Molecular diagnostic for a screening investigation method of tick-borne pathogens in Didelphis albiventris road-killed in north of Paraná, Brazil

The synanthropization of wild animals puts public health at risk by promoting the circulation of zoonotic agents, found naturally in the wild, in the anthropic environment. The objective of this work was to carry out screening by molecular detection of pathogens of the Anaplasmatacea family in Didelphis albiventris, a specie characterized as having a synanthropic habit. Opossums that were dead (n = 25) after being road-killed were collected in the North of Paraná state, southern Brazil during the 2016 and 2018 years, through active search. A questionnaire was filled out with information about the animal and collected place. Biological samples of spleen and liver were collected. The genetic material extracted from the spleen and liver was submitted to molecular diagnosis through PCR for amplification of dsb of Ehrlichia and 16S genes for the other agents of the Anaplasmataceae family. One animal was positive for the genus Ehrlichia in semi-nested PCR for amplification of the 349 bp fragment of the dsb gene in extracted from the liver samples. In PCR for the 16S target no animal was positive. These are preliminary results that reinforce the circulation of Ehrlichia in opossums. To improve the knowledge of these agents in opossums more studies are necessary.(AU)

A sinantropização de animais silvestres coloca em risco a saúde pública por propiciar a circulação de agentes zoonóticos, encontrados naturalmente em ambiente silvestre, no ambiente antrópico. O trabalho teve como objetivo realizar a triagem por detecção molecular de patógenos da família Anaplasmataceae em Didelphis albiventris, espécie caracterizada como de hábito sinantrópico. Gambás mortos (n=25) por atropelamento durante os anos de 2016 e 2018 foram coletados na região norte do Paraná, sul do Brasil, por meio de busca ativa. Realizou-se o preenchimento de formulário com informações sobre a espécie do animal e o local do atropelamento. Foi realizada a necrópsia e coleta de amostras biológicas, de baço e fígado. O material genético extraído de baço e fígado foi submetido a diagnóstico molecular, por meio de PCR, para amplificação dos genes dsb de Ehrlichia sp. e 16S para os demais agentes da família Anaplasmataceae. Um animal foi positivo para o gênero Ehrlichia em semi-nested PCR para a amplificação do fragmento de 349 pb do gene dsb, extraído de fígado. Na PCR para detecção do gene 16S nenhum dos animais foi positivo. Esses resultados preliminares reforçam a circulação de Ehrlichias em gambás. Para melhorar o conhecimento desses agentes em gambás mais estudos são necessários.(AU)

Absence of Trichinella spp. larvae in carcasses of road-killed wild animals in Paraná state, Brazil.

Trichinella spp. are zoonotic parasites that are widely distributed in warm-blooded carnivores and omnivores, including humans. Until the present moment, Brazil has been considered by World Animal Health Organization free from the domestic cycle of trichinellosis, whereas the parasite's sylvatic cycle has the status of infection in limited zones. However, neighboring countries such as Argentina have reports of parasite larvae in the wild fauna. The present study aimed to determine the occurrence of Trichinella spp. in road-killed wild animals in Paraná, Brazil. Biological samples from 71 wild animals-29 Didelphis albiventris, 11 Nasua nasua, ten Cerdocyon thous, seven Dasypus novemcinctus, six Leopardus guttulus, six Sphiggurus spinosus and two Puma concolor-collected from November 2016 to November 2021 were subjected to artificial digestion, following the methodology described in the REGULATION (EC) No. 2075/2005. No Trichinella spp. larvae were detected in the carcasses of the road-killed wild animals. However, considering the wide spectrum of possible reservoirs that could act as a link between the sylvatic and domestic cycles and considering the current Brazilian status of sylvatic trichinellosis in limited zones, frequent monitoring of wild fauna remains necessary.

Apicomplexa parasites in the brains of road-killed wild animals in the State of Paraná, Brazil / Parasitas apicomplexas em cérebro de animais silvestres mortos em estradas do Estado do Paraná, Brasil

The use of run-over wild animals is an efficient strategy for scientific research of pathogens. The aim of this study was to detect DNA from phylum Apicomplexa in the brain of road-killed wild animals from the NorthCentral and North Pioneer mesoregions of Paraná, Brazil. Pre-established transects were run weekly; when found, animals were packed into individual packages and sent for autopsy. The brain fragments were collected and kept at -20 ° C until processing. The DNA extracted from the samples was amplified by nested-PCR for the 18S rDNA gene from the phylum Apicomplexa. All positive samples were submitted to DNA sequencing to define the species. A total of 90 animals were collected, however, only 68 animals (75.6%) that had integrity of the brain were included in the study. It was possible to identify the species by DNA sequencing in four samples: Sarcocystis spp. was identified in one Colaptes melanochloros (Greenbarred woodpecker) and one Mazama gouazoubira (Gray brocket). Neospora caninum was observed in a Leopardus pardalis (Ocelot) and T. gondii was present in Didelphis albiventris (white-eared opossum). The results indicated that parasites with economic and public health relevance were present in wild animals, which may favor infection of humans and animals.(AU)

O uso de animais silvestres atropelados é uma estratégia eficiente para a pesquisa científica de patógenos. O objetivo deste estudo foi detectar DNA de parasitas do filo Apicomplexa em amostras de cérebro de animais silvestres atropelados nas mesorregiões Centro-Norte e Pioneira do Norte do Paraná, Brasil. Os transectos pré-estabelecidos foram percorridos semanalmente; quando encontrados, os animais foram armazenados em embalagens individuais e enviados para autópsia. Os fragmentos cerebrais foram coletados e mantidos a -20 ° C até o processamento. O DNA extraído das amostras foi amplificado por nested-PCR para o gene 18S rDNA do filo Apicomplexa. Todas as amostras positivas foram submetidas ao sequenciamento de DNA para definição da espécie. Um total de 90 animais foram coletados, no entanto, foram incluídos no estudo apenas 68 animais (75,6%) que apresentavam encéfalo. No sequenciamento foi possível identificar parasitos apicomplexos pelo sequenciamento de DNA em quatro amostras: Sarcocystis spp. em Colaptes melanochloros (pica-pau-verde-barrado) e em Mazama gouazoubira (veadocatingueiro); Neospora caninum em Leopardus pardalis (jaguatirica); e T. gondii em Didelphis albiventris (gambá-de-orelha-branca). Os resultados demonstraram que protozoários com relevância econômica e de saúde pública estavam presentes em animais silvestres, o que pode favorecer a infecção de humanos e animais.(AU)

Absence of Trichinella spp. larvae in carcasses of road-killed wild animals in Paraná state, Brazil / Ausência de larvas de Trichinella spp. em carcaças de animais silvestres atropelados no estado do Paraná, Brasil

Trichinella spp. are zoonotic parasites that are widely distributed in warm-blooded carnivores and omnivores, including humans. Until the present moment, Brazil has been considered by World Animal Health Organization free from the domestic cycle of trichinellosis, whereas the parasite's sylvatic cycle has the status of infection in limited zones. However, neighboring countries such as Argentina have reports of parasite larvae in the wild fauna. The present study aimed to determine the occurrence of Trichinella spp. in road-killed wild animals in Paraná, Brazil. Biological samples from 71 wild animals—29 Didelphis albiventris, 11 Nasua nasua, ten Cerdocyon thous, seven Dasypus novemcinctus, six Leopardus guttulus, six Sphiggurus spinosus and two Puma concolor—collected from November 2016 to November 2021 were subjected to artificial digestion, following the methodology described in the REGULATION (EC) No. 2075/2005. No Trichinella spp. larvae were detected in the carcasses of the road-killed wild animals. However, considering the wide spectrum of possible reservoirs that could act as a link between the sylvatic and domestic cycles and considering the current Brazilian status of sylvatic trichinellosis in limited zones, frequent monitoring of wild fauna remains necessary.(AU)

Trichinella spp. é um parasito zoonótico de distribuição mundial detectado em carnívoros e onívoros de sangue quente e humanos. Até o momento, o Brasil é considerado pela Organização Mundial de Saúde Animal livre do ciclo doméstico da doença, enquanto o ciclo silvestre do parasito tem status de infecção em áreas limitadas. No entanto, em países vizinhos como a Argentina, larvas do parasito foram encontradas na fauna silvestre. O presente estudo teve como objetivo determinar a ocorrência de Trichinella spp. em animais silvestres atropelados no Paraná, Brasil. Amostras biológicas de 71 animais silvestres - 29 Didelphis albiventris, 11 Nasua-nasua, dez Cerdocyon thous, sete Dasypus novemcinctus, seis Leopardus gattulus, seis Sphiggurus spinosus e dois Puma concolor- coletadas de novembro de 2016 a novembro de 2021 foram submetidas à digestão artificial, seguindo a metodologia descrita do REGULAMENTO (CE) Nº2075/2005. Não foram encontradas larvas de Trichinella spp. nas carcaças dos animais selvagens atropelados. No entanto, considerando o amplo espectro de possíveis reservatórios que podem atuar como elo entre os ciclos silvestre e doméstico e considerando a condição atual da triquinelose silvestre no Brasil em áreas limitadas, o monitoramento frequente da fauna silvestre é necessário.(AU)

Identification, molecular characterization and factors associated with occurrences of Cryptosporidium spp. in calves on dairy farms in Brazil.

Cattle are an important source of zoonotic species of Cryptosporidium for humans. The aim of this study was to investigate the presence of Cryptosporidium, identify the species and determine the risk factors relating to environment, animals and management among dairy calves in eight Brazilian states. A total of 408 fecal samples from calves aged 1-60 days were analyzed. An epidemiological questionnaire was completed. Sample screening was performed using Ziehl-Neelsen technique and the positive samples were subjected to nested PCR. Cryptosporidium species were identified by means of the PCR-RFLP technique, using SSPI, ASEI and MBOII enzymes. The Ziehl-Neelsen technique showed that 89.7% (35/39) of the farms and 52.9% (216/408) of the samples were positive. Through nested PCR, these protozoa were detected in 54.6% of the samples. The 56 samples subjected to PCR-RFLP presented Cryptosporidium parvum. There was higher prevalence of the parasite in animals aged 7 to 28 days (62.6%). Diarrhea, ages between seven and 28 days and a spring water source were factors associated with the risk of infection. The calf hutch-type management system was associated with reduced infection. These findings demonstrate the high level of Cryptosporidium spp. circulation in cattle herds and the predominance of the species C. parvum.

Evaluation of an active and early surveillance methodology for visceral leishmaniasis by molecular detection in road-killed wild fauna.

The present study aimed to evaluate a methodology for active surveillance of visceral leishmaniasis by detecting Leishmania DNA in organs of wild road-killed animals from November 2016 to October 2018 in the North of Paraná, Brazil. The collection points of road-killed wild animals were georeferenced. The animals were autopsied and samples of bone marrow, lymph node, liver, spleen, and ear skin were collected. Genomic DNA was extracted and subjected to PCR for amplification of Leishmania spp. 18S, kinetoplastic DNA (kDNA), HSP70, and ITS1 genes, and DNA sequencing was performed. The primers used for the amplification of kDNA, ITS1, and HSP70 genes presented non-specific results. Of the 66 mammals collected from 24 different municipalities, one Southern Tamandua (Tamandua tetradactyla) presented DNA of Leishmania spp. in lymph nodes by 18S PCR. DNA sequencing confirmed the results of the subgenus, Viannia, identification. We suggest using the methodology showed in the present study in the active and early surveillance of visceral leishmaniasis in a non-endemic area.

Anti-Toxoplasma gondii and anti-Neospora caninum antibodies in sheep from Paraná state, South Brazil: prevalence and associated factors.

The aim of this study was to evaluate the seroprevalence and factors associated with the presence of anti-Toxoplasma gondii and anti-Neospora caninum antibodies in sheep from Paraná state. The detection of antibodies for T. gondii and N. caninum was performed by homemade and commercial indirect ELISA, respectively. Multiple logistic regression analysis was used to verify the factors associated with the seroprevalence. Antibodies anti-T. gondii and anti-N. caninum were observed in 42.7% and in 17.6% of the animals, respectively. The protective factors associated to seropositive were "some level of confinement" (full or semi-extensive confinement) (OR=0.53) for T. gondii and "use of skilled labor" (OR=0.64) for N. caninum. The risk factors were "presence of cats" (OR=1.75) for T. gondii and "feeding of dogs with sheep placental remains" (OR=1.79) for N. caninum. In addition, to presenting a significant and simultaneous seroprevalence for both agents (9.9% of the animals), the results also indicate that deficiencies in management and environmental sanitation, the presence of reservoirs, and types of exploitation enhance the seropositivity. Thus, studies like this might support sanitary programs and public policies for the prevention of T. gondii and N. caninum in the sheep herds of Paraná state.

Parasites in road-killed wild felines from North of Paraná state, Brazil.

This study aimed to identify the intestinal parasites of road-killed wild felines in the North Central and North, Paraná state, southern Brazil. The animals were monitored by sampling previously established transects. The places where the felines were run over were mapped, the animals were identified, and the gastrointestinal tract was evaluated. The feces were submitted to coproparasitological techniques of spontaneous sedimentation, floating in hypersaturated NaCl solution and centrifugal floating in zinc sulfate. All the parasitic structures detected were photomicrographed. In the coproparasitological analyses were identified oocysts of Cystoisospora spp., eggs of Ancylostomatidae, and Capillaria spp.; eggs of Aelurostrongylus spp., Toxocara spp., Physaloptera spp., Taenia spp., and Spirometra spp.; Aelurostrongylus abstrusus larvae; and eggs and adults of Ancylostoma cati and Taenia spp. One of the cats was parasitized by a flea of Ctenocephalides felis felis. Based on these results, the animals analyzed in this study supplied important samples for the evaluation of parasitic diversity of North of Paraná and suggested that this region may have conditions that allow the maintenance of these parasites life cycles in the environment and among wildlife.

Seroprevalence and associated risk factors of ovine neosporosis worldwide: a systematic review and meta-analysis / Soroprevalência e fatores de risco associados à neosporose ovina no mundo: uma revisão sistemática e metanálise

Neosporosis, caused by the protozoan Neospora caninum, has been widely reported and discussed as a major disease associated with reproductive problems in herds of various animal species. This study aimed to perform a systematic review and meta-analysis on the prevalence and risk factors associated with ovine neosporosis worldwide. This is the first systematic review, which was performed according to the established preferred reporting items in systematic reviews and meta-analyses (PRISMA) guidelines to address ovine neosporosis. Four databases were used in this study: PubMed, SciELO, Web of Science, and Scopus. The selected keywords were “neospora AND sheep,” “neosporosis AND sheep,” “neospora AND lamb,” “neosporosis AND lamb,” “neospora AND ewe,” and “neosporosis AND ewe.” The meta-analysis calculations were performed with random-effects models for proportions, and heterogeneity was tested using the I2 test. This study identified 24 studies on ovine neosporosis, nine of which evaluated the factors associated with the risk of seropositivity. After meta-analysis, the pooled estimated prevalence was 12% (95% CI, 8-16%; I² p-value < 0.01). The evaluation of the included studies allowed the identification of ovine neosporosis distribution in continents according to demonstrated prevalence rates. We confirmed via metaanalysis that the use of indirect immunofluorescence assay (IFAT) or enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) in the diagnosis of ovine neosporosis was not a source of data heterogeneity. The presence of dogs on the properties was reported as the main risk factor associated with the occurrence of ovine neosporosis; however, this was not confirmed by the meta-analysis.

A neosporose, causada pelo protozoário Neospora caninum, tem sido amplamente relatada e discutida como uma das principais doenças associadas a problemas reprodutivos em rebanhos de várias espécies animais. Este estudo teve como objetivo realizar uma revisão sistemática e meta-análise sobre a prevalência e os fatores de risco associados à neosporose ovina em todo o mundo. Esta é a primeira revisão sistemática, que foi realizada de acordo com os itens de relatório preferidos estabelecidos em revisões sistemáticas e diretrizes de meta-análises (PRISMA) para tratar da neosporose ovina. Quatro bases de dados foram utilizadas neste estudo: PubMed, SciELO, Web of Science e Scopus. As palavras-chave selecionadas foram “neospora AND sheep”, “neosporose AND sheep”, “neospora AND lamb”, “neosporose AND lamb”, “neospora AND ewe” e “neosporose AND ewe”. Os cálculos da meta-análise foram realizados com modelos de efeitos aleatórios para proporções, e a heterogeneidade foi testada usando o teste I2. Este estudo identificou 24 estudos sobre neosporose ovina, nove dos quais avaliaram os fatores associados ao risco de soropositividade. Após a meta-análise, a prevalência estimada combinada foi de 12% (IC 95%, 8-16%; I² valor de p < 0,01). A avaliação dos estudos incluídos permitiu identificar a distribuição da neosporose ovina nos continentes de acordo com as prevalências demonstradas. Confirmamos por meio de meta-análise que o uso de ensaio de imunofluorescência indireta (IFI) ou ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA) no diagnóstico de neosporose ovina não foi uma fonte de heterogeneidade de dados. A presença de cães nas propriedades foi relatada como o principal fator de risco associado à ocorrência de neosporose ovina; no entanto, isso não foi confirmado pela meta-análise.

Seroprevalence and associated risk factors of ovine neosporosis worldwide: a systematic review and metaanalysis / Soroprevalência e fatores de risco associados à neosporose ovina no mundo: uma revisão sistemática e metanálise

Neosporosis, caused by the protozoan Neospora caninum, has been widely reported and discussed as a major disease associated with reproductive problems in herds of various animal species. This study aimed to perform a systematic review and meta-analysis on the prevalence and risk factors associated with ovine neosporosis worldwide. This is the first systematic review, which was performed according to the established preferred reporting items in systematic reviews and meta-analyses (PRISMA) guidelines to address ovine neosporosis. Four databases were used in this study: PubMed, SciELO, Web of Science, and Scopus. The selected keywords were "neospora AND sheep," "neosporosis AND sheep," "neospora AND lamb," "neosporosis AND lamb," "neospora AND ewe," and "neosporosis AND ewe". The meta-analysis calculations were performed with random-effects models for proportions, and heterogeneity was tested using the I² test. This study identified 24 studies on ovine neosporosis, nine of which evaluated the factors associated with the risk of seropositivity. After meta-analysis, the pooled estimated prevalence was 12% (95% CI, 8-16%; I² p-value < 0.01). The evaluation of the included studies allowed the identification of ovine neosporosis distribution in continents according to demonstrated prevalence rates. We confirmed via meta analysis that the use of indirect immunofluorescence assay (IFAT) or enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) in the diagnosis of ovine neosporosis was not a source of data heterogeneity. The presence of dogs on the properties was reported as the main risk factor associated with the occurrence of ovine neosporosis; however, this was not confirmed by the meta-analysis.

A neosporose, causada pelo protozoário Neospora caninum, tem sido amplamente relatada e discutida como uma das principais doenças associadas a problemas reprodutivos em rebanhos de várias espécies animais. Este estudo teve como objetivo realizar uma revisão sistemática e meta-análise sobre a prevalência e os fatores de risco associados à neosporose ovina em todo o mundo. Esta é a primeira revisão sistemática, que foi realizada de acordo com os itens de relatório preferidos estabelecidos em revisões sistemáticas e diretrizes de meta-análises (PRISMA) para tratar da neosporose ovina. Quatro bases de dados foram utilizadas neste estudo: PubMed, SciELO, Web of Science e Scopus. As palavras-chave selecionadas foram "neospora AND sheep", "neosporose AND sheep", "neospora AND lamb", "neosporose AND lamb", "neospora AND ewe" e "neosporose AND ewe". Os cálculos da meta-análise foram realizados com modelos de efeitos aleatórios para proporções, e a heterogeneidade foi testada usando o teste I2. Este estudo identificou 24 estudos sobre neosporose ovina, nove dos quais avaliaram os fatores associados ao risco de soropositividade. Após a meta-análise, a prevalência estimada combinada foi de 12% (IC 95%, 8-16%; I² valor de p < 0,01). A avaliação dos estudos incluídos permitiu identificar a distribuição da neosporose ovina nos continentes de acordo com as prevalências demonstradas. Confirmamos por meio de meta-análise que o uso de ensaio de imunofluorescência indireta (IFI) ou ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA) no diagnóstico de neosporose ovina não foi uma fonte de heterogeneidade de dados. A presença de cães nas propriedades foi relatada como o principal fator de risco associado à ocorrência de neosporose ovina; no entanto, isso não foi confirmado pela meta-análise.

Seroprevalence and associated risk factors of ovine neosporosis worldwide: a systematic review and meta-analysis / Soroprevalência e fatores de risco associados à neosporose ovina no mundo: uma revisão sistemática e metanálise

Neosporosis, caused by the protozoan Neospora caninum, has been widely reported and discussed as a major disease associated with reproductive problems in herds of various animal species. This study aimed to perform a systematic review and meta-analysis on the prevalence and risk factors associated with ovine neosporosis worldwide. This is the first systematic review, which was performed according to the established preferred reporting items in systematic reviews and meta-analyses (PRISMA) guidelines to address ovine neosporosis. Four databases were used in this study: PubMed, SciELO, Web of Science, and Scopus. The selected keywords were “neospora AND sheep,” “neosporosis AND sheep,” “neospora AND lamb,” “neosporosis AND lamb,” “neospora AND ewe,” and “neosporosis AND ewe.” The meta-analysis calculations were performed with random-effects models for proportions, and heterogeneity was tested using the I2 test. This study identified 24 studies on ovine neosporosis, nine of which evaluated the factors associated with the risk of seropositivity. After meta-analysis, the pooled estimated prevalence was 12% (95% CI, 8-16%; I² p-value < 0.01). The evaluation of the included studies allowed the identification of ovine neosporosis distribution in continents according to demonstrated prevalence rates. We confirmed via metaanalysis that the use of indirect immunofluorescence assay (IFAT) or enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) in the diagnosis of ovine neosporosis was not a source of data heterogeneity. The presence of dogs on the properties was reported as the main risk factor associated with the occurrence of ovine neosporosis; however, this was not confirmed by the meta-analysis.(AU)

A neosporose, causada pelo protozoário Neospora caninum, tem sido amplamente relatada e discutida como uma das principais doenças associadas a problemas reprodutivos em rebanhos de várias espécies animais. Este estudo teve como objetivo realizar uma revisão sistemática e meta-análise sobre a prevalência e os fatores de risco associados à neosporose ovina em todo o mundo. Esta é a primeira revisão sistemática, que foi realizada de acordo com os itens de relatório preferidos estabelecidos em revisões sistemáticas e diretrizes de meta-análises (PRISMA) para tratar da neosporose ovina. Quatro bases de dados foram utilizadas neste estudo: PubMed, SciELO, Web of Science e Scopus. As palavras-chave selecionadas foram “neospora AND sheep”, “neosporose AND sheep”, “neospora AND lamb”, “neosporose AND lamb”, “neospora AND ewe” e “neosporose AND ewe”. Os cálculos da meta-análise foram realizados com modelos de efeitos aleatórios para proporções, e a heterogeneidade foi testada usando o teste I2. Este estudo identificou 24 estudos sobre neosporose ovina, nove dos quais avaliaram os fatores associados ao risco de soropositividade. Após a meta-análise, a prevalência estimada combinada foi de 12% (IC 95%, 8-16%; I² valor de p < 0,01). A avaliação dos estudos incluídos permitiu identificar a distribuição da neosporose ovina nos continentes de acordo com as prevalências demonstradas. Confirmamos por meio de meta-análise que o uso de ensaio de imunofluorescência indireta (IFI) ou ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA) no diagnóstico de neosporose ovina não foi uma fonte de heterogeneidade de dados. A presença de cães nas propriedades foi relatada como o principal fator de risco associado à ocorrência de neosporose ovina; no entanto, isso não foi confirmado pela meta-análise.(AU)

Evaluation of an active and early surveillance methodology for visceral leishmaniasis by molecular detection in road-killed wild fauna / Avaliação de metodologia de vigilância ativa e precoce da leishmaniosevisceral por detecção molecular em fauna silvestre atropelada

The present study aimed to evaluate a methodology for active surveillance of visceral leishmaniasis by detecting Leishmania DNA in organs of wild road-killed animals from November 2016 to October 2018 in the North of Paraná, Brazil. The collection points of road-killed wild animals were georeferenced. The animals were autopsied and samples of bone marrow, lymph node, liver, spleen, and ear skin were collected. Genomic DNA was extracted and subjected to PCR for amplification of Leishmania spp. 18S, kinetoplastic DNA (kDNA), HSP70, and ITS1 genes, and DNA sequencing was performed. The primers used for the amplification of kDNA, ITS1, and HSP70 genes presented non-specific results. Of the 66 mammals collected from 24 different municipalities, one Southern Tamandua (Tamandua tetradactyla) presented DNA of Leishmania spp. in lymph nodes by 18S PCR. DNA sequencing confirmed the results of the subgenus, Viannia, identification. We suggest using the methodology showed in the present study in the active and early surveillance of visceral leishmaniasis in a non-endemic area.(AU)

O objetivo do presente estudo foi avaliar uma metodologia de vigilância ativa da leishmaniose visceral por meio da detecção de DNA de Leishmania em órgãos de animais silvestres atropelados, de novembro de 2016 a outubro de 2018, no Norte do Paraná, Brasil. Os pontos de coleta dos animais silvestres atropelados foram georreferenciados. Os animais foram autopsiados e amostras de medula óssea, linfonodo, fígado, baço, e pele de orelha foram coletados. DNA genômico foi extraído e submetido à PCR para amplificação de quatro diferentes regiões de Leishmania spp.: 18S, kDNA, HSP70 e ITS1, sequenciamento de DNA foi realizado. Os iniciadores utilizados para a amplificação dos genes kDNA, ITS1 e HSP70 apresentaram resultados inespecíficos. Dos 66 mamíferos coletados em 24 diferentes municípios, um tamanduá-mirim (Tamandua tetradactyla) apresentou DNA de Leishmania spp. em linfonodo na PCR, que amplificou o gene 18S. O sequenciamento de DNA confirmou o resultado e demonstrou a presença do subgênero Viannia. Sugere-se o uso da metodologia apresentada no presente estudo na vigilância ativa e precoce da leishmaniose visceral em área não endêmica.(AU)

Anti-Toxoplasma gondii and anti-Neospora caninum antibodies in sheep from Paraná state, South Brazil: prevalence and associated factors / Anticorpos anti-Toxoplasma gondii e anti-Neospora caninum em ovinos do estado do Paraná, sul do Brasil: prevalência e fatores associados

The aim of this study was to evaluate the seroprevalence and factors associated with the presence of anti-Toxoplasma gondii and anti-Neospora caninum antibodies in sheep from Paraná state. The detection of antibodies for T. gondii and N. caninum was performed by homemade and commercial indirect ELISA, respectively. Multiple logistic regression analysis was used to verify the factors associated with the seroprevalence. Antibodies anti-T. gondii and anti-N. caninum were observed in 42.7% and in 17.6% of the animals, respectively. The protective factors associated to seropositive were some level of confinement (full or semi-extensive confinement) (OR=0.53) for T. gondii and use of skilled labor (OR=0.64) for N. caninum. The risk factors were presence of cats (OR=1.75) for T. gondii and feeding of dogs with sheep placental remains (OR=1.79) for N. caninum. In addition, to presenting a significant and simultaneous seroprevalence for both agents (9.9% of the animals), the results also indicate that deficiencies in management and environmental sanitation, the presence of reservoirs, and types of exploitation enhance the seropositivity. Thus, studies like this might support sanitary programs and public policies for the prevention of T. gondii and N. caninum in the sheep herds of Paraná state.(AU)

O objetivo deste estudo foi avaliar a soroprevalência e os fatores de risco associados à presença de anticorpos contra Toxoplasma gondii e Neospora caninum em ovinos do Paraná. A detecção dos anticorpos para T. gondii e N. caninum foi realizada, usando-se testes de ELISA indireto caseiro e comercial, respectivamente. A análise de regressão logística múltipla foi usada para verificar os fatores de risco associados à soroprevalência. Anticorpos anti-T. gondii e anti-N. caninum foram observados em 42,7% e em 17,6% dos animais, respectivamente. Os fatores de proteção associados à soropositividade foram algum nível de confinamento (confinamento ou semiextensivo) (OR=0,53) para T. gondii e presença de mão de obra especializada para N. caminum (OR=0,64). Os fatores de risco foram presença de gatos para T. gondii (OR=1,75) e alimentação de cães com resíduos placentários (OR=1,79) para N. caninum. Além de apresentar uma significante e simultânea soroprevalência para ambos os agentes (9,9% dos animais), os resultados também indicam que as deficiências em gestão e saneamento ambiental, a presença de reservatórios e os tipos de exploração favorecem a soropositividade. Dessa forma, estudos como estes podem auxiliar em programas sanitários e políticas públicas para a prevenção de T. gondii e N. caninum nos rebanhos ovinos do Paraná.(AU)

Parasites in road-killed wild felines from North of Paraná state, Brazil / Parasitas em felinos selvagens mortos em estradas do norte do estado do Paraná, Brasil

This study aimed to identify the intestinal parasites of road-killed wild felines in the North Central and North, Paraná state, southern Brazil. The animals were monitored by sampling previously established transects. The places where the felines were run over were mapped, the animals were identified, and the gastrointestinal tract was evaluated. The feces were submitted to coproparasitological techniques of spontaneous sedimentation, floating in hypersaturated NaCl solution and centrifugal floating in zinc sulfate. All the parasitic structures detected were photomicrographed. In the coproparasitological analyses were identified oocysts of Cystoisospora spp., eggs of Ancylostomatidae, and Capillaria spp.; eggs of Aelurostrongylus spp., Toxocara spp., Physaloptera spp., Taenia spp., and Spirometra spp.; Aelurostrongylus abstrusus larvae; and eggs and adults of Ancylostoma cati and Taenia spp. One of the cats was parasitized by a flea of Ctenocephalides felis felis. Based on these results, the animals analyzed in this study supplied important samples for the evaluation of parasitic diversity of North of Paraná and suggested that this region may have conditions that allow the maintenance of these parasites life cycles in the environment and among wildlife.(AU)

O objetivo deste trabalho foi identificar os parasitas intestinais de felinos silvestres mortos em estradas nas regiões Norte Central e Norte, Paraná, sul do Brasil. Os animais foram monitorados por amostragem de transectos previamente estabelecidos. Os locais de atropelamento foram mapeados, os animais foram identificados e enviados para autópsias, durante as quais amostras de fezes foram coletadas e submetidas a técnicas coproparasitológicas de sedimentação espontânea, flutuação em solução hipersaturada de NaCl e flutuação por centrífugação em sulfato de zinco e fotografadas, quando estruturas parasitárias estavam presentes. Nas análises coproparasitológicas, foram identificados oocistos de Cystoisospora spp., ovos de Ancylostomatidae e Capillaria spp, Aelurostrongylus spp., Toxocara spp., Physaloptera spp., Taenia spp. e Spirometra spp.; larvas de Aelurostrongylus abstrusus; e ovos e adultos de Ancylostoma cati e Taenia spp. Um dos felídeos estava parasitado por Ctenocephalides felis felis. Com base nesses resultados, os animais analisados neste estudo forneceram amostras importantes para a avaliação da diversidade parasitária do Norte do Paraná e sugeriram que esta região pode apresentar condições que possibilitem a manutenção dos ciclos de vida desses parasitas no ambiente e entre a vida silvestre.(AU)

Seroprevalence and associated risk factors of ovine neosporosis worldwide: a systematic review and metaanalysis / Soroprevalência e fatores de risco associados à neosporose ovina no mundo: uma revisão sistemática e metanálise

Neosporosis, caused by the protozoan Neospora caninum, has been widely reported and discussed as a major disease associated with reproductive problems in herds of various animal species. This study aimed to perform a systematic review and meta-analysis on the prevalence and risk factors associated with ovine neosporosis worldwide. This is the first systematic review, which was performed according to the established preferred reporting items in systematic reviews and meta-analyses (PRISMA) guidelines to address ovine neosporosis. Four databases were used in this study: PubMed, SciELO, Web of Science, and Scopus. The selected keywords were "neospora AND sheep," "neosporosis AND sheep," "neospora AND lamb," "neosporosis AND lamb," "neospora AND ewe," and "neosporosis AND ewe". The meta-analysis calculations were performed with random-effects models for proportions, and heterogeneity was tested using the I² test. This study identified 24 studies on ovine neosporosis, nine of which evaluated the factors associated with the risk of seropositivity. After meta-analysis, the pooled estimated prevalence was 12% (95% CI, 8-16%; I² p-value < 0.01). The evaluation of the included studies allowed the identification of ovine neosporosis distribution in continents according to demonstrated prevalence rates. We confirmed via meta analysis that the use of indirect immunofluorescence assay (IFAT) or enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) in the diagnosis of ovine neosporosis was not a source of data heterogeneity. The presence of dogs on the properties was reported as the main risk factor associated with the occurrence of ovine neosporosis; however, this was not confirmed by the meta-analysis.(AU)

A neosporose, causada pelo protozoário Neospora caninum, tem sido amplamente relatada e discutida como uma das principais doenças associadas a problemas reprodutivos em rebanhos de várias espécies animais. Este estudo teve como objetivo realizar uma revisão sistemática e meta-análise sobre a prevalência e os fatores de risco associados à neosporose ovina em todo o mundo. Esta é a primeira revisão sistemática, que foi realizada de acordo com os itens de relatório preferidos estabelecidos em revisões sistemáticas e diretrizes de meta-análises (PRISMA) para tratar da neosporose ovina. Quatro bases de dados foram utilizadas neste estudo: PubMed, SciELO, Web of Science e Scopus. As palavras-chave selecionadas foram "neospora AND sheep", "neosporose AND sheep", "neospora AND lamb", "neosporose AND lamb", "neospora AND ewe" e "neosporose AND ewe". Os cálculos da meta-análise foram realizados com modelos de efeitos aleatórios para proporções, e a heterogeneidade foi testada usando o teste I2. Este estudo identificou 24 estudos sobre neosporose ovina, nove dos quais avaliaram os fatores associados ao risco de soropositividade. Após a meta-análise, a prevalência estimada combinada foi de 12% (IC 95%, 8-16%; I² valor de p < 0,01). A avaliação dos estudos incluídos permitiu identificar a distribuição da neosporose ovina nos continentes de acordo com as prevalências demonstradas. Confirmamos por meio de meta-análise que o uso de ensaio de imunofluorescência indireta (IFI) ou ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA) no diagnóstico de neosporose ovina não foi uma fonte de heterogeneidade de dados. A presença de cães nas propriedades foi relatada como o principal fator de risco associado à ocorrência de neosporose ovina; no entanto, isso não foi confirmado pela meta-análise.(AU)

Identification, molecular characterization and factors associated with occurrences of Cryptosporidium spp. in calves on dairy farms in Brazil / Identificação, caracterização molecular e fatores associados à ocorrência de Cryptosporidium spp. em bezerros de propriedades leiteiras no Brasil

Abstract Cattle are an important source of zoonotic species of Cryptosporidium for humans. The aim of this study was to investigate the presence of Cryptosporidium, identify the species and determine the risk factors relating to environment, animals and management among dairy calves in eight Brazilian states. A total of 408 fecal samples from calves aged 1-60 days were analyzed. An epidemiological questionnaire was completed. Sample screening was performed using Ziehl-Neelsen technique and the positive samples were subjected to nested PCR. Cryptosporidium species were identified by means of the PCR-RFLP technique, using SSPI, ASEI and MBOII enzymes. The Ziehl-Neelsen technique showed that 89.7% (35/39) of the farms and 52.9% (216/408) of the samples were positive. Through nested PCR, these protozoa were detected in 54.6% of the samples. The 56 samples subjected to PCR-RFLP presented Cryptosporidium parvum. There was higher prevalence of the parasite in animals aged 7 to 28 days (62.6%). Diarrhea, ages between seven and 28 days and a spring water source were factors associated with the risk of infection. The calf hutch-type management system was associated with reduced infection. These findings demonstrate the high level of Cryptosporidium spp. circulation in cattle herds and the predominance of the species C. parvum.

Resumo O gado é uma fonte importante de espécies zoonóticas de Cryptosporidium para o homem. O objetivo deste estudo foi investigar a presença de Cryptosporidium, identificar a espécie e determinar os fatores de risco relacionados ao meio ambiente, aos animais e ao manejo em bezerros leiteiros em oito estados brasileiros. Um total de 408 amostras fecais de bezerros, com idade entre 1 e 60 dias, foram analisadas. Um questionário epidemiológico foi preenchido. A triagem das amostras foi realizada pela técnica de Ziehl-Neelsen, e as amostras positivas foram submetidas à "nested" PCR. As espécies de Cryptosporidium foram identificadas pela técnica de PCR-RFLP, utilizando-se as enzimas SSPI, ASEI e MBOII. A técnica de Ziehl-Neelsen mostrou que 89,7% (35/39) das fazendas e 52,9% (216/408) das amostras foram positivas. Por meio de nested PCR, esses protozoários foram detectados em 54,6% das amostras. As 56 amostras submetidas à PCR-RFLP apresentaram Cryptosporidium parvum. Houve maior prevalência do parasita em animais de 7 a 28 dias (62,6%). Diarreia, idade entre sete e 28 dias, e fonte de água mineral foram fatores associados ao risco de infecção. O sistema de manejo do tipo "casinha" para bezerros foi associado à redução da infecção. Esses achados demonstram o alto nível de Cryptosporidium spp. em circulação nos rebanhos bovinos e o predomínio da espécie C. parvum.

Anti-Toxoplasma gondii and anti-Neospora caninum antibodies in sheep from Paraná state, South Brazil: prevalence and associated factors / Anticorpos anti-Toxoplasma gondii e anti-Neospora caninum em ovinos do estado do Paraná, sul do Brasil: prevalência e fatores associados

Abstract The aim of this study was to evaluate the seroprevalence and factors associated with the presence of anti-Toxoplasma gondii and anti-Neospora caninum antibodies in sheep from Paraná state. The detection of antibodies for T. gondii and N. caninum was performed by homemade and commercial indirect ELISA, respectively. Multiple logistic regression analysis was used to verify the factors associated with the seroprevalence. Antibodies anti-T. gondii and anti-N. caninum were observed in 42.7% and in 17.6% of the animals, respectively. The protective factors associated to seropositive were "some level of confinement" (full or semi-extensive confinement) (OR=0.53) for T. gondii and "use of skilled labor" (OR=0.64) for N. caninum. The risk factors were "presence of cats" (OR=1.75) for T. gondii and "feeding of dogs with sheep placental remains" (OR=1.79) for N. caninum. In addition, to presenting a significant and simultaneous seroprevalence for both agents (9.9% of the animals), the results also indicate that deficiencies in management and environmental sanitation, the presence of reservoirs, and types of exploitation enhance the seropositivity. Thus, studies like this might support sanitary programs and public policies for the prevention of T. gondii and N. caninum in the sheep herds of Paraná state.

Resumo O objetivo deste estudo foi avaliar a soroprevalência e os fatores de risco associados à presença de anticorpos contra Toxoplasma gondii e Neospora caninum em ovinos do Paraná. A detecção dos anticorpos para T. gondii e N. caninum foi realizada, usando-se testes de ELISA indireto caseiro e comercial, respectivamente. A análise de regressão logística múltipla foi usada para verificar os fatores de risco associados à soroprevalência. Anticorpos anti-T. gondii e anti-N. caninum foram observados em 42,7% e em 17,6% dos animais, respectivamente. Os fatores de proteção associados à soropositividade foram "algum nível de confinamento (confinamento ou semiextensivo)" (OR=0,53) para T. gondii e "presença de mão de obra especializada" para N. caminum (OR=0,64). Os fatores de risco foram "presença de gatos" para T. gondii (OR=1,75) e "alimentação de cães com resíduos placentários" (OR=1,79) para N. caninum. Além de apresentar uma significante e simultânea soroprevalência para ambos os agentes (9,9% dos animais), os resultados também indicam que as deficiências em gestão e saneamento ambiental, a presença de reservatórios e os tipos de exploração favorecem a soropositividade. Dessa forma, estudos como estes podem auxiliar em programas sanitários e políticas públicas para a prevenção de T. gondii e N. caninum nos rebanhos ovinos do Paraná.

Evaluation of an active and early surveillance methodology for visceral leishmaniasis by molecular detection in road-killed wild fauna / Avaliação de metodologia de vigilância ativa e precoce da leishmaniose visceral por detecção molecular em fauna silvestre atropelada

Abstract The present study aimed to evaluate a methodology for active surveillance of visceral leishmaniasis by detecting Leishmania DNA in organs of wild road-killed animals from November 2016 to October 2018 in the North of Paraná, Brazil. The collection points of road-killed wild animals were georeferenced. The animals were autopsied and samples of bone marrow, lymph node, liver, spleen, and ear skin were collected. Genomic DNA was extracted and subjected to PCR for amplification of Leishmania spp. 18S, kinetoplastic DNA (kDNA), HSP70, and ITS1 genes, and DNA sequencing was performed. The primers used for the amplification of kDNA, ITS1, and HSP70 genes presented non-specific results. Of the 66 mammals collected from 24 different municipalities, one Southern Tamandua (Tamandua tetradactyla) presented DNA of Leishmania spp. in lymph nodes by 18S PCR. DNA sequencing confirmed the results of the subgenus, Viannia, identification. We suggest using the methodology showed in the present study in the active and early surveillance of visceral leishmaniasis in a non-endemic area.

Resumo O objetivo do presente estudo foi avaliar uma metodologia de vigilância ativa da leishmaniose visceral por meio da detecção de DNA de Leishmania em órgãos de animais silvestres atropelados, de novembro de 2016 a outubro de 2018, no Norte do Paraná, Brasil. Os pontos de coleta dos animais silvestres atropelados foram georreferenciados. Os animais foram autopsiados e amostras de medula óssea, linfonodo, fígado, baço, e pele de orelha foram coletados. DNA genômico foi extraído e submetido à PCR para amplificação de quatro diferentes regiões de Leishmania spp.: 18S, kDNA, HSP70 e ITS1, sequenciamento de DNA foi realizado. Os iniciadores utilizados para a amplificação dos genes kDNA, ITS1 e HSP70 apresentaram resultados inespecíficos. Dos 66 mamíferos coletados em 24 diferentes municípios, um tamanduá-mirim (Tamandua tetradactyla) apresentou DNA de Leishmania spp. em linfonodo na PCR, que amplificou o gene 18S. O sequenciamento de DNA confirmou o resultado e demonstrou a presença do subgênero Viannia. Sugere-se o uso da metodologia apresentada no presente estudo na vigilância ativa e precoce da leishmaniose visceral em área não endêmica.

Seroprevalence and associated risk factors of ovine neosporosis worldwide: a systematic review and meta-analysis / Soroprevalência e fatores de risco associados à neosporose ovina no mundo: uma revisão sistemática e metanálise

Neosporosis, caused by the protozoan Neospora caninum, has been widely reported and discussed as a major disease associated with reproductive problems in herds of various animal species. This study aimed to perform a systematic review and meta-analysis on the prevalence and risk factors associated with ovine neosporosis worldwide. This is the first systematic review, which was performed according to the established preferred reporting items in systematic reviews and meta-analyses (PRISMA) guidelines to address ovine neosporosis. Four databases were used in this study: PubMed, SciELO, Web of Science, and Scopus. The selected keywords were “neospora AND sheep,” “neosporosis AND sheep,” “neospora AND lamb,” “neosporosis AND lamb,” “neospora AND ewe,” and “neosporosis AND ewe.” The meta-analysis calculations were performed with random-effects models for proportions, and heterogeneity was tested using the I2 test. This study identified 24 studies on ovine neosporosis, nine of which evaluated the factors associated with the risk of seropositivity. After meta-analysis, the pooled estimated prevalence was 12% (95% CI, 8-16%; I² p-value < 0.01). The evaluation of the included studies allowed the identification of ovine neosporosis distribution in continents according to demonstrated prevalence rates. We confirmed via meta-analysis that the use of indirect imm

A neosporose, causada pelo protozoário Neospora caninum, tem sido amplamente relatada e discutida como uma das principais doenças associadas a problemas reprodutivos em rebanhos de várias espécies animais. Este estudo teve como objetivo realizar uma revisão sistemática e meta-análise sobre a prevalência e os fatores de risco associados à neosporose ovina em todo o mundo. Esta é a primeira revisão sistemática, que foi realizada de acordo com os itens de relatório preferidos estabelecidos em revisões sistemáticas e diretrizes de meta-análises (PRISMA) para tratar da neosporose ovina. Quatro bases de dados foram utilizadas neste estudo: PubMed, SciELO, Web of Science e Scopus. As palavras-chave selecionadas foram “neospora AND sheep”, “neosporose AND sheep”, “neospora AND lamb”, “neosporose AND lamb”, “neospora AND ewe” e “neosporose AND ewe”. Os cálculos da meta-análise foram realizados com modelos de efeitos aleatórios para proporções, e a heterogeneidade foi testada usando o teste I2. Este estudo identificou 24 estudos sobre neosporose ovina, nove dos quais avaliaram os fatores associados ao risco de soropositividade. Após a meta-análise, a prevalência estimada combinada foi de 12% (IC 95%, 8-16%; I² valor de p < 0,01). A avaliação dos estudos incluídos permitiu identificar a distribuição da neosporose ovina nos continent

Toxoplasma gondii and Neospora caninum infections and factors associated in goats in the Parana state, Southern Brazil.

The aim of this study was to determine the occurrence of anti-Toxoplasma gondii and anti-Neospora caninum antibodies and their associated factors among goats in farms from the Paraná state, South Brazil. The serological analysis was performed by indirect ELISA on 629 goat serum samples collected from 32 farms distributed in five mesorregions from the state. Seropositivity was observed in 30.7% of the animals for T. gondii, 6.3% for N. caninum, and 3.0% for both agents. Final multiple regression models showed that the use of assisted reproduction decreased the chance of seropositivity for T. gondii (PR=0.70) and the slaughtering site on the farm (PR=2.03) increased it. To N. caninum, the supplying concentrated feed to animals (OR=4.80) and animal pre-weaning death (OR=9.96) increased the chance of seropositivity. The variables associated with these seropositivities suggest deficiencies in sanitation and reproductive management. In addition, it recognizes critical points of infection for animal production management.