RESUMO
Se desarrolló un método de Elisa indirecto para el pesquisaje masivo de anticuerpos de ratón contra el virus de la inmunodeficiencia humanos (VIH-1) en sobrenadantes de hibridomas y sueros de animales hiperinmunes. Para la normalización del sistema se evaluaron la concentración de antígeno adsorbida a la fase sólida, la solución tampón diluyente de las muestras, las disoluciones óptimas para cada tipo de muestras y el período de incubación de éstos. Se determinó que una concentración de 5 *g/mL de proteinas virales semipurificadas, una solución tampón de fosfato pH 7,4; 0,1 con tween-20 al 0,05
y albúmina bovina sérica al 1,5
, disoluciones del suero hiperinmune(controles +) y no inmunes (controles -) de 1:2500 y un tiempo de incubación de 18 h a 4-C, ofrecián los mejores resultados. Se obtienen coeficientes de variación interplacas intraplaca por debajo del 5
para los controles positivo/negativo es mayor de 10 en todos los casos
Assuntos
Camundongos , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática , Anticorpos Monoclonais , HIV-1RESUMO
Se desarrolló un método de Elisa indirecto para el pesquisaje masivo de anticuerpos de ratón contra el virus de la inmunodeficiencia humanos (VIH-1) en sobrenadantes de hibridomas y sueros de animales hiperinmunes. Para la normalización del sistema se evaluaron la concentración de antígeno adsorbida a la fase sólida, la solución tampón diluyente de las muestras, las disoluciones óptimas para cada tipo de muestras y el período de incubación de éstos. Se determinó que una concentración de 5 *g/mL de proteinas virales semipurificadas, una solución tampón de fosfato pH 7,4; 0,1 con tween-20 al 0,05% y albúmina bovina sérica al 1,5%, disoluciones del suero hiperinmune(controles +) y no inmunes (controles -) de 1:2500 y un tiempo de incubación de 18 h a 4-C, ofrecián los mejores resultados. Se obtienen coeficientes de variación interplacas intraplaca por debajo del 5% para los controles positivo/negativo es mayor de 10 en todos los casos
Assuntos
Camundongos , Anticorpos Monoclonais , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática , HIV-1RESUMO
Se utilizó el sistema conservatorio de detección de anticuerpos al VIH-1 "DAVIH-blot", basado en la inmunoelectrotransferencia y desarrollado en nuestros laboratorios como sistema de confirmación para sueros humanos, como sistema de referencia para normalizar una variante adecuada para el estudio de sueros de ratones hiperinmunes, líquidos ascíticos y sobrenadante de cultivo de hibridomas de ratón. Se compararon las siguientes variaciones de la etapa inmunológica: soluciones amortiguadoras para la dilución de las muestras y conjugados, soluciones bloqueadoras, temperatura y tiempo de incubación, y se determinaron las condiciones experimentales óptimas: usar como solución amortiguadora para la dilución de las muestras y conjugados, una solución de Tris-0,02M-NaCl0,5 con Tween-20 al 0,05
(TNT), no usar solucion bloqueadora antes de la adición del conjugado e incubar el antisuero conjugado 1 hora a 37 -C
Assuntos
Camundongos , Animais , Líquido Ascítico , HIV , Anticorpos Monoclonais , HibridomasRESUMO
Se utilizó el sistema conservatorio de detección de anticuerpos al VIH-1 "DAVIH-blot", basado en la inmunoelectrotransferencia y desarrollado en nuestros laboratorios como sistema de confirmación para sueros humanos, como sistema de referencia para normalizar una variante adecuada para el estudio de sueros de ratones hiperinmunes, líquidos ascíticos y sobrenadante de cultivo de hibridomas de ratón. Se compararon las siguientes variaciones de la etapa inmunológica: soluciones amortiguadoras para la dilución de las muestras y conjugados, soluciones bloqueadoras, temperatura y tiempo de incubación, y se determinaron las condiciones experimentales óptimas: usar como solución amortiguadora para la dilución de las muestras y conjugados, una solución de Tris-0,02M-NaCl0,5 con Tween-20 al 0,05 %(TNT), no usar solucion bloqueadora antes de la adición del conjugado e incubar el antisuero conjugado 1 hora a 37 -C