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The Cdc6 protein of budding yeast and its homologues in other species play an essential role in the initiation of DNA replication. A cDNA encoding a human homologue of Cdc6 (HsCdc6) has been cloned and expressed as a fusion protein in a soluble and functionally active form. The purified protein bound specifically to ATP and slowly hydrolyzed it, whereas HsCdc6 mutants containing amino acid substitutions in the Walker A or B motifs were defective. The mutant proteins retained the ability to bind HsOrc1 and HsCdc6 but displayed aberrant conformations in the presence of nucleotides. Microinjection of either mutant protein into human cells in G1 inhibited DNA replication, suggesting that ATP binding and hydrolysis by HsCdc6 are essential for DNA replication.

Assuntos

Proteínas de Ciclo Celular/metabolismo , Replicação do DNA , Proteínas Nucleares/metabolismo , Nucleotídeos/metabolismo , Trifosfato de Adenosina/metabolismo , Animais , Baculoviridae/genética , Sítios de Ligação , Proteínas de Ciclo Celular/genética , Proteínas de Ciclo Celular/isolamento & purificação , DNA Topoisomerases Tipo II/química , DNA Topoisomerases Tipo II/genética , DNA Topoisomerases Tipo II/metabolismo , Proteínas de Ligação a DNA/genética , Proteínas de Ligação a DNA/metabolismo , Fase G1/genética , Células HeLa/metabolismo , Humanos , Hidrólise , Cinética , Microinjeções , Dados de Sequência Molecular , Mutação , Proteínas Nucleares/genética , Proteínas Nucleares/isolamento & purificação , Complexo de Reconhecimento de Origem , Conformação Proteica , Proteínas Recombinantes/genética , Proteínas Recombinantes/isolamento & purificação , Proteínas Recombinantes/metabolismo , Fase S/genética

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