RESUMO
Introducción: la mangiferina es una glucosil xantona natural presente en varias partes de Mangifera indica L. (árbol del mango), que posee gran variedad de efectos farmacológicos. Su aislamiento, a partir de las hojas, es de vital importancia teniendo en cuenta las propiedades farmacológicas que se le atribuyen por sí sola. En Cuba, se ha desarrollado un procedimiento nacional de obtención de mangiferina a partir de hojas de M. indica, empleando un método tradicional en tanque agitado, que incluye una etapa de desengrase, sin embargo continúan los estudios encaminados al uso de métodos no convencionales de extracción como el ultrasonido, teniendo en cuenta la rapidez y eficiencia en la obtención de fitoconstituyentes. Objetivo: evaluar la etapa de extracción de la fracción apolar en el proceso de extracción de mangiferina mediante ultrasonido a partir de hojas de M. indica. Métodos: se trabajó con hojas de M. indica, molidas y almacenadas en bolsas de nylon a temperatura y humedad ambientes. Se evaluó la influencia de los parámetros de operación (tiempo y relación disolvente material vegetal) en la etapa de desengrase, mediante un diseño factorial de superficie de respuesta, utilizando el ultrasonido. Resultados: el mejor valor experimental (29,03 ± 1,10 mg/g) se alcanza para un tiempo de 90 min y una relación volumen de disolvente/ material vegetal de 47 mL/g, empleando n-hexano como disolvente. Conclusiones: el método de ultrasonido es adecuado para la extracción de la fracción apolar en el proceso de obtención de mangiferina a partir de hojas de M. indica(AU)
Introduction: mangiferin is a natural glucosyl xanthone found in several parts of Mangifera indica L. (mango tree) which has a great variety of pharmacological effects. Its isolation from leaves is of great importance, considering the pharmacological properties attributed to it. A national procedure has been developed in Cuba to obtain mangiferin from M. indica leaves using a traditional stirred tank procedure which includes a degreasing stage. However, studies continue to be conducted about the use of unconventional extraction techniques such as ultrasound, due to the speed and efficacy with which phytoconstituents may be obtained. Objective: evaluate the apolar fraction extraction stage of the process of ultrasound extraction of mangiferin from M. indica leaves. Methods: M. indica leaves were ground and stored in plastic bags at ambient temperature and humidity. Operating parameters (time and solvent/plant material ratio) were evaluated at the degreasing stage with a response surface factorial design, using ultrasound. Results: the best experimental value (29.03 ± 1.10 mg/g) is obtained for a time of 90 min and a solvent volume/plant material ratio of 47 ml/g, using n-hexane as solvent. Conclusions: the ultrasound technique is appropriate for apolar fraction extraction of mangiferin from M. indica leaves(AU)
Assuntos
Mangifera/uso terapêutico , Medicamentos de Referência , CubaRESUMO
Introducción: la mangiferina es una glucosil xantona natural presente en varias partes de Mangifera indica L. (árbol del mango), que posee gran variedad de efectos farmacológicos. Su aislamiento, a partir de las hojas, es de vital importancia teniendo en cuenta las propiedades farmacológicas que se le atribuyen por sí sola. En Cuba, se ha desarrollado un procedimiento nacional de obtención de mangiferina a partir de hojas de M. indica, empleando un método tradicional en tanque agitado, que incluye una etapa de desengrase, sin embargo continúan los estudios encaminados al uso de métodos no convencionales de extracción como el ultrasonido, teniendo en cuenta la rapidez y eficiencia en la obtención de fitoconstituyentes. Objetivo: evaluar la etapa de extracción de la fracción apolar en el proceso de extracción de mangiferina mediante ultrasonido a partir de hojas de M. indica. Métodos: se trabajó con hojas de M. indica, molidas y almacenadas en bolsas de nylon a temperatura y humedad ambientes. Se evaluó la influencia de los parámetros de operación (tiempo y relación disolvente material vegetal) en la etapa de desengrase, mediante un diseño factorial de superficie de respuesta, utilizando el ultrasonido. Resultados: el mejor valor experimental (29,03 ± 1,10 mg/g) se alcanza para un tiempo de 90 min y una relación volumen de disolvente/ material vegetal de 47 mL/g, empleando n-hexano como disolvente. Conclusiones: el método de ultrasonido es adecuado para la extracción de la fracción apolar en el proceso de obtención de mangiferina a partir de hojas de M. indica(AU)
Introduction: mangiferin is a natural glucosyl xanthone found in several parts of Mangifera indica L. (mango tree) which has a great variety of pharmacological effects. Its isolation from leaves is of great importance, considering the pharmacological properties attributed to it. A national procedure has been developed in Cuba to obtain mangiferin from M. indica leaves using a traditional stirred tank procedure which includes a degreasing stage. However, studies continue to be conducted about the use of unconventional extraction techniques such as ultrasound, due to the speed and efficacy with which phytoconstituents may be obtained. Objective: evaluate the apolar fraction extraction stage of the process of ultrasound extraction of mangiferin from M. indica leaves. Methods: M. indica leaves were ground and stored in plastic bags at ambient temperature and humidity. Operating parameters (time and solvent / plant material ratio) were evaluated at the degreasing stage with a response surface factorial design, using ultrasound. Results: the best experimental value (29.03 ± 1.10 mg/g) is obtained for a time of 90 min and a solvent volume / plant material ratio of 47 ml/g, using n-hexane as solvent. Conclusions: the ultrasound technique is appropriate for apolar fraction extraction of mangiferin from M. indica leaves(AU)
Assuntos
Humanos , /uso terapêutico , Folhas de Planta/química , CubaRESUMO
Degradation of paracetamol (N-(4-hydroxiphenyl)acetamide) in aqueous solution by gamma radiation, gamma radiation/H2O2 and gamma radiation/Fenton processes was studied. Parameters affecting the radiolysis of paracetamol such as radiation dose, initial concentration of pollutant, pH and initial oxidant concentration were investigated. Gamma radiation was performed using a (60)Co source irradiator. Paracetamol degradation and mineralization increased with increasing absorbed radiation dose, but decreased with increasing initial concentration of the drug in aqueous solution. The addition of H2O2 resulted in an increased effect on irradiation-driven paracetamol degradation in comparison with the performance of the irradiation-driven process alone: paracetamol removal increased from 48.9% in the absence of H2O2 to 95.2% for H2O2 concentration of 41.7 mmol/L. However, the best results were obtained with gamma radiation/Fenton process with 100% of the drug removal at 5 kGy, for optimal H2O2 and Fe(2+) concentrations at 13.9 and 2.3 mmol/L, respectively, with a high mineralization of 63.7%. These results suggest gamma radiation/H2O2 and gamma radiation/Fenton processes as promising methods for paracetamol degradation in polluted wastewaters.
Assuntos
Acetaminofen/química , Recuperação e Remediação Ambiental/métodos , Raios gama , Peróxido de Hidrogênio/química , Águas Residuárias/química , Poluentes Químicos da Água/químicaRESUMO
Introduction. Homocysteine (Hcy) is a nonessential amino acid which links the methionine and the folate cycles. Hcy levels are increased in genetic disorders, such as classic homocystinuria and methylmalonic aciduria combined with homocystinuria. Other monogenic, multifactorial diseases and physiological conditions are also associated with high Hcy levels. The aim of this study is to validate a method to quantify Hcy in plasma. Material and methods. A method to quantify Hcy in plasma by HPLC was validated, by determining the following parameters: specificity, linearity, precision, accuracy, and detection and quantification limits according ICH and EMEA guidelines. Homocysteine was measured in 43 healthy individuals, 2 patients with high levels of methylmalonic acid, and a previously diagnosed patient with classic homocystinuria. Results. The method was able to identify and quantify Hcy without interferences. A linear behavior was observed in a range of 6-100 μM with r2 = 0.9967. The precision and accuracy studies showed variation coefficients under 6%. The limits of detection and quantification were 3.12 μM and 6.25 μM, respectively. The 43 healthy individuals studied had normal Hcy levels. The patient with elevated urinary methylmalonic acid levels and the homocystinuria patient showed high Hcy levels. Conclusion. The method is valid for the quantification of Hcy in plasma as it fulfills the requirements for validation of analytical methods. Its introduction into diagnostic and follow up algorithms is important in genetic diseases where this amino acid is increased (AU)
Introducción. La homocisteína (Hcy) es un aminoácido no esencial que enlaza el ciclo de la metionina con el ciclo del folato. Los niveles de Hcy se incrementan en trastornos genéticos como la homocistinuria clásica y la aciduria metilmalónica combinada con homocistinuria. Otras enfermedades monogénicas, multifactoriales y condiciones fisiológicas han sido asociadas con altos niveles de Hcy. El objetivo de este estudio es validar un método para la cuantificación de Hcy en plasma. Material y métodos. Se validó un método para la cuantificación de Hcy en plasma por HPLC. Se determinaron los parámetros de validación: especificidad, linealidad, precisión, exactitud, límite de detección y cuantificación según las guías ICH y EMEA. El método se aplicó en 43 individuos sanos, 2 con ácido metilmalónico elevado y uno con diagnóstico previo de homocistinuria clásica. Resultados. El método permitió la identificación y la cuantificación de la Hcy sin interferencias. Se observó un comportamiento lineal en un rango de 6-100 μM, con un r2 = 0,9967. En el estudio de precisión y exactitud se obtuvieron coeficientes de variación inferiores al 6%. Los límites de detección y cuantificación fueron de 3,12 y 6,25 μM, respectivamente. Los 43 individuos sanos mostraron niveles normales de Hcy. Uno de los pacientes con ácido metilmalónico elevado presentó niveles aumentados, igual que el paciente con homocistinuria. Conclusión. El método validado para la cuantificación de Hcy en plasma cumple con los criterios para la validación de métodos analíticos. Su introducción en los algoritmos de diagnóstico y seguimiento es importante en las enfermedades genéticas que cursan con incremento de este aminoácido (AU)
Assuntos
Humanos , Masculino , Recém-Nascido , Lactente , Pré-Escolar , Criança , Adulto , Cromatografia Líquida de Alta Pressão/instrumentação , Cromatografia Líquida de Alta Pressão/métodos , Cromatografia Líquida de Alta Pressão , Homocisteína/análise , Homocisteína/sangue , Plasma/metabolismo , Ácido Metilmalônico/análise , Homocistinúria/sangue , Homocistinúria/diagnóstico , Homocistinúria/patologia , Cromatografia/métodos , CromatografiaRESUMO
Las acidurias orgánicas son las enfermedades metabólicas hereditarias más frecuentes en pacientes pediátricos con estado crítico de enfermedad. Este trabajo describe la experiencia cubana en el diagnóstico de estas enfermedades.Desde julio de 2008 hasta diciembre de 2013 se procesaron las orinas de pacientes cubanos con sospecha de aciduria orgánica. El perfil de ácidos orgánicos se obtuvo por cromatografía gaseosa acoplada a espectrometría de masas. Se analizaron muestras de orinas de 488 pacientes cubanos provenientes de todo el país. Del total de muestras procesadas, 29 mostraron niveles elevados de ácido láctico, pero no se realizó el diagnóstico confirmatorio de acidurias lácticas primarias en estos casos. Otras acidurias frecuentes entre los casos analizados fueron: acidurias metilmalónicas (5),deficiencia de acil-CoA deshidrogenasa de cadena media (3), alcaptonuria(3) y aciduria propiónica (3). Los hallazgos clínicos más frecuentes en los pacientes diagnosticados fueron la acidosis metabólica y los signos neurológicos. Los resultados muestran la importancia del análisis del perfil de ácidos orgánicos en niños con estado de gravedad; el diagnóstico acertado de estas enfermedades es decisivo para definir el tratamiento más efectivo y ofrecer a sus familias asesoramiento genético y la posibilidad de diagnóstico prenatal...
Assuntos
Humanos , Cuba , Diagnóstico , Ácidos Orgânicos , Erros Inatos do Metabolismo dos Aminoácidos , Espectrometria de MassasRESUMO
Las acidurias orgánicas son las enfermedades metabólicas hereditarias más frecuentes en pacientes pediátricos con estado crítico de enfermedad. Este trabajo describe la experiencia cubana en el diagnóstico de estas enfermedades. Desde julio de 2008 hasta diciembre de 2013 se procesaron las orinas de pacientes cubanos con sospecha de aciduria orgánica. El perfil de ácidos orgánicos se obtuvo por cromatografía gaseosa acoplada a espectrometría de masas. Se analizaron muestras de orinas de 488 pacientes cubanos provenientes de todo el país. Del total de muestras procesadas, 29 mostraron niveles elevados de ácido láctico, pero no se realizó el diagnóstico confirmatorio de acidurias lácticas primarias en estos casos. Otras acidurias frecuentes entre los casos analizados fueron: acidurias metilmalónicas (5), deficiencia de acil-CoA deshidrogenasa de cadena media (3), alcaptonuria (3) y aciduria propiónica (3). Los hallazgos clínicos más frecuentes en los pacientes diagnosticados fueron la acidosis metabólica y los signos neurológicos. Los resultados muestran la importancia del análisis del perfil de ácidos orgánicos en niños con estado de gravedad; el diagnóstico acertado de estas enfermedades es decisivo para definir el tratamiento más efectivo y ofrecer a sus familias asesoramiento genético y la posibilidad de diagnóstico prenatal.(AU)
Organic acidurias are the most frequent hereditary metabolic disorders in severely ill pediatric patients. In this work, the Cuban experience in the diagnosis of organic acidurias is reported. From July 2008 to December 2013, urine samples were collected from Cuban patients with clinical suspicion of inherited metabolic diseases. The analysis of urinary organic acid profile was performed by gas chromatography coupled to mass spectrometry. Urine samples from 488 Cuban patients from all over the country were processed. Out of the total number, 29 cases showed increased levels of lactic acid; however the confirmatory diagnosis of primary lactic acidurias was not carried out. Other frequent disorders among analyzed cases were methylmalonic acidurias (5), medium chain acyl-CoA deshydrogenase deficiency (3), alkaptonuria (3) and propionic aciduria (2). Metabolic acidosis and neurological symptoms were the most common clinical findings among diagnosed children. The results show the importance of organic acidurias testing in severely ill patients, since the accurate diagnosis of these diseases is crucial to define the most effective treatment for affected patients and it makes it possible to provide patients and their families with the possibility of proper genetic counseling and prenatal testing.(AU)
As acidúrias orgÔnicas sÒo as doenþas metabólicas hereditárias mais frequentes nos pacientes pediátricos severamente doentes. Este trabalho descreve a experiÛncia cubana no diagnóstico dessas doenþas. Entre julho de 2008 e dezembro de 2013 a urina de pacientes cubanos suspeitos de apresentar acidúrias orgÔnicas foi analisada. O perfil de ácidos orgÔnicos foi obtido por cromatografia gasosa acoplada O espectrometria de massas. Foram analisadas amostras de urina de 488 pacientes cubanos provenientes de todo o país. Das amostras processadas, 29 apresentaram níveis elevados de ácido láctico, mas nÒo foi realizado o diagnóstico confirmatório de acidúrias lácticas primárias nesses casos. Outras acidúrias frequentes entre os casos investigados foram: acidúrias metilmal¶nicas (5), deficiÛncia de acil-CoA desidrogenase de cadeia média (3), alcaptonúria (3) e acidúria propi¶nica (3). Os achados clínicos mais frequentes nos pacientes diagnosticados foram a acidose metabólica e as manifestaþ§es neurológicas. Esses resultados mostram a importÔncia da análise do perfil de ácidos orgÔnicos em crianþas em estado grave; o diagnóstico correto destas doenþas é decisivo para definir o tratamento mais efetivo e oferecer aos familiares assessoria genética e a possibilidade de diagnóstico pré-natal.(AU)
RESUMO
Advanced oxidation methods, like ultrasound (US), are a promising technology for the degradation of emerging pollutants in water matrices, such as sulfonamide antibiotics. Nevertheless, few authors report the degradation of sulfonamides by high-frequency US (>100 kHz), and limited information exist concerning the use of ultrasonic-driven processes in the case of sulfadiazine (SDZ). In this study, SDZ degradation was investigated with the aim to evaluate the influence of initial concentration, pH and US frequency, and power. Ultrasonic frequencies of 580, 862, and 1,142 kHz at different power values and SDZ initial concentrations of 25, 50, and 70 mg L(-1) were used. The results show that SDZ degradation followed pseudo first-order reaction kinetics with k values and percent removals decreasing for increasing solute initial concentration. Higher SDZ percent removals and removal rates were observed for the lowest operating frequency (580 kHz), higher dissipated power, and in slightly acidic solution (pH 5.5). Addition of the radical scavenger n-butanol confirmed that hydroxyl radical-mediated reactions at the interface of the cavitation bubbles are the prevailing degradation mechanism, which is directly related to the pKa-dependent speciation of SDZ molecules. Finally, addition of H2O2 had a detrimental effect on SDZ degradation, whereas the addition of the Fenton reagent showed a positive effect, revealing to be a promising alternative for the removal of sulfadiazine.
Assuntos
Sonicação/métodos , Sulfadiazina/química , Poluentes Químicos da Água/química , Purificação da Água/métodos , Oxirredução , Sulfadiazina/análise , Poluentes Químicos da Água/análiseRESUMO
La cuantificación de los ácidos grasos de cadena muy larga es fundamental en el diagnóstico de varias enfermedades peroxisomales, en particular de aquellas donde se afecta la β-oxidación peroxisomal de los ácidos grasos. En este trabajo se describe la implementación de un método analítico para la determinación de estos marcadores en suero por cromatografía gaseosa acoplada a espectrometría de masas. Además, se analizaron muestras de pacientes con impresión diagnostica de adrenoleucodistrofia ligada al cromosoma X. Se obtuvieron las condiciones experimentales adecuadas para la separación y cuantificación de los ácidos grasos C22:0, C24:0 y C26:0 en suero, que son marcadores bioquímicos de varias de enfermedades peroxisomales. La aplicación de este método permitió confirmar el diagnóstico de tres pacientes con impresión diagnóstica de adrenoleucodistrofia ligada al cromosoma X y su aplicación en la práctica permitirá al sistema cubano de salud contar con un nuevo parámetro de laboratorio en el diagnóstico de las enfermedades peroxisomales (AU)
Assuntos
Humanos , Masculino , Feminino , Adrenoleucodistrofia , Diagnóstico , Cromatografia Gasosa , Espectrometria de Massas , Ácidos GraxosRESUMO
Introducción: el extracto acuoso seco que se obtiene a partir de la decocción de la corteza de algunas variedades de Mangifera indica L. es el principio activo de las formulaciones del Vimang®. Este producto de origen natural posee actividad antioxidante, antiinflamatoria, antimicrobiana, espasmolítica, analgésica y antipirética; su componente principal es mangiferina una xantona con varias actividades biológicas reportadas, por lo cual se seleccionó como marcador químico para llevar a cabo los estudios de estabilidad de la corteza y el control de calidad de las formulaciones desarrolladas del extracto de la corteza del árbol del mango, el cual se utiliza en Cuba como suplemento nutricional antioxidante para el tratamiento de diversas enfermedades crónicas. Objetivo: estudiar la influencia sobre las propiedades físico-químicas, microbiológicas y el contenido de mangiferina en la materia prima vegetal, de las condiciones de almacenamiento propuestas para la corteza de Mangifera indica L.Métodos: la corteza se trituró y envasó en bolsas de polietileno y fue almacenada durante 70 d con 2 condiciones de almacenamiento a temperatura 22 ± 1 °C y humedad relativa 55 ± 5por ciento. A la corteza se le determinó la presencia y el conteo total de microorganismos. A los extractos acuosos preparados con la corteza el pH, contenido de sólidos totales y mangiferina; este último por cromatografía líquida de alta resolución. Resultados: en la corteza se observó un rápido crecimiento microbiano y la presencia de microorganismos indeseables desde el inicio mismo del estudio. A los 31 d de almacenamiento en condiciones de temperatura y humedad se observó la aparición de Pseudomonas aeruginosa, un microorganismo patógeno. El contenido de sólidos totales y mangiferina en los extractos no varió significativamente durante el estudio, lo cual indica la ausencia de degradación química de los componentes de la corteza...(AU)
Introduction: the dry aqueous extract from the decoction of the bark of some selected Mangifera indica L. varieties is the active principle of some Vimang® formulations. This natural extract was reported to have antioxidant, anti-inflammatory, antimicrobial, spasmolytic, analgesic and antipyretic properties. The main component is mangiferin, a xanthone c-glycosilated, with several reported biological actions. For this reason, mangiferin was chosen as chemical marker for the study of the chemical stability, and the quality control of the different formulations of mango tree bark, commercially used as antioxidant nutritional supplement to treat several chronic diseases. Objective: to study the influence of the suggested storage conditions for Mangifera indica L. bark on the physical, chemical and microbiological properties and the content of mangiferina in the vegeral raw material. Methods: the fresh bark material of Mangifera indica L was grounded and stored in polyethylene bags during 70 days under two storage conditions at 22 ± 1°C and 55 ± 5 percent relative humidity. Presence and total counting of micro-organisms was determined in the bark, whereas the pH value and the content of total solids and mangiferin were identified in the aqueous extract. The mangiferin was analyzed by high performance liquid chromatography. Results: there were observed rapid microbial growth and presence of unwanted micro-organisms from the beginning of the study. After 31 day-storage under specified temperature and humidity conditions, a pathogenic micro-organism called Pseudomonas aeruginosa emerged. The content of total solids and mangiferin in the aqueous extract did not significantly change during the study, which indicated the lack of chemical degradation in these components. The pH value of the aqueous extract decreased as a result of the emergence of fungi in the bark...(AU)
Assuntos
Mangifera/análise , Casca de Planta , Estabilidade de MedicamentosRESUMO
Introducción: el extracto acuoso seco que se obtiene a partir de la decocción de la corteza de algunas variedades de Mangifera indica L. es el principio activo de las formulaciones del Vimang®. Este producto de origen natural posee actividad antioxidante, antiinflamatoria, antimicrobiana, espasmolítica, analgésica y antipirética; su componente principal es mangiferina una xantona con varias actividades biológicas reportadas, por lo cual se seleccionó como marcador químico para llevar a cabo los estudios de estabilidad de la corteza y el control de calidad de las formulaciones desarrolladas del extracto de la corteza del árbol del mango, el cual se utiliza en Cuba como suplemento nutricional antioxidante para el tratamiento de diversas enfermedades crónicas. Objetivo: estudiar la influencia sobre las propiedades físico-químicas, microbiológicas y el contenido de mangiferina en la materia prima vegetal, de las condiciones de almacenamiento propuestas para la corteza de Mangifera indica L.Métodos: la corteza se trituró y envasó en bolsas de polietileno y fue almacenada durante 70 d con 2 condiciones de almacenamiento a temperatura 22 ± 1 °C y humedad relativa 55 ± 5por ciento. A la corteza se le determinó la presencia y el conteo total de microorganismos. A los extractos acuosos preparados con la corteza el pH, contenido de sólidos totales y mangiferina; este último por cromatografía líquida de alta resolución. Resultados: en la corteza se observó un rápido crecimiento microbiano y la presencia de microorganismos indeseables desde el inicio mismo del estudio. A los 31 d de almacenamiento en condiciones de temperatura y humedad se observó la aparición de Pseudomonas aeruginosa, un microorganismo patógeno. El contenido de sólidos totales y mangiferina en los extractos no varió significativamente durante el estudio, lo cual indica la ausencia de degradación química de los componentes de la corteza...
Introduction: the dry aqueous extract from the decoction of the bark of some selected Mangifera indica L. varieties is the active principle of some Vimang® formulations. This natural extract was reported to have antioxidant, anti-inflammatory, antimicrobial, spasmolytic, analgesic and antipyretic properties. The main component is mangiferin, a xanthone c-glycosilated, with several reported biological actions. For this reason, mangiferin was chosen as chemical marker for the study of the chemical stability, and the quality control of the different formulations of mango tree bark, commercially used as antioxidant nutritional supplement to treat several chronic diseases. Objective: to study the influence of the suggested storage conditions for Mangifera indica L. bark on the physical, chemical and microbiological properties and the content of mangiferina in the vegeral raw material. Methods: the fresh bark material of Mangifera indica L was grounded and stored in polyethylene bags during 70 days under two storage conditions at 22 ± 1°C and 55 ± 5 percent relative humidity. Presence and total counting of micro-organisms was determined in the bark, whereas the pH value and the content of total solids and mangiferin were identified in the aqueous extract. The mangiferin was analyzed by high performance liquid chromatography. Results: there were observed rapid microbial growth and presence of unwanted micro-organisms from the beginning of the study. After 31 day-storage under specified temperature and humidity conditions, a pathogenic micro-organism called Pseudomonas aeruginosa emerged. The content of total solids and mangiferin in the aqueous extract did not significantly change during the study, which indicated the lack of chemical degradation in these components. The pH value of the aqueous extract decreased as a result of the emergence of fungi in the bark...