras de alimentos. Testes imunológicos como Dot-ELISA, ELISA de captura e aglutinação utilizando partículas de látex ligadas aos anticorpos monoclonais produzidos estão em fase de avaliação. Os limites e padrões microbiológicos que devem ser adotados para garantir uma correta interpretação sobre os resultados das análises microbiológicas, os fatores que contribuem para a ocorrência de surtos de enfermidades de origem alimentar demandam a implantação de sistemas de detecção de alta sensibilidade e especificidade, características estas das técnicas imunológicas. Os dados indicam que os ensaios de Dot-ELISA, ELISA de captura e aglutinação utilizando partículas de látex são apropriados dependendo da amostra de alimento analisada.

Aplicação de Anticorpos Monoclonais na Detecção de Enteropatógenos em Amostras de Origem Clínica, Alimentar e Ambiental para a Produção de Kits para Imunodiagnóstico / Monoclonal Antibodies in the Detection of Enteropatogens in Clinical, Food and Environmental Samples for the production of diagnostic kits

A detecção de microrganismos patogênicos em amostras clínicas, de alimento e de água é uma etapa extremamente importante para reduzir e/ou evitar a ocorrência de doenças veiculadas por alimentos. Os métodos tradicionais de cultura para a detecção de bactérias patogênicas normalmente são demorados, havendo, portando, a necessidade de implantar métodos rápidos, sensíveis, específicos, simples e de baixo custo. Métodos rápidos, como a aglutinação de látex, podem ser extremamente úteis aos serviços de saúde para investigar, diagnosticar e evitar surtos de doenças veiculadas pelos alimentos. Anticorpos monoclonais utilizados em sistemas de testes rápidos, como, por exemplo, aglutinação de latex, ELISA, imunofluorescência e separação magnética, podem se constituir em importantes ferramentas a serem utilizadas nos serviços de saúde pública, reduzindo o impacto das enfermidades veiculadas pelos alimentos.

Detecção de Vibrio cholerae O1 em ostras utizando anticorpo monoclonal em ensaio de aglutinação / Use of monoclonal antibody for detecting Vibrio cholerae O1 in oysters by means of agglutination test

O V. cholerae sorogrupo O1 é o agente etiológico da cólera pandêmica, sendo considerado dentre os víbrios patogênicos ao homem, o mais importante. Os sintomas das infecções por esta bactéria variam de diarréia branda a doença grave podendo até levar a óbito. Dentre os alimentos marinhos, as ostras representam uma das principais vias na transmissão de cólera. Os métodos convencionais para detecção do V. cholerae O1 são laboriosos e demorados havendo, portando, a necessidade de implantar métodos rápidos, sensíveis, específicos, simples e de baixo custo. O objetivo deste estudo foi avaliar a técnica de aglutinação de partículas de látex sensibilizadas com anticorpo monoclonal (AcMo) na detecção de V. cholerae O1 em ostras, contaminadas laboratorialmente. A técnica de aglutinação com látex sensibilizado detectou 1,2x102 UFC da bactéria (diluição 1/32). As amostras de ostras utilizadas para contaminação originalmente não continham V. cholerae, mas outras bactérias foram detectadas, tais como: Proteus mirabilis, Pseudomonas spp. e outros víbrios. O presente estudo demonstrou que a detecção de V. cholerae em alimentos foi reduzida para 18 horas, considerando que pela metodologia convencional a análise é finalizada, em média, em 7 dias. O AcMo produzido apresentou uma sensibilidade eespecificidade de 100% para V. cholerae.