Preparation of a three-dimensional extracellular matrix by decellularization of rabbit livers.

INTRODUCTION: the availability of transplantable livers is not sufficient to fulfill the current demand for grafts, with the search for therapeutic alternatives having generated different lines of research, one of which is the use of decellularized three-dimensional biological matrices and subsequent cell seeding to obtain a functional organ. OBJECTIVE: to produce a decellularization protocol from rabbit liver to generate a three-dimensional matrix. METHODS: a combination of physical, chemical (Triton X-100 and SDS) and enzymatic agents to decellularize rabbit livers was used. After 68 h of retrograde perfusion, a decellularized translucent matrix was generated. To evaluate if the decellularization protocol was successful, with the extracellular matrix being preserved, we carried out histological (light microscopy and scanning electron microscopy) and biochemical (DNA quantification) studies. RESULTS: the decellularization process was verified by macroscopic observation of the organ using macroscopic staining, which revealed a correct conservation of bile and vascular trees. A microscopic observation corroborated these macroscopic results, with the hematoxylin-eosin staining showing no cells or nuclear material and the presence of a portal triad. Wilde´s staining demonstrated the conservationof reticulin fibers in the decellularized matrix. In addition, scanning electron microscopy revealed a preserved Glisson´s capsule and a decellularized matrix, with the DNA quantification being less than 10 % in the decellularized liver compared to control. Finally, the time taken to develop the decellularization protocol was less than 96 hours. CONCLUSIONS: the proposed decellularization protocol was correct, and was verified by an absence of cells. The hepatic matrix had preserved vascular and bile ducts with a suitable three-dimensional architecture permitting further cell seeding.

Preparación de una matriz extracelular tridimensional por descelularización de hígados de conejos / Preparación de una matriz extracelular tridimensional por descelularización de hígados de conejos / Preparation of a three-dimensional extracellular matrix by decellularization of rabbit livers

Introducción: el número de hígados trasplantables es insuficiente para satisfacer las necesidades actuales de la demanda de injerto. La búsqueda de alternativas terapéuticas ha generado diferentes líneas de investigación, una de ellas es la utilización de matrices biológicas tridimensionales descelularizadas y la posterior siembra celular para obtener un órgano funcional. Objetivo: obtención de un protocolo de descelularización de hígado de conejo que genere una matriz hepática tridimensional. Métodos: una combinación de detergentes (Triton X-100 y SDS), agentes físicos y enzimáticos se utilizaron para descelularizar hígados de conejo. Los órganos se pefundieron en forma retrógrada con distintos agentes químicos durante 68 horas. Luego los hígados se examinaron por técnicas morfológicas (microscopía óptica y electrónicade barrido) y bioquímicas (cuantificación de ADN) para evaluar una correcta descelularización así como la obtención de una matriz extracelular preservada. Resultados: la observación macroscópica del órgano permitió inferir la descelularización del mismo. Las tinciones macroscópicas utilizadas mostraron una correcta conservación de los árboles biliar y vascular. Por otro lado, la observación microscópica del hígado permitió corroborar los resultados macroscópicos observados, la tinción de hematoxilina-eosina mostró ausencia de células y de material nuclear así como la presencia de la tríada portal. La tinción de Wilde evidenció la conservación de las fibras de reticulina en la matriz descelularizada. Asimismo, la microscopía electrónica de barrido reveló una cápsula de Glisson conservada y la descelularización de la cuantificación de ADN fue inferior al 10 % en el hígado descelularizado con respecto al hígado control. Finalmente, el tiempo utilizado para la descelularización fue inferior a las 96 horas. Conclusiones: el protocolo de descelularización propuesto fue apropiado ya que se verificó una ausencia de células y una matriz hepática con conductos vasculobiliares conservados y con una arquitectura tridimensional adecuada para una futura siembra celular(AU)

Introduction: the availability of transplantable livers is not sufficient to fulfill the current demand for grafts, with the search for therapeutic alternatives having generated different lines of research, one of which is the use of decellularized three-dimensional biological matrices and subsequent cell seeding to obtain a functional organ. Objective: to produce a decellularization protocol from rabbit liver to generate a three-dimensional matrix. Methods: a combination of physical, chemical (Triton X-100 and SDS) and enzymatic agents to decellularize rabbit livers was used. After 68 h of retrograde perfusion, a decellularized translucent matrix was generated. To evaluate if the decellularization protocol was successful, with the extracellular matrix being preserved, we carried out histological (light microscopy and scanning electron microscopy) and biochemical (DNA quantification) studies. Results: the decellularization process was verified by macroscopic observation of the organ using macroscopic staining, which revealed a correct conservation of bile and vascular trees. A microscopic observation corroborated these macroscopic results, with the hematoxylin- eosin staining showing no cells or nuclear material and the presence of a portal triad. Wilde’s staining demonstrated the conservation of reticulin fibers in the decellularized matrix. In addition, scanning electron microscopy revealed a preserved Glisson’s capsule and a decellularized matrix, with the DNA quantification being less than 10 % in the decellularized liver compared to control. Finally, the time taken to develop the decellularization protocol was less than 96 hours. Conclusions: the proposed decellularization protocol was correct, and was verified by an absence of cells. The hepatic matrix had preserved vascular and bile ducts with a suitable three-dimensional architecture permitting further cell seeding(AU)

Factores protectores en la prevencion del consumo de alcohol en los adolescentes / Protective factors in preventing alcohol use in teens

El consumo de alcohol y la falta de factores protectores y de prevención en los adolescentes suscita preocupación social. Por un lado, ciertas características de este período evolutivo pueden facilitar el consumo de alcohol y otras drogas. Por otro lado, el consumo de estas sustancias suele iniciarse en esta etapa de la vida. En el trabajo de investigación se analizaron las tendencias actuales del consumo de alcohol y otras drogas en la adolescencia. Se contienden los problemas derivados del abuso de alcohol que afectan de forma especial a los adolescentes. Se analizaron los factores de riesgo del consumo abusivo, exponiendo un modelo integrador. Concluyéndose con una propuesta de intervención para ser aplicada en contextos educativos, en la comunidad; con participación de todos los sectores sociales a intervenir en programas preventivos.

Alcohol consumption and the lack of protecting and prevention factors in teenagers bring social awareness. On one hand, certain characteristics of this evolution period can facilitate the consumption of alcohol and other drugs. On the other hand, the onset of consumption of this substances tend to start in this period of a persons lifetime. In this investigation we analyzed the tendencies of alcohol consumption and other drugs in teenagers. We included the problems derived from alcohol abuse that specially affect teenagers. We considered the problems derived from the abuse of alcohol that affect teenagers in a special way. We analyzed the risk factors of abusive consumption, exposing an integral model. Concluding with an intervention proposal to be applied in the context of education, in the community, with participation of all social sectors that can intervene in public preventive programs.

Factores protectores en la prevencion del consumo de alcohol en los adolescentes / Protective factors in preventing alcohol use in teens

El consumo de alcohol y la falta de factores protectores y de prevención en los adolescentes suscita preocupación social. Por un lado, ciertas características de este período evolutivo pueden facilitar el consumo de alcohol y otras drogas. Por otro lado, el consumo de estas sustancias suele iniciarse en esta etapa de la vida. En el trabajo de investigación se analizaron las tendencias actuales del consumo de alcohol y otras drogas en la adolescencia. Se contienden los problemas derivados del abuso de alcohol que afectan de forma especial a los adolescentes. Se analizaron los factores de riesgo del consumo abusivo, exponiendo un modelo integrador. Concluyéndose con una propuesta de intervención para ser aplicada en contextos educativos, en la comunidad; con participación de todos los sectores sociales a intervenir en programas preventivos.(AU)

Alcohol consumption and the lack of protecting and prevention factors in teenagers bring social awareness. On one hand, certain characteristics of this evolution period can facilitate the consumption of alcohol and other drugs. On the other hand, the onset of consumption of this substances tend to start in this period of a persons lifetime. In this investigation we analyzed the tendencies of alcohol consumption and other drugs in teenagers. We included the problems derived from alcohol abuse that specially affect teenagers. We considered the problems derived from the abuse of alcohol that affect teenagers in a special way. We analyzed the risk factors of abusive consumption, exposing an integral model. Concluding with an intervention proposal to be applied in the context of education, in the community, with participation of all social sectors that can intervene in public preventive programs.(AU)

Ampliaciones de una mediateca digital de muestras de laboratorio histopatológico / Extensions of a digital library of laboratory samples histopathology

El objetivo general de acción de este proyecto es ampliar una mediateca digital consistente en imágenes de muestras histopatológicas obtenidas en la 2da. Cátedra de Biología Celular, Histología y Embriología de la Facultad de Ciencias Medicas Universidad Nacional de Córdoba, Argentina. Se proponen tres líneas de trabajo principales: 1- integración de imágenes y documentos científicos (abstract de artículos) mediante el uso de términos ontológicos, 2- articulación del listado de imágenes y documentos científicos con herramientas de acceso a la información multimedia (imágenes y texto), 3- incorporación de una traducción simi-automática ingles-español usando herramientas libres de traducción automática de lengua origen castellano a lengua de origen ingles. Creemos que la asociación de diferentes herramientas de gestión del conocimiento permitirán ampliar una mediateca digital de muestras de laboratorio correspondientes a resultados de nuestros de trabajos de investigación subsidiados por organismos oficiales. También para que los contenidos de este proyecto estén disponibles para un amplio usuario de las Ciencias de la Salud con diferentes niveles de alfabetización funcional. Por último nuestro proyecto permitirá la inclusión de profesionales de la Escuela de Bibliotecología y de la Facultad de Lenguas de nuestra Universidad Pública.

The overall objective of action of this project is to expand a digital media library consisting of images of histopathological samples obtained in the second department of Cell Biology, Histology and Embryology, Faculty of Medical Sciences, National University of Cordoba, Argentina. We suggests three lines of work: 1 - integration of images and scientific papers (abstract of articles) by using ontological terms, 2 - joint list of images and scientific papers with tools to access multimedia information (pictures and text ), 3 - incorporation of automatic translation English-Spanish using free software tools. We believe that the combination of different knowledge management tools allows expanding a digital media library of samples for laboratory results of our research work subsidized by government agencies. Also for the contents of this project to be available for any user of the Health Sciences with different levels of functional literacy. Finally our project will enable the inclusion of professionals from the School of Library and the Faculty of Languages of our public universities.

Efecto de la microcirculación durante la hemodilución con soluciones de Hemoglobina recombinante / Effect of the microtraffic during the hemodilución with solutions of recombinant Hemoglobin

Las soluciones de hemoglobinas pueden extender los niveles de hemodilución a niveles de hematocrito menores cuando son utilizados en lugar de los coloides, pero pueden provocar una vasoconstricción que interfiere con la perfusión microvascular. Mutaciones sitio-específicas en el bolsillo hem de la hemoglobina reducen significativamente la capacidad de secuestro de ON (Oxido Nítrico) por lo que estas soluciones producen menos efectos hemodinámicos adversos. Se utilizaron 28 Hamsters Sirios Dorados con cámara dermoplegada y fueron hemodiluídos isovolumétricamente con rHb2.0 (la g/dl; con capacidad reducida de secuestro de ON; Baxter Healthcare, Boulder, Co, USA), o con rHb1.1 (10.g/dl; con capacidad descontrolada de secuestro de ON; Baxter Healthcare, Boulder, Co, USA), o con SAH (Sero Albúmina Humana - Baxter Healthcare, Boulder, Co, USA), o Dextrano 60 (6%; Biophausia, Uppsala, Suecia), hasta llegar a un hematocrito del 30%. Se determinó los valores de la perfusión microvascular por medio de microscopía intravital. Se monitorearon los parámetros de gases en sangre, macrohemodinámicos y de laboratorio. La hemodilución con coloides Dextrano 60 produjo una disminución en la presión sanguínea, frecuencia cardíaca incrementada, vasodilatación arteriolar y perfusión capilar normal.