A Global Analysis of Photoreceptor-Mediated Transcriptional Changes Reveals the Intricate Relationship Between Central Metabolism and DNA Repair in the Filamentous Fungus Trichoderma atroviride.

Light provides critical information for the behavior and development of basically all organisms. Filamentous fungi sense blue light, mainly, through a unique transcription factor complex that activates its targets in a light-dependent manner. In Trichoderma atroviride, the BLR-1 and BLR-2 proteins constitute this complex, which triggers the light-dependent formation of asexual reproduction structures (conidia). We generated an ENVOY photoreceptor mutant and performed RNA-seq analyses in the mutants of this gene and in those of the BLR-1, CRY-1 and CRY-DASH photoreceptors in response to a pulse of low intensity blue light. Like in other filamentous fungi BLR-1 appears to play a central role in the regulation of blue-light responses. Phenotypic characterization of the Δenv-1 mutant showed that ENVOY functions as a growth and conidiation checkpoint, preventing exacerbated light responses. Similarly, we observed that CRY-1 and CRY-DASH contribute to the typical light-induced conidiation response. In the Δenv-1 mutant, we observed, at the transcriptomic level, a general induction of DNA metabolic processes and strong repression of central metabolism. An analysis of the expression level of DNA repair genes showed that they increase their expression in the absence of env-1. Consistently, photoreactivation experiments showed that Δenv-1 had increased DNA repair capacity. Our results indicate that light perception in T. atroviride is far more complex than originally thought.

Assessment of the ptxD gene as a growth and selective marker in Trichoderma atroviride using Pccg6, a novel constitutive promoter.

BACKGROUND: Trichoderma species are among the most effective cell factories to produce recombinant proteins, whose productivity relies on the molecular toolkit and promoters available for the expression of the target protein. Although inducible promoter systems have been developed for producing recombinant proteins in Trichoderma, constitutive promoters are often a desirable alternative. Constitutive promoters are simple to use, do not require external stimuli or chemical inducers to be activated, and lead to purer enzyme preparations. Moreover, most of the promoters for homologous and heterologous expression reported in Trichoderma have been commonly evaluated by directly assessing production of industrial enzymes, requiring optimization of laborious protocols. RESULTS: Here we report the identification of Pccg6, a novel Trichoderma atroviride constitutive promoter, that has similar transcriptional strength as that of the commonly used pki1 promoter. Pccg6 displayed conserved arrangements of transcription factor binding sites between promoter sequences of Trichoderma ccg6 orthologues genes, potentially involved in their regulatory properties. The predicted ccg6-encoded protein potentially belongs to the SPE1/SPI1 protein family and shares high identity with CCG6 orthologue sequences from other fungal species including Trichoderma reesei, Trichoderma virens, Trichoderma asperellum, and to a lesser extent to that of Neurospora crassa. We also report the use of the Pccg6 promoter to drive the expression of PTXD, a phosphite oxidoreductase of bacterial origin, which allowed T. atroviride to utilize phosphite as a sole source of phosphorus. We propose ptxD as a growth reporter gene that allows real-time comparison of the functionality of different promoters by monitoring growth of Trichoderma transgenic lines and enzymatic activity of PTXD. Finally, we show that constitutive expression of ptxD provided T. atroviride a competitive advantage to outgrow bacterial contaminants when supplied with phosphite as a sole source of phosphorus. CONCLUSIONS: A new constitutive promoter, ccg6, for expression of homologous and heterologous proteins has been identified and tested in T. atroviride to express PTXD, which resulted in an effective and visible phenotype to evaluate transcriptional activity of sequence promoters. Use of PTXD as a growth marker holds great potential for assessing activity of other promoters and for biotechnological applications as a contamination control system.

Metodología para el perfeccionamiento del accionar técnico táctico de los lanzadores de béisbol / Methodology for the improvement of the tactical technical action of baseball pitchers

Resumen El accionar técnico táctico de los lanzadores de béisbol exige la búsqueda de herramientas novedosas que se deriven en un contexto pedagógico que gestione, de manera creativa, las formas del conocimiento; a tono con esto, las metodologías actuantes en béisbol reclaman una continua actualización en el orden teórico, metodológico y práctico. De ahí que la presente investigación tuvo por objetivo elaborar una metodología para el perfeccionamiento del accionar técnico-táctico de los lanzadores de béisbol, en correspondencia con la función que desempeñan dentro del juego. Para ello se trabajó con una muestra primaria de 15 lanzadores del equipo Pinar del Río, en el último año de la categoría 17-18, así como una muestra secundaria de 12 entrenadores, 20 especialistas y 20 atletas que incursionan regular u ocasionalmente como lanzadores. Se emplearon métodos y técnicas científicas de investigación como el análisis de documentos, la observación, la entrevista estandarizada e individual y el criterio de expertos. Se constataron carencias en el tratamiento del contenido de la preparación técnico-táctica para el perfeccionamiento del accionar del lanzador de béisbol, según la función que desempeña en el juego, a partir de la cual se propone una metodología que contiene la estructura, contenido y planificación de la preparación técnica-táctica de los lanzadores de béisbol, según su función en el juego, a partir de situaciones simplificadas que didácticamente actúan sobre los componentes de esta preparación deportiva y bajo leyes y principios del entrenamiento deportivo.

Abstract The technical tactical action of baseball pitchers requires the search for new tools that are derived in a pedagogical context that creatively manages the forms of knowledge, in line with this, the methodologies used in baseball demand a continuous updating in the theoretical, methodological and practical order. Hence, the objective of the present research was to develop a methodology for improving the tactical technical action of baseball pitchers in correspondence with the function they perform within the game. In order to do this, we worked with a primary sample of 15 pitchers from the Pinar del Río team, in the last year of the 17-18 category, as well as a secondary sample of 12 coaches, 20 specialists and 20 athletes who regularly or occasionally enter as pitchers. Scientific research methods and techniques such as document analysis, observation, standardized and individual interviews and expert judgment were used. There were shortcomings in the treatment of the contents of the tactical technical preparation for improving the actions of the baseball pitcher according to the role played in the game, from which a methodology is proposed that contains the structure, content and planning of the technical-tactical preparation of baseball pitchers, according to their function in the game, from simplified situations that didactically act on the components of this sports preparation and under laws and principles of sports training.

Cross talk between a fungal blue-light perception system and the cyclic AMP signaling pathway.

Blue light regulates many physiological and developmental processes in fungi. In Trichoderma atroviride the complex formed by the BLR-1 and BLR-2 proteins appears to play an essential role as a sensor and transcriptional regulator in photoconidiation. Here we demonstrate that the BLR proteins are necessary for carbon deprivation induced conidiation, even in the absence of light, pointing to the existence of an unprecedented cross talk between light and carbon sensing. Further, in contrast to what has been found in all other fungal systems, clear BLR-independent blue-light responses, including the activation of protein kinase A (PKA) and the regulation of gene expression, were found. Expression of an antisense version of the pkr-1 gene, encoding the regulatory subunit of PKA, resulted in a nonsporulating phenotype, whereas overexpression of the gene produced colonies that conidiate even in the dark. In addition, overexpression of pkr-1 blocked the induction of early light response genes. Thus, our data demonstrate that PKA plays an important role in the regulation of light responses in Trichoderma. Together, these observations suggest that the BLR complex plays a general role in sensing environmental cues that trigger conidiation and that such a role can be separated from its function as a transcription factor.

Rebrote en alfalfa-ovillo bajo pastoreo mixto durante el invierno / Regrowth of alfalfa-orchard under mixed grazing in winter

El pastoreo mixto puede mejorar la eficiencia de cosecha del forraje al disminuir la competencia intraespecífica. El objetivo del estudio fue describir la respuesta de alfalfa (Medicago sativa-L)-ovillo (Dactylis glomerata L) al aplicar pastoreo mixto (vaca+borrega) con sobrecarga del 20 por ciento. Se compararon dos tratamientos: pastoreo monoespecífico (vacas solamente) y pastoreo mixto (vacas+borregas). El diseño fue completamente al azar con dos repeticiones. Se usaron como pastoreadores un total de 10 vacas Holstein y 24 borregas, el pastoreo fue en franjas con 30-32 días de descanso e intensidad de cosecha de 7 cm. El análisis de los datos fue por pruebas de "t de student". Cantidad y composición del forraje ofrecido, como cantidad y composición del forraje residual, fueron similares (alfa= 0,05) para ambos tratamientos. Los incrementos diarios de altura, número de tallos y hojas en alfalfa y ovillo fueron similares (alfa= 0,05) entre tratamientos, pero en ovillos fue menor (alfa= 0,05) la altura al inicio del período de rebrote, en el pastoreo mixto por una cosecha más severa por parte de las borregas, pero esto no afectó el rebrote del ovillo. Se concluyó que el pastoreo mixto vacas+borregas no ocasionó cambios en los atributos de la pradrera y que la mayor severidad de cosecha en ovillo no ocasionó daños en el rebrote del mismo

Relación entre las principales alteraciones metabólicas con las cardiovasculares durante el trasplante hepático / Relationship between the main metabolic and cardiovascular alterations during liver transplantation

El principal objetivo fue describir la evolución de las concentraciones de calcio iónico sanguíneo (Ca2+), potasio sanguíneo (K+) y magnesio iónico sérico (Mg2+); y su relación con las alteraciones cardiovasculares durante el trasplante ortotópico de hígado (TOH). Se estudiaron 92 pacientes adultos tratados con TOH. Se encontró una correlación inversa entre las concentraciones Mg2+ y citrato para todos los pacientes. El Mg2+ al igual que el Ca2+, es quelado por el citrato y su evolución es una imagen especular a la del citrato. En estos pacientes, no se observó ninguna disritmia que pueda ser atribuida directamente a la hipomagnesemia iónica. En conclusión, los bajos niveles preoperatorios, junto con las trasfusiones masivas de hemoderivados y el incremento de las pérdidas renales, provocan una progresiva hipomagnesemia iónica en los pacientes tratados con TOH. Se propone que la concentración de Mg2+ sea monitorizada y eventualmente tratada, al igual como se realiza con el Ca2+ y el K= (AU)

Relación entre las principales alteraciones metabólicas con las cardiovasculares durante el trasplante hepático / Relationship between the main metabolic and cardiovascular alterations during liver transplantation

El principal objetivo fue describir la evolución de las concentraciones de calcio iónico sanguíneo (Ca2+), potasio sanguíneo (K+) y magnesio iónico sérico (Mg2+); y su relación con las alteraciones cardiovasculares durante el trasplante ortotópico de hígado (TOH). Se estudiaron 92 pacientes adultos tratados con TOH. Se encontró una correlación inversa entre las concentraciones Mg2+ y citrato para todos los pacientes. El Mg2+ al igual que el Ca2+, es quelado por el citrato y su evolución es una imagen especular a la del citrato. En estos pacientes, no se observó ninguna disritmia que pueda ser atribuida directamente a la hipomagnesemia iónica. En conclusión, los bajos niveles preoperatorios, junto con las trasfusiones masivas de hemoderivados y el incremento de las pérdidas renales, provocan una progresiva hipomagnesemia iónica en los pacientes tratados con TOH. Se propone que la concentración de Mg2+ sea monitorizada y eventualmente tratada, al igual como se realiza con el Ca2+ y el K=