[Comparison of three microbiological methods for detection of expanded-spectrum betalactamases in Enterobacteriaceae isolated in Santa Fe (Argentina)]. / Comparación de tres métodos microbiológicos para la detección de betalactamasas de espectro extendido en enterobacterias aisladas en Santa Fe (Argentina).

INTRODUCTION: Expanded-spectrum betalactamases (ESBLs) are the main source of resistance to oxyimino cephalosporins and monobactams in Enterobacteriaceae. Most of them derive from TEM or SHV, however the incidence of other families like CTX-M, OXA and PER has increased. In Argentina, the most frequent ESBL in Enterobacteriaceae is CTX-M-2. This specific circumstance, which differs from the situation in the Northern Hemisphere, motivated us to study new diagnostic strategies for the detection of ESBLs in our region. METHOD: Microbiological ESBL detection was performed by double-disk synergy tests, cefotaxime and ceftazidime disks with and without clavulanic acid (NCCLS), and cefotaxime and ceftazidime disks in Müeller-Hinton agar supplemented with lithium clavulanate (MH-cla). Betalactamases were characterized by isoelectric focusing, hydrolysis profile and PCR amplification. RESULTS: Among 575 clinical isolates of Enterobacteriaceae, 14% were oxyimino cephalosporin-resistant. Two different ESBLs were detected in 31 resistant strains: CTX-M-2 (28) and PER-2 groups (3). The double-disk synergy test was the least sensitive method for ESBL detection. ESBLs were detected by the other two methods in all isolates with the use of cefotaxime disks, but not with ceftazidime disks. CONCLUSION: The microbiological method employing MH-cla with cefotaxime disks had a sensitivity and specificity comparable to the referral test using the same antibiotic proposed by the NCCLS for the detection of ESBLs.

Resistencia Bacteriana: Análisis de mecanismos de resistencia prevalentes

Se presenta una relación de resultados alcanzados desde el pedido de la Beca, a mediados del año pasado. Dichos resultados fueron, en parte, demorados en su consecución por las dificultades que implicó la indeterminación en la provisión de fondos, ya que solo ha logrado obtenerse, hasta el momento, el 50 por ciento de la financiación para el período de la ANPCYT, y la demora en la realización de algunos viajes por parte de los becarios, motivados también en la situación de incertidumbre del año pasado. De cualquier forma, los resultados alcanzados han sido satisfactorios, encontrándose varios trabajos ya redactados y otros enviados. En relación a la carbapenemasa de clase molecular A identificada en un aislamiento de Enterobacter cloacae del Hospital Israelita de Buenos Aires, pudo determinarse que se trata de una varíente alelica de nmc-A (estructural para la carbapenemasa) con un gen regulatorío nmc-R, cuya estructura esta esencialmente conservada dentro de la estructura de los reguladores de la familia LYS, al igual que los Amp-R que regulan la expresión de la "beta-lactamasa cromosómica" de las enterobacterias, participando potencialmente los otros genes que intervienen en su regulación (amp~D, amp-G). Es notable una sustitución, en este regulador, de un aminoácido que interrumpe una estructura de alfa hélice conservada en la familia, constituyendo una potencial herramienta para el análisis topológico de esta proteína (un trabajo está en prensa). Si bien en nuestro país no se había detectado hasta el momento otras cefotaximasas ademas de CTX-M-2, actualmente se reconocen mas de 25 variantes dentro de esta familia. En relación al análisis estructural de las cefotaximasas y las enzimas potencialmente relacionadas, hemos realizado su agrupamiento en cuatro grupos de homología, habiendo diseñado primers que permiten su agrupamiento tentativo. Hemos agrupado dentro de la familia a enzimas cromosómicas de kluyveras (ver mas abajo), y proponemos a una de ellas como el origen de un grupo que no tiene raiz conocida, (un trabajo se encuentra en redacción). En colaboración con la Universidad de Misiones, realizamos actividades sobre dos líneas de trabajo, una esencialmente semejante a los relevamientos epidemiológicos de mecanismos de resistencia a cefalosporinas de tercera generación realizados en Buenos Aires, habiendo encontrado también como prevalente CTX-M2 y enzimas SHV-derivadas. Es notable la conservación de CTX-M-2, ya que regiones vecinas de Brasil, tienen otras enzimas como prevalentes. La segunda línea está relacionada con la diseminación de carbapenemasas semejantes a Cph-A, una carbapenemasa cromosómica de las aeromonas, esencialmente a través de alimentos y aguas. En un trabajo en redacción se da relación del hallazgo de aeromonas con esta enzima, pero también de otras con enzimas (sus genes) no detectables por PCR, por lo que enfrentamos posiblemente la emergencia de nuevas enzimas menos relacionadas evolutivamente.

Resistencia Bacteriana: Análisis de mecanismos de resistencia prevalentes

Se presenta una relación de resultados alcanzados desde el pedido de la Beca, a mediados del año pasado. Dichos resultados fueron, en parte, demorados en su consecución por las dificultades que implicó la indeterminación en la provisión de fondos, ya que solo ha logrado obtenerse, hasta el momento, el 50 por ciento de la financiación para el período de la ANPCYT, y la demora en la realización de algunos viajes por parte de los becarios, motivados también en la situación de incertidumbre del año pasado. De cualquier forma, los resultados alcanzados han sido satisfactorios, encontrándose varios trabajos ya redactados y otros enviados. En relación a la carbapenemasa de clase molecular A identificada en un aislamiento de Enterobacter cloacae del Hospital Israelita de Buenos Aires, pudo determinarse que se trata de una varíente alelica de nmc-A (estructural para la carbapenemasa) con un gen regulatorío nmc-R, cuya estructura esta esencialmente conservada dentro de la estructura de los reguladores de la familia LYS, al igual que los Amp-R que regulan la expresión de la "beta-lactamasa cromosómica" de las enterobacterias, participando potencialmente los otros genes que intervienen en su regulación (amp~D, amp-G). Es notable una sustitución, en este regulador, de un aminoácido que interrumpe una estructura de alfa hélice conservada en la familia, constituyendo una potencial herramienta para el análisis topológico de esta proteína (un trabajo está en prensa). Si bien en nuestro país no se había detectado hasta el momento otras cefotaximasas ademas de CTX-M-2, actualmente se reconocen mas de 25 variantes dentro de esta familia. En relación al análisis estructural de las cefotaximasas y las enzimas potencialmente relacionadas, hemos realizado su agrupamiento en cuatro grupos de homología, habiendo diseñado primers que permiten su agrupamiento tentativo. Hemos agrupado dentro de la familia a enzimas cromosómicas de kluyveras (ver mas abajo), y proponemos a una de ellas como el origen de un grupo que no tiene raiz conocida, (un trabajo se encuentra en redacción). En colaboración con la Universidad de Misiones, realizamos actividades sobre dos líneas de trabajo, una esencialmente semejante a los relevamientos epidemiológicos de mecanismos de resistencia a cefalosporinas de tercera generación realizados en Buenos Aires, habiendo encontrado también como prevalente CTX-M2 y enzimas SHV-derivadas. Es notable la conservación de CTX-M-2, ya que regiones vecinas de Brasil, tienen otras enzimas como prevalentes. La segunda línea está relacionada con la diseminación de carbapenemasas semejantes a Cph-A, una carbapenemasa cromosómica de las aeromonas, esencialmente a través de alimentos y aguas. En un trabajo en redacción se da relación del hallazgo de aeromonas con esta enzima, pero también de otras con enzimas (sus genes) no detectables por PCR, por lo que enfrentamos posiblemente la emergencia de nuevas enzimas menos relacionadas evolutivamente.

Resistencia Bacteriana: Análisis de mecanismos de resistencia prevalentes

Se presenta una relación de resultados alcanzados desde el pedido de la Beca, a mediados del año pasado. Dichos resultados fueron, en parte, demorados en su consecución por las dificultades que implicó la indeterminación en la provisión de fondos, ya que solo ha logrado obtenerse, hasta el momento, el 50 por ciento de la financiación para el período de la ANPCYT, y la demora en la realización de algunos viajes por parte de los becarios, motivados también en la situación de incertidumbre del año pasado. De cualquier forma, los resultados alcanzados han sido satisfactorios, encontrándose varios trabajos ya redactados y otros enviados. En relación a la carbapenemasa de clase molecular A identificada en un aislamiento de Enterobacter cloacae del Hospital Israelita de Buenos Aires, pudo determinarse que se trata de una varíente alelica de nmc-A (estructural para la carbapenemasa) con un gen regulatorío nmc-R, cuya estructura esta esencialmente conservada dentro de la estructura de los reguladores de la familia LYS, al igual que los Amp-R que regulan la expresión de la "beta-lactamasa cromosómica" de las enterobacterias, participando potencialmente los otros genes que intervienen en su regulación (amp~D, amp-G). Es notable una sustitución, en este regulador, de un aminoácido que interrumpe una estructura de alfa hélice conservada en la familia, constituyendo una potencial herramienta para el análisis topológico de esta proteína (un trabajo está en prensa). Si bien en nuestro país no se había detectado hasta el momento otras cefotaximasas ademas de CTX-M-2, actualmente se reconocen mas de 25 variantes dentro de esta familia. En relación al análisis estructural de las cefotaximasas y las enzimas potencialmente relacionadas, hemos realizado su agrupamiento en cuatro grupos de homología, habiendo diseñado primers que permiten su agrupamiento tentativo. Hemos agrupado dentro de la familia a enzimas cromosómicas de kluyveras (ver mas abajo), y proponemos a una de ellas como el origen de un grupo que no tiene raiz conocida, (un trabajo se encuentra en redacción). En colaboración con la Universidad de Misiones, realizamos actividades sobre dos líneas de trabajo, una esencialmente semejante a los relevamientos epidemiológicos de mecanismos de resistencia a cefalosporinas de tercera generación realizados en Buenos Aires, habiendo encontrado también como prevalente CTX-M2 y enzimas SHV-derivadas. Es notable la conservación de CTX-M-2, ya que regiones vecinas de Brasil, tienen otras enzimas como prevalentes. La segunda línea está relacionada con la diseminación de carbapenemasas semejantes a Cph-A, una carbapenemasa cromosómica de las aeromonas, esencialmente a través de alimentos y aguas. En un trabajo en redacción se da relación del hallazgo de aeromonas con esta enzima, pero también de otras con enzimas (sus genes) no detectables por PCR, por lo que enfrentamos posiblemente la emergencia de nuevas enzimas menos relacionadas evolutivamente.