Impact of quercetin, carnosine, and ozone in the cryopreservation on Nellore (Bos indicus) semen.

The objective of this study was to reduce the effects of cryoinjury caused in bovine semen by cryopreservation. Ejaculates were collected from Nellore bulls and subjected to freezing in C (control), ozone (15, 30, and 60 µg mL-1 of ozone), quercetin (25, 50, and 100 µg mL-1 of quercetin), and carnosine groups (100, 200, and 300 ng mL-1 of carnosine). Samples were evaluated post-thaw (M0) and post-rapid thermoresistance test (M30) for sperm kinetics (total motility, progressive motility, curvilinear speed, linearity and amplitude of lateral head displacement) and cell structure viability (plasma membrane integrity, acrosomal integrity, mitochondrial potential, membrane fluidity, and lipid peroxidation). There were no differences (P > 0.05) between the control, quercetin, and carnosine-treated groups for the parameters evaluated at M0 and M30. In turn, supplementation with ozone resulted in lower values for sperm kinetics (P < 0.05) and lower mitochondrial potential at M30 (P < 0.05). Quercetin and carnosine at the concentrations used did not promote significant gains in frozen semen, nor did they demonstrate cytotoxicity. We expected to obtain positive results with the use of ozone. Nonetheless, the addition was harmful to the parameters of sperm kinetics, and its effect was not observed as a possible pro-antioxidant. We believe that the fact that the gas did not harm the sperm structure opens avenues for tests with lower dosages, since, by reducing its concentration, we could minimize the damage to sperm kinetics.

Impact of quercetin, carnosine, and ozone in the cryopreservation on Nellore (Bos indicus) semen

The objective of this study was to reduce the effects of cryoinjury caused in bovine semen by cryopreservation. Ejaculates were collected from Nellore bulls and subjected to freezing in C (control), ozone (15, 30, and 60 µg mL-1 of ozone), quercetin (25, 50, and 100 µg mL-1 of quercetin), and carnosine groups (100, 200, and 300 ng mL-1 of carnosine). Samples were evaluated post-thaw (M0) and post-rapid thermoresistance test (M30) for sperm kinetics (total motility, progressive motility, curvilinear speed, linearity and amplitude of lateral head displacement) and cell structure viability (plasma membrane integrity, acrosomal integrity, mitochondrial potential, membrane fluidity, and lipid peroxidation). There were no differences (P > 0.05) between the control, quercetin, and carnosine-treated groups for the parameters evaluated at M0 and M30. In turn, supplementation with ozone resulted in lower values for sperm kinetics (P < 0.05) and lower mitochondrial potential at M30 (P < 0.05). Quercetin and carnosine at the concentrations used did not promote significant gains in frozen semen, nor did they demonstrate cytotoxicity. We expected to obtain positive results with the use of ozone. Nonetheless, the addition was harmful to the parameters of sperm kinetics, and its effect was not observed as a possible pro-antioxidant. We believe that the fact that the gas did not harm the sperm structure opens avenues for tests with lower dosages, since, by reducing its concentration, we could minimize the damage to sperm kinetics.(AU0

Comportamento sócio-sexual e seus problemas no desempenho de touros / Social-sexual behaviour and its problems in performance of bulls

Esta revisão pretende discorrer sobre a estrutura social dos bovinos e sua relação com o comportamento sexual, a fisiologia reprodutiva e a fertilidade de touros a campo e em regime de coleta de sêmen, levando em consideração as diferentes fases do desenvolvimento sexual, os processos de aprendizado envolvidos e os efeitos do estresse social. À luz do conhecimento etológico serão feitas reflexões sobre o fitness (sucesso reprodutivo) de touros mantidos em manejo extensivo de criação e touros em Centrais de Coleta e Processamento de Sêmen (CCPS), a organização arquitetônica dos piquetes e área de coleta e a influência da proximidade de outros touros sobre a qualidade de todo o processo.(AU)

This review intends to discuss the cattle social structure and its relationship with sexual behavior, reproductive physiology, and fertility of bulls in the field and under semen collection regime, taking into account the distinct stages of sexual development, the learning processes involved and the effects of social stress. In the light of ethological science, we will reflect on the fitness (reproductive success) of bulls in extensive breeding management or bulls in Semen Collection and Processing Centers, their architectural organization of paddocks and collection area, and the influence of the proximity of other bulls on the quality of the entire process.(AU)

Estradiol Priming Potentiates the Kisspeptin-Induced Release of LH in Ovariectomized Cows.

The present study examined whether priming with estradiol benzoate (EB) for 12 h increased both the peak and duration of LH release in response to kisspeptin (KISS1, KP) in cows. In a Latin square design, ovariectomized Nelore cows (n = 8) received: Control, i.m. 4 mL of 0.9% saline; KP, i.m. 4 mg murine KISS1-10; EBKP, i.m. 4 mg KISS1-10 + i.m. 2 mg EB simultaneously; EB12KP, i.m. 4 mg KISS1-10 + i.m. 2 mg EB 12 h before KISS1-10. Concentrations of LH were determined in blood samples obtained at time 0 (treatment), 20, 40, 60, 90, 120, 150, 180, 210 and 270 min. Concentrations of LH were analyzed by Proc GLIMMIX for repeated measures. In case of significance, the adjusted Tukey test was used to test for differences among treatments. GraphPad 8.0 PRISM® was used to determine the area under the LH-response curve (AUC) after injection of KISS1-10. Plasma LH remained relatively constant throughout sampling after treatment with saline. The peak in LH after injection of KISS1-10 occurred at 20 min in Groups KP and EBKP and at 40 min in Group EB12KP. The peak LH response (∆LH, ng/mL) was greater (p < 0.01) in Group EB12KP (5.6 ± 0.9) than in Groups KP (2.4 ± 0.9) and EBKP (3.5 ± 0.9), which did not differ. AUC (LH ng/mL*min) was greater (p = 0.02) in Group EB12KP (439 ± 73) than in Groups KP (176 ± 73) and EBKP (241 ± 73), with the latter two groups not differing. The findings indicated that 12 h priming with EB increased both the peak and duration of the LH response to treatment with KISS1. The incorporation of EB priming and KISS1 could improve the efficiency of estrus synchronization with fixed-time AI in cows. This would have an important practical application in assisted breeding in beef and dairy cattle.

P4/E2-based protocol for synchronisation of ovulation of mares during the breeding and non-breeding season.

Dispersed ovulation at the breeding (BS) and anestrus at non-breeding season (NBS) are major impediments to embryo transfer and insemination programmes. The present study aimed to evaluate a hormonal P4/E2-based synchronisation protocol in mares during both the BS and the NBS on ovarian/follicle behaviour. Mares underwent a hormone protocol to synchronise their ovulation during the BS (n = 8) and NBS (n = 10), starting (D0) with the insertion of an intravaginal device containing 1 g of P4 and 7 mg Estradiol Benzoate IM. (EB). On D9, the device was removed and injected with 0.25 mg of cloprostenol sodic IM and 2 mg of EB IM. Follicular behaviour was evaluated using a daily transrectal ultrasound (24/24 h) from D0 until ovulation. When the dominant follicle (DF) measured at least 35 mm, females were injected with 0.25 mg of gonadorelin acetate IM to induce ovulation. The DF on D0 were similar in animals between BS (18.9 ± 8.4 mm) and NBS (23.7 ± 9.2 mm; p = 0.2700). However, in the BS the DF was smaller (14.2 ± 4.7 mm) on D9 than during NBS (22.0 ± 7.1 mm; p = 0.0177). During the BS, the ovulatory follicle is smaller (p = 0.0042) than during NBS, measured at 33.5 ± 4.6 mm and 41.3 ± 2.8 mm, respectively. Ovulation time after P4 removal was similar during BS (173.1 ± 68.8 h) and NBS (192 ± 58.2 h; p = 0.3507). There was no difference towards an ovulation rate during BS (88%) and NBS (60%; p = 0.0978). There was no difference in spontaneous ovulation during BS (43%) and NBS (0%; p = 0.6085). This hormonal protocol would be an effective tool for inducing cyclicity/ovulation in mares during BS and NBS.

Shading effect on physiological parameters and in vitro embryo production of tropical adapted Nellore heifers in integrated crop-livestock-forest systems.

The aim of this study was to evaluate the impact of increased shadow supply in integrated crop-livestock-forest systems on in vitro embryonic development and physiological parameters related to stress response in Nellore heifers (Bos indicus). For the study, animals (n = 16) were randomly divided into two groups and kept in areas with different afforestation systems, the integrated crop-livestock-forest (ICLF) and the integrated crop-livestock (ICL) system. The microclimate of the ICLF system provided better comfort conditions than ICL. No differences of respiratory rate, rectal temperature, cortisol, T3, T4, oocyte quality, and cleavage rate between the systems were verified. A higher blastocyst rate was observed in the ICLF (p < 0.05). The results demonstrate that Nellore heifers managed in ICLF during summer in Midwest of Brazil showed higher production of in vitro embryos, without typical changes in its physiological parameters. The results observed in the present study indicate that zebu females are able to respond satisfactorily to the intense heat conditions; however, we believe that the long period to which these animals are exposed to these conditions interferes in the oocyte competence and embryo development.

Genome-wide association study for age at puberty in young Nelore bulls.

Selection for bulls that would reach puberty early reduces the generation interval and increases fertility and herd productivity. Despite its economic importance, there are few QTL associated with age at puberty described in the literature. In this study, a weighted single-step genome-wide association study was performed to detect genomic regions and putative candidate genes related to age at puberty in young Nelore bulls. Several protein-coding genes related to spermatogenesis functions were identified within the genomic regions that explain more than 0.5% of the additive genetic variance for age at puberty in Nelore bulls, such as ADAM11, BRCA1, CSNK2A, CREBBP, MEIOC, NDRG2, NECTIN3, PARP2, PARP9, PRSS21, RAD51C, RNASE4, SLX4, SPA17, TEX14, TIMP2 and TRIP13 gene. Enrichment analysis by DAVID also revealed several GO terms related to spermatogenesis such as DNA replication (GO:0006260), male meiosis I (GO:0007141), double-strand break repair (GO:0006302), base excision repair (GO:0006284), apoptotic process (GO:0006915), cell-cell adhesion (GO: 0098609) and focal adhesion (GO:0005925). The heritability for age at puberty shows that this trait can be improved based on traditional EBV selection. Adding genomic information to the system helps to elucidate genes and molecular mechanisms controlling the sexual precocity and could help to predict sexual precocity in Nelore bulls with greater accuracy at younger age, which would speed up the breeding programme for this breed.

The role of Kisspeptin in bovine in vitro embryo production / Efeito da Kisspeptina na produção in vitro de embriões bovinos

The aim of this study was to investigate the effect of Kisspeptin (Kp) on the medium used in different stages of in vitro production of bovine embryo (IVEP), evaluating cleavage (CR) and blastocyst (BR) rates. The study was divided into three experiments that analyzed, respectively, the action of Kp on in vitro maturation (IVM), in vitro fertilization (IVF), and in vitro culture (IVC) of bovine embryos. In experiment 1, the oocytes were matured in IVM medium and distributed into the following treatments: maturation (IVM Control, n = 102), maturation with addition of 10-7 M Kp (Kp 10-7 IVM, n = 90), and hormone-free maturation luteinizing hormone (LH) and follicle-stimulating hormone (FSH) with the addition of 10-7M Kp (No hormones + Kp 10-7, n = 84), following maturation to normal stages of IVEP. In experiment 2, the oocytes were fertilized in IVF medium, in the following treatments: TALP-FERT without Kp (Control IVF, n = 103) and TALP-FERT with the addition of 10-7M Kp (Kp 10-7 IVF, n = 119), usually following the other steps. Finally, in the third experiment, the oocytes passed through all phases and were divided into IVC in two treatments: SOF medium without Kp (Control IVC, n = 109) and SOF medium with the addition of 10-7M Kp (Kp 10-7, N = 106). The data were analyzed by PROC GLIMMIX of the SAS program. In experiment 1, the means of CR and BR were similar (P > 0.05) between treatments (IVM Control76.47% and 37.25%, Kp 10-7 MIV80% and 33.33%, and No hormones + Kp 10-770.24% and 30.95%, respectively). In experiment 2, the means of CR were similar for the IVF Control and Kp 10-7 IVF groups (P > 0.05), 76.70% and 86.55% respectively. But, the mean of the BR of the group Kp 10-7 IVF was 38.66%, which was higher (P 0.05) were similar between the IVC Control and Kp 10-7 IVC groups (CR 83.50% and 78.30%, and BR 26.60% and 23.60%, respectively)...

Objetivou-se com esse estudoinvestigar o efeito da Kisspeptina (Kp) nos meios base utilizados nas etapas da Produção in vitro de Embriões (PIVE) bovinos, avaliando as taxas de clivagem (TC) e blastocistos (TB). O estudo foi dividido em três experimentos, sendo respectivamente analisado em cada um a ação da Kp na maturação in vitro (MIV), fertilização in vitro (FIV) e cultivo in vitro (CIV) de embriões bovinos. No experimento 1 os oócitos foram maturados em meio base MIV, distribuídos nos seguintes tratamentos: maturação (Controle MIV, n=102), maturação com adição de 10-7M de Kp-10 (Kp 10-7 MIV, n=90) e maturação sem hormônios LH e FSH com adição de 10-7M de Kp-10 (Sem hormônios + Kp 10-7, n=84), seguindo após a maturação para as etapas normais da PIVE. No experimento 2 os oócitos foram fecundados em meio base da FIV, nos seguintes tratamentos:TALP-FERT sem Kp (Controle FIV, n = 103) e TALP-FERT com adição de 10-7M de Kp-10 (Kp 10-7 FIV, n = 119), seguindo normalmente pelas outras etapas. Finalmente, no terceiro experimento os oócitos passaram por todas as fases e foram divididos no CIV em 2 tratamentos: meio SOF sem Kp (Controle CIV, n = 109) e meio SOF com adição de 10-7M de Kp-10 (Kp 10-7 3, n = 106). Os dados foram analisados pelo PROC GLIMMIX do programa SAS. No experimento 1 as médias das TC e TB foram semelhantes (P > 0,05) entre os tratamentos Controle MIV 76,47% e 37,25%, Kp 10-7 MIV 80% e 33,33% e Sem hormônios + Kp 10- 7 70,24% e 30,95%, respectivamente. No experimento 2 as médias das TC foram semelhantes para os grupos Controle FIV e Kp 10-7 FIV (P > 0,05), sendo 76,70% e 86,55%, respectivamente. Porém, a média da TB do grupo Kp 10-7 FIV 38,66%, foi superior (P 0,05) também foram similares entre os tratamentos Controle CIV e Kp 10-7 CIV...

The role of Kisspeptin in bovine in vitro embryo production / Efeito da Kisspeptina na produção in vitro de embriões bovinos

The aim of this study was to investigate the effect of Kisspeptin (Kp) on the medium used in different stages of in vitro production of bovine embryo (IVEP), evaluating cleavage (CR) and blastocyst (BR) rates. The study was divided into three experiments that analyzed, respectively, the action of Kp on in vitro maturation (IVM), in vitro fertilization (IVF), and in vitro culture (IVC) of bovine embryos. In experiment 1, the oocytes were matured in IVM medium and distributed into the following treatments: maturation (IVM Control, n = 102), maturation with addition of 10-7 M Kp (Kp 10-7 IVM, n = 90), and hormone-free maturation luteinizing hormone (LH) and follicle-stimulating hormone (FSH) with the addition of 10-7M Kp (No hormones + Kp 10-7, n = 84), following maturation to normal stages of IVEP. In experiment 2, the oocytes were fertilized in IVF medium, in the following treatments: TALP-FERT without Kp (Control IVF, n = 103) and TALP-FERT with the addition of 10-7M Kp (Kp 10-7 IVF, n = 119), usually following the other steps. Finally, in the third experiment, the oocytes passed through all phases and were divided into IVC in two treatments: SOF medium without Kp (Control IVC, n = 109) and SOF medium with the addition of 10-7M Kp (Kp 10-7, N = 106). The data were analyzed by PROC GLIMMIX of the SAS program. In experiment 1, the means of CR and BR were similar (P > 0.05) between treatments (IVM Control76.47% and 37.25%, Kp 10-7 MIV80% and 33.33%, and No hormones + Kp 10-770.24% and 30.95%, respectively). In experiment 2, the means of CR were similar for the IVF Control and Kp 10-7 IVF groups (P > 0.05), 76.70% and 86.55% respectively. But, the mean of the BR of the group Kp 10-7 IVF was 38.66%, which was higher (P < 0.05) than that of the FIV Control group, which was 31.07%. In the third experiment, the means of CR and BR (P > 0.05) were similar between the IVC Control and Kp 10-7 IVC groups (CR 83.50% and 78.30%, and BR 26.60% and 23.60%, respectively)...(AU)

Objetivou-se com esse estudoinvestigar o efeito da Kisspeptina (Kp) nos meios base utilizados nas etapas da Produção in vitro de Embriões (PIVE) bovinos, avaliando as taxas de clivagem (TC) e blastocistos (TB). O estudo foi dividido em três experimentos, sendo respectivamente analisado em cada um a ação da Kp na maturação in vitro (MIV), fertilização in vitro (FIV) e cultivo in vitro (CIV) de embriões bovinos. No experimento 1 os oócitos foram maturados em meio base MIV, distribuídos nos seguintes tratamentos: maturação (Controle MIV, n=102), maturação com adição de 10-7M de Kp-10 (Kp 10-7 MIV, n=90) e maturação sem hormônios LH e FSH com adição de 10-7M de Kp-10 (Sem hormônios + Kp 10-7, n=84), seguindo após a maturação para as etapas normais da PIVE. No experimento 2 os oócitos foram fecundados em meio base da FIV, nos seguintes tratamentos:TALP-FERT sem Kp (Controle FIV, n = 103) e TALP-FERT com adição de 10-7M de Kp-10 (Kp 10-7 FIV, n = 119), seguindo normalmente pelas outras etapas. Finalmente, no terceiro experimento os oócitos passaram por todas as fases e foram divididos no CIV em 2 tratamentos: meio SOF sem Kp (Controle CIV, n = 109) e meio SOF com adição de 10-7M de Kp-10 (Kp 10-7 3, n = 106). Os dados foram analisados pelo PROC GLIMMIX do programa SAS. No experimento 1 as médias das TC e TB foram semelhantes (P > 0,05) entre os tratamentos Controle MIV 76,47% e 37,25%, Kp 10-7 MIV 80% e 33,33% e Sem hormônios + Kp 10- 7 70,24% e 30,95%, respectivamente. No experimento 2 as médias das TC foram semelhantes para os grupos Controle FIV e Kp 10-7 FIV (P > 0,05), sendo 76,70% e 86,55%, respectivamente. Porém, a média da TB do grupo Kp 10-7 FIV 38,66%, foi superior (P < 0,05) ao grupo controle FIV 31,07%. No terceiro experimento as médias das TC e TB (P > 0,05) também foram similares entre os tratamentos Controle CIV e Kp 10-7 CIV...(AU)

Comparative study between the hemocytometric and spectrophotometric methods for measuring the sperm concentration of young Nelore bulls / Estudo comparativo entre o método hematocitométrico e o uso do espectrofotômetro para mensurar a concentração espermática de touros jovens da raça Nelore

Determination of sperm concentration using the Neubauer chamber (hemocytometric method) is a direct method for counting cells and also the most reliable. However, the process is time-consuming rendering it the least practical method when large numbers of ejaculates need to be processed. The spectrophotometer measures sperm concentrations as optical density and its main advantages are practicality and speed. This paper aimed to compare the results between evaluators using the hemocytometric method and the spectrophotometer for measuring sperm concentrations in young Nelore bulls. In total, 73 ejaculations from 20 young Nelore bulls were collected by electroejaculation. After soundness examination, 10 μL of the semen was diluted in 2 mL saline formaldehyde for measuring the sperm concentration per mL by the hemocytometric method (measured by three different evaluators) and the spectrophotometer method at 550 nm wavelength. No differences were detected in the results of sperm concentration measurements per mL among the evaluators using the hemocytometric method and the spectrophotometer (P > 0.05). The intraclass correlation was high (0.9), showing high replicability among the evaluator measurements. These results demonstrate that measurements performed using the spectrophotometer are reliable and can substitute the hemocytometric method in future for performing sperm concentration measurements in young Nelore bulls, thus improving and standardizing the techniques used in andrology laboratories.(AU0

A determinação da concentração espermática pela câmara de Neubauer (método hematocitométrico) é um método direto para contar células, e também é o mais confiável. Entretanto, o processo é demorado, o que o torna um método menos prático quando a quantidade de ejaculados a ser processado é muito grande. O espectrofotômetro é um dispositivo que mede a concentração de espermatozoides através da densidade óptica, e as suas principais vantagens são a sua praticidade e sua velocidade. O objetivo deste trabalho foi comparar os resultados entre os avaliadores no método hematocitométrico e o espectrofotômetro para medir a concentração de espermatozoides no ejaculado de touros jovens da raça Nelore. Um total de 73 ejaculações de 20 touros jovens da raça Nelore foram coletados por meio de eletroejaculação. Após exame andrológico, 10μL do sémen foram diluídos em 2 mL de solução salina de formaldeído para medir a concentração de espermatozoides por mL, utilizando o método hematocitométrico (medido por três diferentes avaliadores) e utilizando o método do espectrofotómetro com comprimento de onda de 550 nm. Não foram detectadas diferenças nos resultados de medição de concentração de espermatozoides por mL entre os avaliadores medidos pelo método hematocitométrico e espectrofotômetro (P > 0,05). A correlação intraclasse foi alta (0,9), mostrando uma alta replicabilidade entre as medidas das avaliações. Com os resultados do presente experimento, pode-se afirmar que a mensuração realizada pelo espectrofotômetro é confiável, e pode, no futuro, substituir o método hematocitométrico para realizar as mensurações de concentração de espermatozoides no ejaculado de touros jovens da raça Nelore, melhorando e padronizando as técnicas usadas em laboratórios andrologia.(AU)

Comparative study between the hemocytometric and spectrophotometric methods for measuring the sperm concentration of young Nelore bulls / Estudo comparativo entre o método hematocitométrico e o uso do espectrofotômetro para mensurar a concentração espermática de touros jovens da raça Nelore

Determination of sperm concentration using the Neubauer chamber (hemocytometric method) is a direct method for counting cells and also the most reliable. However, the process is time-consuming rendering it the least practical method when large numbers of ejaculates need to be processed. The spectrophotometer measures sperm concentrations as optical density and its main advantages are practicality and speed. This paper aimed to compare the results between evaluators using the hemocytometric method and the spectrophotometer for measuring sperm concentrations in young Nelore bulls. In total, 73 ejaculations from 20 young Nelore bulls were collected by electroejaculation. After soundness examination, 10 μL of the semen was diluted in 2 mL saline formaldehyde for measuring the sperm concentration per mL by the hemocytometric method (measured by three different evaluators) and the spectrophotometer method at 550 nm wavelength. No differences were detected in the results of sperm concentration measurements per mL among the evaluators using the hemocytometric method and the spectrophotometer (P > 0.05). The intraclass correlation was high (0.9), showing high replicability among the evaluator measurements. These results demonstrate that measurements performed using the spectrophotometer are reliable and can substitute the hemocytometric method in future for performing sperm concentration measurements in young Nelore bulls, thus improving and standardizing the techniques used in andrology laboratories.

A determinação da concentração espermática pela câmara de Neubauer (método hematocitométrico) é um método direto para contar células, e também é o mais confiável. Entretanto, o processo é demorado, o que o torna um método menos prático quando a quantidade de ejaculados a ser processado é muito grande. O espectrofotômetro é um dispositivo que mede a concentração de espermatozoides através da densidade óptica, e as suas principais vantagens são a sua praticidade e sua velocidade. O objetivo deste trabalho foi comparar os resultados entre os avaliadores no método hematocitométrico e o espectrofotômetro para medir a concentração de espermatozoides no ejaculado de touros jovens da raça Nelore. Um total de 73 ejaculações de 20 touros jovens da raça Nelore foram coletados por meio de eletroejaculação. Após exame andrológico, 10μL do sémen foram diluídos em 2 mL de solução salina de formaldeído para medir a concentração de espermatozoides por mL, utilizando o método hematocitométrico (medido por três diferentes avaliadores) e utilizando o método do espectrofotómetro com comprimento de onda de 550 nm. Não foram detectadas diferenças nos resultados de medição de concentração de espermatozoides por mL entre os avaliadores medidos pelo método hematocitométrico e espectrofotômetro (P > 0,05). A correlação intraclasse foi alta (0,9), mostrando uma alta replicabilidade entre as medidas das avaliações. Com os resultados do presente experimento, pode-se afirmar que a mensuração realizada pelo espectrofotômetro é confiável, e pode, no futuro, substituir o método hematocitométrico para realizar as mensurações de concentração de espermatozoides no ejaculado de touros jovens da raça Nelore, melhorando e padronizando as técnicas usadas em laboratórios andrologia.

Efeito da adição de ciclodextrina carregada com colesterol sobre a qualidade do sêmen congelado/descongelado de touros adultos da raça Nelore / Effect of adding cyclodextrin loaded with cholesterol prior to semen frozen/tawed of adult Nellore bulls

Avaliou-se a hipótese de que a adição de ciclodextrina carregada com colesterol (CCC) ao sêmen innatura de touros da raça Nelore, previamente ao processo de criopreservação, melhora os parâmetros demotilidade, morfologia e integridade de membrana no sêmen congelado/descongelado. Foram obtidos poreletroejaculação, cinco ejaculados de cada touro, e fracionados em: grupo controle e adição de 2 mg e 3 mg deCCC para cada 120 x 106 espermatozoides. Após 15 minutos de incubação à temperatura ambiente, amostrasforam diluídas e submetidas à criopreservação por congelamento. Amostras congeladas/descongeladas foramavaliadas quanto aos aspectos físicos e morfológicos sob microscopia óptica e à cinética espermática pelosistema CASA (Computer Assisted Sperm Analysis). A integridade de membrana foi avaliada pelo testehiposmótico e colorações supravital e de epifluorescência. Os resultados das análises de morfologia e testes deintegridade de membrana plasmática, bem como os valores de motilidade total (MT), motilidade progressiva(MP) e demais parâmetros avaliados pelo CASA, mostram que não houve diferença (P > 0,05) entre ostratamentos. Sendo assim, conclui-se que a adição de CCC ao ejaculado in natura de touros da raça Nelorepreviamente à criopreservação, não melhora os parâmetros de morfologia, integridade de membrana e cinéticaespermática.

It was evaluated if the addition of cyclodextrin loaded with cholesterol (CCC) to in natura semen ofNellore bulls prior to the cryopreservation process improves the parameters of membrane motility, morphologyand integrity in the frozen / thawed semen. Five ejaculates of each bull were obtained and fractionated in:control group and addition of 2 mg or 3 mg of CCC for each 120 x 106 spermatozoa. After 15 minutes ofincubation at room temperature, samples were diluted and subjected to cryopreservation. Frozen/thawedsamples were evaluated for physical and morphological aspects under optical microscopy and for spermatickinetics by the CASA system. For the evaluation of the plasma membrane integrity of the frozen / thawedspermatozoa, the hyposmotic test and the supravital and epifluorescent stains were used. The results of themorphology and plasma membrane integrity tests, as well as the values of total motility (MT), progressivemotility (MP) and other parameters of sperm kinetics evaluated by CASA, show that there was no statisticallysignificant difference (P > 0.05) among the treatments performed. Therefore, it is concluded that the addition ofCCC to the in natura ejaculate of Nellore bulls prior to cryopreservation, does not improve parameters ofmorphology, membrane integrity and sperm kinetics.

Efeito da adição de ciclodextrina carregada com colesterol sobre a qualidade do sêmen congelado/descongelado de touros adultos da raça Nelore / Effect of adding cyclodextrin loaded with cholesterol prior to semen frozen/tawed of adult Nellore bulls

Avaliou-se a hipótese de que a adição de ciclodextrina carregada com colesterol (CCC) ao sêmen innatura de touros da raça Nelore, previamente ao processo de criopreservação, melhora os parâmetros demotilidade, morfologia e integridade de membrana no sêmen congelado/descongelado. Foram obtidos poreletroejaculação, cinco ejaculados de cada touro, e fracionados em: grupo controle e adição de 2 mg e 3 mg deCCC para cada 120 x 106 espermatozoides. Após 15 minutos de incubação à temperatura ambiente, amostrasforam diluídas e submetidas à criopreservação por congelamento. Amostras congeladas/descongeladas foramavaliadas quanto aos aspectos físicos e morfológicos sob microscopia óptica e à cinética espermática pelosistema CASA (Computer Assisted Sperm Analysis). A integridade de membrana foi avaliada pelo testehiposmótico e colorações supravital e de epifluorescência. Os resultados das análises de morfologia e testes deintegridade de membrana plasmática, bem como os valores de motilidade total (MT), motilidade progressiva(MP) e demais parâmetros avaliados pelo CASA, mostram que não houve diferença (P > 0,05) entre ostratamentos. Sendo assim, conclui-se que a adição de CCC ao ejaculado in natura de touros da raça Nelorepreviamente à criopreservação, não melhora os parâmetros de morfologia, integridade de membrana e cinéticaespermática.(AU)

It was evaluated if the addition of cyclodextrin loaded with cholesterol (CCC) to in natura semen ofNellore bulls prior to the cryopreservation process improves the parameters of membrane motility, morphologyand integrity in the frozen / thawed semen. Five ejaculates of each bull were obtained and fractionated in:control group and addition of 2 mg or 3 mg of CCC for each 120 x 106 spermatozoa. After 15 minutes ofincubation at room temperature, samples were diluted and subjected to cryopreservation. Frozen/thawedsamples were evaluated for physical and morphological aspects under optical microscopy and for spermatickinetics by the CASA system. For the evaluation of the plasma membrane integrity of the frozen / thawedspermatozoa, the hyposmotic test and the supravital and epifluorescent stains were used. The results of themorphology and plasma membrane integrity tests, as well as the values of total motility (MT), progressivemotility (MP) and other parameters of sperm kinetics evaluated by CASA, show that there was no statisticallysignificant difference (P > 0.05) among the treatments performed. Therefore, it is concluded that the addition ofCCC to the in natura ejaculate of Nellore bulls prior to cryopreservation, does not improve parameters ofmorphology, membrane integrity and sperm kinetics.(AU)

Utilização de diferentes volumes de sêmen na realização do teste hiposmótico em touros adultos da raça nelore / Use of different semen volumes in hypoosmotic test of adult nelore bulls / El uso de diferentes volúmenes de semen en el test hiposmótico en toros adultos de la raza nelore

O objetivo deste estudo foi avaliar diferentes proporções de sêmen: solução hiposmótica na realização do teste hiposmótico e suas relações com a congelabilidade do sêmen de touros zebuínos. Utilizaram-se 15 ejaculados de três touros adultos da raça Nelore. No sêmen in natura realizou-se a avaliação física e morfológica, a coloração supravital e o teste hiposmótico. No teste hiposmótico foi utilizada uma solução com osmolaridade de 100 mOsm/Kg com 15 minutos de período de incubação a 37 ºC, tanto no sêmen in natura quanto no congelado/descongelado. Foram utilizados quatro volumes de sêmen em 1mL de solução hiposmótica: 10, 20, 50 e 100 µL. As amostras criopreservadas foram descongeladas e foram realizados os testes hiposmótico, coloração supravital, teste de termo-resistência lento e a coloração fluorescente. Os valores médios e desvios padrão do percentual de espermatozoides reativos ao teste hiposmótico em sêmen in natura e congelado/descongelado foram 69,3 ± 11,8 e 20,5 ± 6,8; respectivamente. Não houve correlação do teste hiposmótico com os aspectos físicos e morfológicos e os testes complementares realizados em sêmen in natura e congelado/descongelado. Nenhum teste de integridade de membrana plasmática dos espermatozoides foi capaz de classificar os touros quanto a sua congelabilidade do sêmen. Conclui-se que o teste hiposmótico pode ser realizado com 20 a 100 µL de sêmen in natura, e 10 a 100 µL de sêmen congelado/descongelado em 1 mL de solução hiposmótica, sem interferir em seus resultados, mas deve-se optar por 100 µL tanto para sêmen in natura e congelado/descongelado, porque melhora consideravelmente a leitura das lâminas.(AU)

The objective of this study was to evaluate different proportions of semen: hypoosmotic solution in the hypoosmotic swelling test and their relationship with semen freezability in Zebu bulls. A total of 15 ejaculates from three adult Nelore bulls were used. Physical and morphological features were analyzed in fresh semen, as well as supravital staining and hypoosmotic swelling test. In the hypoosmotic test, a hypoosmotic solution with 100 mOsm/kg osmolality using 15 minutes incubation at 37 °C was used both in fresh and frozen/thawed semen. Four semen volumes in 1-ml hyposmotic solution were used: 10, 20, 50 and 100 µL. Cryopreserved samples were thawed and submitted to hypoosmotic tests, supravital staining, slow thermo-resistance test and fluorescent staining. Mean values and standard deviations of the percentage of reactive sperm cells in the hypoosmotic test in fresh and frozen/thawed semen were 69.3 ± 11.8 and 20.5 ± 6.8, respectively. There was no correlation between the hypoosmotic test and physical and morphological features and the complementary tests performed on fresh and frozen/thawed semen. None of the plasma membrane integrity tests was able to predict bull semen freezability. It can be concluded that the hypoosmotic test can be performed with 20 to 100 µL fresh semen, and 10 to 100 µL of frozen/thawed semen in 1 mL of hypoosmotic solution without interfering with their results, but 100 µL should be used in both, because it considerably improves the view of the slides.(AU)

El objetivo de este estudio ha sido evaluar diferentes proporciones de semen: solución hiposmótica en la realización del test hiposmótico y sus relaciones con la congelabilidad del semen de toros cebú. Se utilizaron 15 eyaculados de tres toros adultos de la raza Nelore. En el semen fresco se realizó evaluación física y morfológica, la tinción supravital y test hiposmótico. En el test hiposmótico se ha utilizado una solución con osmolaridad de 100 mOsm/kg con un período de incubación de 15 minutos a 37 ºC, tanto en el semen fresco cuanto en el congelado/descongelado. Fueron utilizados cuatro volúmenes de 1 mL de solución hiposmótica: 10, 20, 50, y 100 µL. Las muestras criopreservadas fueron descongeladas y realizados los tests hiposmótico, tinción supravital, test de resistencia al fuego lento y la tinción fluorescente. Los valores medios y desvío estándar del porcentaje de espermatozoides reactivos al test hiposmótico en l semen fresco y congelado/descongelado fueron 69,3 ± 11,8 y 20,5 ± 6,8; respectivamente. No hubo correlación del test hiposmótico con las características físicas y morfológicas y pruebas adicionales en el semen fresco y congelado/descongelado. Ningún test de integridad de la membrana plasmática de los espermatozoides han sido capaz de clasificar a los toros cuanto su congelabilidad del semen. Se puede concluir que el test hiposmótico puede ser realizado con 20 a 100 µL de semen fresco, y de 10 a 100 µL de semen congelado/descongelado en 1 mL de solución hiposmótica, sin interferir en sus resultados, pero se debe optar por 100 µL para el semen fresco y congelado/descongelado, porque mejora significativamente la lectura de las láminas.(AU)

Sincronização da ovulação: como mimetizar ainda mais a fisiologia da reprodução para obter melhores resultados? / Synchronization of ovulation: how to mimic the reproductive physiology for best outcomes?

Na última década, um grande número de terapias tem sido desenvolvidas para manipular o crescimento e ovulação do folículo ovariano e aumentar a taxa de concepção em inseminação artificial (IA) em bovinos. Várias estratégias têm sido propostas para melhorar a resposta a biotecnologias reprodutivas. Quando se obtém 50% de concepção em uma IA em tempo fixo (IATF), automaticamente se pergunta onde estão os outros 50%. Da mesma forma, a variação de resultados em função das raças, categorias, condição corporal, medicamentos e manejos fazem surgir mais perguntas que respostas. Este artigo discute fatores chave na manipulação do crescimento folicular ovariano e ovulação para melhorar a taxa de concepção em bovinos.

Over the last decade, a number of therapies have been developed to manipulate ovarian follicle growth and ovulation to improve conception rates for artificial insemination (AI) in cattle. Various strategies have been proposed to improve the responses to reproductive biotechnologies. When timed AI (TAI) results in 50% of conception, automatically a question is made about where are the other 50%. Variations in results depending on breed, category, body condition and drugs make rise more questions than answers. This article discusses some key points related to the manipulation of ovarian follicular growth and ovulation to improve conception rates following TAI in cattle.

Sincronização da ovulação: como mimetizar ainda mais a fisiologia da reprodução para obter melhores resultados? / Synchronization of ovulation: how to mimic the reproductive physiology for best outcomes?

Na última década, um grande número de terapias tem sido desenvolvidas para manipular o crescimento e ovulação do folículo ovariano e aumentar a taxa de concepção em inseminação artificial (IA) em bovinos. Várias estratégias têm sido propostas para melhorar a resposta a biotecnologias reprodutivas. Quando se obtém 50% de concepção em uma IA em tempo fixo (IATF), automaticamente se pergunta onde estão os outros 50%. Da mesma forma, a variação de resultados em função das raças, categorias, condição corporal, medicamentos e manejos fazem surgir mais perguntas que respostas. Este artigo discute fatores chave na manipulação do crescimento folicular ovariano e ovulação para melhorar a taxa de concepção em bovinos.(AU)

Over the last decade, a number of therapies have been developed to manipulate ovarian follicle growth and ovulation to improve conception rates for artificial insemination (AI) in cattle. Various strategies have been proposed to improve the responses to reproductive biotechnologies. When timed AI (TAI) results in 50% of conception, automatically a question is made about where are the other 50%. Variations in results depending on breed, category, body condition and drugs make rise more questions than answers. This article discusses some key points related to the manipulation of ovarian follicular growth and ovulation to improve conception rates following TAI in cattle.(AU)

Uso de colesterol na criopreservação espermática e fertilidade: uma revisão / Use of cholesterol in sperm cryopreservation and fertility: a review / Uso de colesterol en la criopreservación espermática y fertilidad: una revisión

A criopreservação é um método amplamente utilizado para o armazenamento de células espermáticas em longo prazo. Essa técnica facilita a difusão e a disponibilidade de material genético a ser utilizado tanto na produção in vitro (PIV) como na inseminação artificial, biotecnologia aplicada na maioria das espécies domésticas. Pesquisas têm desenvolvido estratégias para otimizar a utilização do sêmen por meio da redução das injúrias ocorridas durante o processo de criopreservação, e vem conseguindo melhorar os parâmetros espermáticos pós-descongelação com a adição de ciclodextrina carregada com colesterol (CCC) ao sêmen puro ou previamente diluído das diferentes espécies estudadas. Apesar dos resultados promissores, melhor fertilidade do sêmen tratado com CCC tem sido demonstrada somente in vitro, enquanto que in vivo os resultados ainda não são compensatórios, necessitando maiores investigações para tornar viável a aplicação comercial dessa técnica. O objetivo dessa revisão foi compilar alguns resultados dos principais pesquisadores na área, expondo o estado atual e as perspectivas para melhorias da fertilidade do sêmen tratado com CCC.(AU)

Cryopreservation is a method widely used for the long-term storage of sperm cells. This technique facilitates the dissemination and availability of genetic material to be used in both in vitro production (IVP) and in artificial insemination, the biotechnology applied to most domestic species. Research has developed strategies to optimize the use of semen through the reduction of injuries occurred during the cryopreservation process, having succeeded in improving post-thaw sperm parameters with the addition of cholesterol-loaded cyclodextrin (CLC) to pure or previously diluted semen samples from the different species studied. Despite the promising results, better fertility of semen treated with CLC has only been demonstrated in vitro, while in vivo results are not yet feasible, requiring further investigation to result in viable commercial application of such technique. The objective of this review is to compile a few results from the leading researchers in the area, exhibiting the current state and prospects for improving the fertility of semen treated with CLC.(AU)

La criopreservación es un método ampliamente utilizado para el almacenamiento de células espermáticas a largo plazo. Esa técnica facilita la difusión y la disponibilidad de material genético a ser utilizado tanto en la producción in vitro (PIV) como en la inseminación artificial, biotecnología aplicada en la mayoría de las especies domesticas. Investigaciones han desarrollado estrategias para perfeccionar la utilización del semen por medio de la reducción de las injurias ocurridas durante el proceso de criopreservación, y ha conseguido mejorar los parámetros espermáticos pos descongelamiento con la adición de ciclodextrina cargada con colesterol (CCC) al semen puro o previamente diluido. A pesar de los resultados promisores, mejor fertilidad del semen tratado con CCC ha sido demostrado solo in vitro, mientras que in vivo los resultados todavía no son compensatorios, necesitando de mayores investigaciones para volver viable la aplicación comercial de esa técnica. El objetivo de esa revisión ha sido compilar algunos resultados de los principales investigadores del área, exponiendo el estado actual y las perspectivas para mejorías de la fertilidad del semen tratado con CCC.(AU)

Uso de colesterol na criopreservação espermática e fertilidade: uma revisão / Use of cholesterol in sperm cryopreservation and fertility: a review / Uso de colesterol en la criopreservación espermática y fertilidad: una revisión

A criopreservação é um método amplamente utilizado para o armazenamento de células espermáticas em longo prazo. Essa técnica facilita a difusão e a disponibilidade de material genético a ser utilizado tanto na produção in vitro (PIV) como na inseminação artificial, biotecnologia aplicada na maioria das espécies domésticas. Pesquisas têm desenvolvido estratégias para otimizar a utilização do sêmen por meio da redução das injúrias ocorridas durante o processo de criopreservação, e vem conseguindo melhorar os parâmetros espermáticos pós-descongelação com a adição de ciclodextrina carregada com colesterol (CCC) ao sêmen puro ou previamente diluído das diferentes espécies estudadas. Apesar dos resultados promissores, melhor fertilidade do sêmen tratado com CCC tem sido demonstrada somente in vitro, enquanto que in vivo os resultados ainda não são compensatórios, necessitando maiores investigações para tornar viável a aplicação comercial dessa técnica. O objetivo dessa revisão foi compilar alguns resultados dos principais pesquisadores na área, expondo o estado atual e as perspectivas para melhorias da fertilidade do sêmen tratado com CCC...

Cryopreservation is a method widely used for the long-term storage of sperm cells. This technique facilitates the dissemination and availability of genetic material to be used in both in vitro production (IVP) and in artificial insemination, the biotechnology applied to most domestic species. Research has developed strategies to optimize the use of semen through the reduction of injuries occurred during the cryopreservation process, having succeeded in improving post-thaw sperm parameters with the addition of cholesterol-loaded cyclodextrin (CLC) to pure or previously diluted semen samples from the different species studied. Despite the promising results, better fertility of semen treated with CLC has only been demonstrated in vitro, while in vivo results are not yet feasible, requiring further investigation to result in viable commercial application of such technique. The objective of this review is to compile a few results from the leading researchers in the area, exhibiting the current state and prospects for improving the fertility of semen treated with CLC...

La criopreservación es un método ampliamente utilizado para el almacenamiento de células espermáticas a largo plazo. Esa técnica facilita la difusión y la disponibilidad de material genético a ser utilizado tanto en la producción in vitro (PIV) como en la inseminación artificial, biotecnología aplicada en la mayoría de las especies domesticas. Investigaciones han desarrollado estrategias para perfeccionar la utilización del semen por medio de la reducción de las injurias ocurridas durante el proceso de criopreservación, y ha conseguido mejorar los parámetros espermáticos pos descongelamiento con la adición de ciclodextrina cargada con colesterol (CCC) al semen puro o previamente diluido. A pesar de los resultados promisores, mejor fertilidad del semen tratado con CCC ha sido demostrado solo in vitro, mientras que in vivo los resultados todavía no son compensatorios, necesitando de mayores investigaciones para volver viable la aplicación comercial de esa técnica. El objetivo de esa revisión ha sido compilar algunos resultados de los principales investigadores del área, exponiendo el estado actual y las perspectivas para mejorías de la fertilidad del semen tratado con CCC...

Estresse por calor: alterações na fisiologia reprodutiva e estratégias para amenizar seus efeitos negativos na fertilidade de fêmeas bovinas / Heat stress: alterations on reproductive physiology and strategies to mitigate the negative effects fertility of bovine females / Estrés por calor: cambios en la fisiología reproductiva y estrategias para amenizar sus efectos negativos en la fertilidad de hembras bovinas

O estresse por calor, comum em clima tropical, vem sendo considerado um dos principais fatores de falha reprodutiva de fêmeas bovinas, incluindo danos ao desenvolvimento e maturação oocitária, desenvolvimento embrionário inicial e fetal, lactação e endocrinologia reprodutiva. Para tentar minimizar tais prejuízos, é necessário melhor entendimento da influência térmica sobre os processos reprodutivos a fim de aperfeiçoar o manejo para aumentar a fertilidade. Esta revisão tem como objetivo buscar o melhor entendimento de como e quando o estresse por calor afeta a reprodução de bovinos, no intuito de se desenvolver estratégias visando melhorar a fertilidade em ambientes de elevadas temperatura.

The heat stress, common in tropical climates, has been considered one of the major factor in reproductive failure in cows, including damages in the oocyte development and maturations, early embryo and fetus development, lactations and reproductive endocrinology. The genetic adaptation to heat stress is possible not only in relation to the body temperature regulation, but also at cellular resistance level. To try to minimize these problems, a better understanding of the thermal influence on the reproductive processes is necessary, with the aim of improving the reproductive management. This review aims to offer a better understanding of how and when the heat stress affects reproductive function of bovines, in order to develop strategies to increase fertility in environments with high thermal loads.

El estrés por calor, común en climas tropicales, ha sido considerado uno de los principales factores de fracaso reproductivo en hembras bovinas, incluyendo daños al desarrollo y maduración oocitaria, desarrollo embrionario inicial y fetal, lactancia y endocrinología reproductiva. Para intentar minimizar estos problemas, es necesario entender mejor la influencia térmica en los procesos reproductivos, con el fin de perfeccionar el manejo para aumentar la fertilidad. Esta revisión tiene como objetivo buscar mejor comprensión de cómo y cuándo el estrés por calor afecta la reproducción del ganado, buscando desarrollar estrategias para mejorar la fertilidad en entornos de elevadas temperatura.

Estresse por calor: alterações na fisiologia reprodutiva e estratégica para amenizar seus efeitos negativos na fertilidade de fêmeas bovinas / Heat stress: alterations on reproductive physiology and strategies to mitigate the negative effects fertility of bovine females / Estrés por calor: cambios en la fisiología reproductiva y estrategias para amenizar sus efectos negativos en la fertilidad de hembras bovinas

O estresse por calor, comum em clima tropical, vem sendo considerado um dos principais fatores de falha reprodutiva de fêmeas bovinas, incluindo danos ao desenvolvimento e maturação oocitária, desenvolvimento embrionário inicial e fetal, lactação e endocrinologia reprodutiva. Para tentar minimizar tais prejuízos, é necessário melhor entendimento da influência térmica sobre os processos reprodutivos a fim de aperfeiçoar o manejo para aumentar a fertilidade. Esta revisão tem como objetivo buscar o melhor entendimento de como e quando o estresse por calor afeta a reprodução de bovinos, no intuito de se desenvolver estratégias visando melhorar a fertilidade em ambientes de elevadas temperatura.(AU)

The heat stress, common in tropical climates, has been considered one of the major factor in reproductive failure in cows, including damages in the oocyte development and maturations, early embryo and fetus development, lactations and reproductive endocrinology. The genetic adaptation to heat stress is possible not only in relation to the body temperature regulation, but also at cellular resistance level. To try to minimize these problems, a better understanding of the thermal influence on the reproductive processes is necessary, with the aim of improving the reproductive management. This review aims to offer a better understanding of how and when the heat stress affects reproductive function of bovines, in order to develop strategies to increase fertility in environments with high thermal loads.(AU)

El estrés por calor, común en climas tropicales, ha sido considerado uno de los principales factores de fracaso reproductivo en hembras bovinas, incluyendo daños al desarrollo y maduración oocitaria, desarrollo embrionario inicial y fetal, lactancia y endocrinología reproductiva. Para intentar minimizar estos problemas, es necesario entender mejor la influencia térmica en los procesos reproductivos, con el fin de perfeccionar el manejo para aumentar la fertilidad. Esta revisión tiene como objetivo buscar mejor comprensión de cómo y cuándo el estrés por calor afecta la reproducción del ganado, buscando desarrollar estrategias para mejorar la fertilidad en entornos de elevadas temperatura.(AU)