Diseño de un genosensor electroquímico para la detección indirecta de gluten en alimentos / Electrochemical genosensor for indirect wheat gluten detection in food

Se propone un nuevo genosensor electroquímico para la detección de una secuencia específica de ADN que codifica un fragmento inmunogénico de la Alfa-2-gliadina, proteína del gluten de trigo responsable de la celiaquía. El diseño del genosensor se basa en la formación de una monocapa autoensamblada de sonda de captura y un agente bloqueante, mercaptohexanol, sobre electrodos de oro serigrafiados. Se eligió un ensayo tipo sándwich, utilizando una sonda indicadora marcada con biotina y el conjugado estreptavidina-fosfatasa alcalina como molécula de marcaje. La detección del analito se basó en la medida de la corriente de oxidación del 1-naftol, producto formado por la hidrólisis enzimática del 1-naftil-fosfato, mediante voltamperometría de pulso diferencial. Se investigaron y optimizaron los parámetros implicados en la composición de la fase sensora mediante voltametría cíclica, encontrándose como relación óptima sonda de captura: mercaptohexanol 2 microM:9 mM. Con el objetivo de minimizar las adsorciones inespecíficas, se optimizaron las concentraciones de sonda indicadora y conjugado enzima-estreptavidina, especies involucradas en la fase de medida, obteniéndose como valores óptimos 1 microM y 1,075x10-3 g/L respectivamente. El genosensor propuesto presentó una respuesta lineal entre 20 y 250 nM(AU)

A new electrochemical genosensor has been developed for the detection of a specific DNA sequence that encodes for an immunogenic fragment of Alpha-2-gliadin, protein of gluten wheat that plays an important role in celiac disease. The genosensor is based on a mixed self-assembled monolayer consisting on a capture probe and a diluent molecule, mercaptohexanol, both immobilized on screen-printed gold electrodes. A sandwich-type hybridization assay was selected, using a signaling-DNA probe labeled with biotin and streptavidin-alkaline phosphatase as a reporter molecule. Detection of DNA gluten is based on the measurement of the oxidization current of 1-naphthol, product formed by Alpha-naphthyl phosphate enzymatic hydrolysis, by differential pulse voltammetry. Parameters involved in the sensing phase were investigated and optimized by cyclic voltammetry. The optimal capture probe to mercaptohexanol ratio was found to be 2 micreM:9 mM. In order to minimize unspecific adsorptions, both signaling probe and enzyme-streptavidin conjugate concentrations (measurement phase parameters) were optimized (1 micreM and 1.075·10-3 g/L respectively). A linear response from 20 nM to 250 nM is obtained with the proposed genosensor(AU)

Comportamiento electroquímico de la dopamina en un electrodo de carbón vítreo modificado con laponita/glutaraldehído / Electrochemical behaviour of dopamine on a laponite/glutaraldehyde modified glassy carbon electrode

En el presente trabajo se propone un nuevo método para la determinación indirecta de dopamina (DA), basado en la modificación del electrodo de carbón vítreo mediante adsorción sobre su superficie de una película de laponita (arcilla catiónica) y glutaraldehído(GA). Mediante voltamperometría cíclica (VC) se estudió el comportamientoelectroquímico de la DA en una disolución tampón defosfato sódico 0,1 M, pH 6,0 y en presencia de tirosinasa (PPO). La presencia de tirosinasa permitió la determinación indirecta de DA, midiendo la corriente de reducción generada por el dopaminocromoformado a partir de la quinona procedente de la reacción enzimática entre DA y PPO a –0,25 V vs. Ag/AgCl (3 M). Esta corriente de reducción originada por el dopaminocromo es proporcional a la concentración de DA presente en el medio (AU)

Electrochemical behaviour of dopamine on a laponite/glutaraldehyde modified glassy carbon electrodeIn this work a new method of dopamine (DA) detection, based onglassy carbon electrode modified by adsorption on the surface with a film of laponita (cathionic clay) and glutaraldehyde (GA) is proposed. The electrochemical behaviour of the DA in a phosphate buffer solution 0,1 M, pH 6,0 of tyrosinase was studied by cyclic voltammetry technique (CV). The tyrosinase present in the solution allowed the indirect detection of DA monitoring the dopaminochrome coming from the quinone produced in the enzymatic reaction between the DA and tyrosine to –0.25 V vs. Ag/AgCl (3 M). The reduction current of the dopamine chrome was found to be proportional to the DAconcentration (AU)