Acción adyuvante de esporas de Bacillus subtilis por vía mucosa / Activity adjuvant of Bacillus subtilis spores for mucosal route

Las esporas de Bacillus subtilis, generalmente reconocidas como seguras, han recibido una creciente atención en aplicaciones biotecnológicas en formulaciones vacunales, sobre todo como adyuvantes. Este trabajo presenta una revisión actualizada de la acción adyuvante de las esporas de B. subtilis y conjuntamente se expone nuestra experiencia por vía oral (o.r) e intranasal (i.n) como adyuvante frente antígenos modelos ovoalbúmina (Ova) y toxoide tetánico (TT). Se realizó una revisión documental sobre B. subtilis, adyuvante, vacuna y vía mucosal en MEDLINE a través de PubMed; también se revisaron las bases de datos SciELO y LILACS. Para la exploración de la capacidad adyuvante se trabajó con esporas de B. subtilis (cepa RG 4365). Se inmunizaron ratones Balb/c por vía mucosal con esporas coadministradas con los antígenos modelos, y se midió las respuesta de anticuerpos específicos en suero, saliva y heces por método de ELISA. La revisión realizada evidenció la existencia de varios trabajos que utilizan las esporas de B. subtilis por diferentes metodologías y vías de administración como adyuvante, siendo la expresión de antígenos recombinantes la más utilizada, así como la vía o.r entre la aplicación mucosa. En nuestro trabajo se obtuvo un aumento de la respuesta sérica de IgG, subclases IgG1 e IgG2a y de IgA específicos en saliva y heces en los grupos inmunizados con esporas coadministradas con Ova y con TT por ambas vías, significativamente superior a los grupos controles (p<0,05). Estos datos sugieren que las esporas son eficientes adyuvantes pues aumentan la respuesta inmune humoral sistémica y mucosal y resalta su potencial clínico en futuras vacunas mucosales(AU)

Bacillus subtilis spores generally considered safe, have received growing attention due to their potential biotechnological applications including vaccine formulations, particularly as vaccine adjuvants. In the present review we present the status of the adjuvanticity of the spore B. subtilis for mucosal route and our experience regarding its adjuvant activity induced against two model antigens, Tetanus Toxoid (TT) and ovalbumin (Ova) for oral (o.r) and intranasal (i.n) immunization. A document review on B. subtilis, adjuvant, vaccine and mucosal route was carried out in MEDLINE by PubMed, SciELO and LILACS databases. B. subtilis spores (RG 4365) were used for the exploration of the adjuvant activity. Balb/c mice were immunized by i.n and o.r route with TT or Ova combined with B. subtilis spores and specific antibody response in serum, saliva and fecal were measured by ELISA. This review showed the existence of several papers using B. subtilis spores as adjuvant by different methodologies and administration routes, being the expression of recombinant antigens and the the o.r route the most widely used. In our work we found an increase of seric response of IgG, subclass IgG1 and IgG2a and specific IgA in saliva and feces in groups immunized with spores coadministered with Ova and TT by both routes, which was significantly superior to control groups (p<0.05). These data suggest that spores are an efficient mucosal and systemic adjuvant for enhancing humoral immune responses and highlight their clinical potential for future mucosal vaccines(AU)

Obtención de un diagnosticador rápido de cólera, basado en partículas de látex acopladas a un anticuerpo monoclonal contra lipopolisacárido de Vibrio cholerae O1 / Obtaining of a rapid diagnostic test for Cholera, based on latex particles coupled with a monoclonal antibody against Vibrio cholerae O1 lipopolysaccharide

El cólera es una enfermedad infecto-contagiosa intestinal aguda, causada por la ingestión de alimentos o agua contaminada con los serotipos O1 y O139 de la bacteria Vibrio cholerae. Se caracteriza por diarrea secretora abundante que llevan rápidamente a la deshidratación. Sin tratamiento adecuado produce la muerte en horas, por lo que el diagnostico precoz es muy importante sobre todo porque al inicio es difícil diferenciarla de otras enfermedades diarreicas agudas. La prueba diagnóstico de oro es el coprocultivo; sin embargo, no garantiza una detección rápida de la enfermedad. Recientemente se desarrollaron ensayos rápidos, se basan en tiras reactivas y aglutinación con partículas de látex, muy efectivos, pero difíciles de adquirir por sus altos precios. El objetivo de este trabajo fue obtener un diagnosticador rápido basado en partículas de látex acopladas a un anticuerpo monoclonal (AcM) contra el lipopolisacárido de V. cholerae O1, el cual se obtuvo en el Instituto Finlay. Se usaron partículas de látex de 0,8 µm en una suspensión al 10 por ciento a las que se acopló durante 2 h a 37°C el AcM a 0,25 mg/mL. Se evaluó la sensibilidad, especificidad y el desempeño en 84 muestras de heces de pacientes con diagnóstico presuntivo de cólera. El diagnosticador que se obtuvo no evidenció reactividad cruzada frente a cepas no-O1, ni contra otros enteropatógenos. El diagnosticador látex presentó valores de sensibilidad, especificidad y eficacia de 97,87; 97,29 y 97,6 por ciento respectivamente, muy similares al diagnosticador comercial CTK-Biotech. El diagnosticador látex que se obtuvo se puede utilizar en el diagnóstico rápido de la enfermedad(AU)

Cholera is an acute contagious intestinal disease caused by ingestion of food or water contaminated with O1 and O139 serotypes of the bacterium Vibrio cholerae . Cholera is characterized by abundant secretory diarrhea leading to dehydration. Death occurs within hours without treatment, so early diagnosis is very important, especially at the beginning of the disease, because it is difficult to differentiate from other acute diarrheal diseases. The diagnostic golden test is the stool culture; however, it does not guarantee a rapid detection of the disease. Rapid tests have been recently developed; they are based on test strips and agglutination with latex particles, which are very effective, but difficult to acquire for their high prices. The objective of this research was to obtain a quick assay based on latex particles coupled with a monoclonal antibody (mAb) against V. cholerae O1 lipopolysaccharide obtained in Finlay Institute. Latex particles of 0.8 µm were used in a 10 percent suspension, and they were coupled to the mAb (0.25 mg/ml) for 2 hours at 37°C. The sensitivity, specificity and performance were evaluated in 84 stool samples from patients with presumptive diagnosis of cholera. The diagnostic test obtained showed no cross-reactivity against no-O1 strains and other enteropathogens. Latex diagnostic test showed values of sensitivity, specificity and efficacy of 97.87; 97.29 and 97.6 percent respectively, very similar to the commercial diagnostic test CTK-Biotech. The latex reagent obtained can be used in the rapid diagnosis of the disease(AU)

Evaluación de los Anticuerpos Monoclonales anti-polisacárido capsular de Neisseria meningitidis serogrupos A, C, Y, W y X para su uso en los ensayos de identidad / Evaluation of monoclonal antibodies to the capsular polysaccharide of Neisseria meningitidis serogroups A, C, Y, W and X to be used in the identity assays

Los serogrupos A, B, C, W, Y y X de Neisseria meningitidis (Nm) son los principales responsables de la enfermedad meningocóccica y contra ellos va dirigido actualmente el desarrollo de vacunas para la prevención de la enfermedad. El Instituto Finlay se encuentra desarrollando vacunas antimeningocóccicas polisacarídicas contra los serogrupos A, C, W, Y y X. En el desarrollo de estas vacunas, el ensayo de identidad constituye un requisito obligatorio para la liberación final del producto. Este ensayo se realiza mediante la técnica Dot Blot, utilizando anticuerpos policlonales (AcP) comerciales; sin embargo, el Instituto Finlay cuenta en este momento con una plataforma de Anticuerpos Monoclonales (AcM) contra los cinco polisacáridos (PsC) de Nm. El objetivo del trabajo fue evaluar la sensibilidad y especificidad de estos AcM para su uso en los ensayos de identidad de las vacunas antimeningocócicas polisacarídicas, con vista a sustituir los AcP comerciales empleados hasta el momento. La sensibilidad de los AcM se evaluó frente al PsC homólogo y la especificidad frente al resto de los PsC de Nm. Se realizó el ensayo de identidad por Dot Blot a cuatro vacunas polisacarídicas multivalentes, usando los AcM comparativamente con los AcP. Todos los AcM evaluados mostraron una alta sensibilidad y especificidad, no encontrándose reactividad cruzada y siendo capaces de identificar en las formulaciones vacunales multivalentes la presencia del PsC homólogo. Concluimos que los AcM obtenidos en nuestro instituto pueden ser usados para los ensayos de identidad de las vacunas(AU)

Neisseria meningitidis serogroups A, B, C, W, Y and X are the main responsible of meningococcal disease. Vaccines are necessary to prevent this disease. The Finlay Institute is developing polysaccharide vaccines against serogroups A, C, W, Y and X. In the development of vaccines, the identity assay is a mandatory requirement for final product release. This test is performed by Dot Blot technique using commercial polyclonal antibodies (PAb). However, the Finlay Institute has monoclonal antibodies (mAbs) against capsular polysaccharides from N. meningitidis (CPs). The objective of this work was to use these mAbs in identity tests to replace commercial PAb. The specificity of the mAbs, the cross-reactivity with other CPs and the identity of the CPs present in four multivalent polysaccharide vaccines, were evaluated. All tested mAbs showed high specificity, and no cross-reactivity was found. Also all mAbs were able to identify the presence of homologous PsC in multivalent vaccine formulations. We conclude that the mAbs obtained in our institution can be used for identity assays of vaccines(AU)

Obtención de un anticuerpo monoclonal murino que reconoce al polisacárido capsular Vi de Salmonella Typhi / Generation of a murine monoclonal antibody to capsular polysaccharide Vi from Salmonella Typhi

La tecnología clásica del hibridoma permitió el desarrollo de anticuerpos monoclonales (AcM) contra una inmensa variedad de antígenos, los cuales tienen diversas aplicaciones en el campo de la investigación básica, diagnóstico, inmunoterapia y en los procesos industriales de vacunas. En este trabajo se generaron hibridomas productores de AcM específicos contra el polisacárido capsular Vi de Salmonella Typhi, para lo cual se realizó la inmunización intraperitoneal de ratones BALB/c con 10 Ág de polisacárido capsular Vi conjugado a Toxoide Diftérico y la subsiguiente fusión entre los linfocitos aislados del bazo y células de mieloma SP2/O. Se seleccionó y caracterizó un AcM que se denominó 4G3E11. El isotipo del AcM resultó IgG1. Se demostró que AcM 4G3E11 reconoce diferentes valores de concentración del polisacárido en muestras de vacunas vax-TyVi®, mediante un ELISA tipo sándwich. El AcM obtenido como parte de este estudio permitirá la identificación y cuantificación del polisacárido Vi en vacunas anti-tifoídicas(AU)

The conventional hybridoma technology has enabled the development of monoclonal antibodies (Mabs) against many antigens. Mabs have several applications in the field of basic research, diagnosis, immunotherapy and vaccine manufacturing processes. Mabs-producing hybridomas against the capsular polysaccharide from

Utilización del ácido caprílico en la obtención de inmunoglobulina G de caballo antitoxina tetánica / Using the caprylic acid in obtaining the horse immunoglobulin anti tetanus toxin

Las inmunoglobulinas de caballo antitoxina tetánica purificadas, con altas concentración de anticuerpos y actividad biológica, se utilizan como sueros heterólogosy sueros estándar para la producción de la vacuna correspondiente. No obstante, la selección de agentes precipitantes para la purificación de las mismas constituye un problema en términos de pureza, rendimiento y de economía, aún por resolver. En este estudio se describieron las condiciones para el fraccionamiento de plasma antitoxina tetánica de caballo mediante precipitación con ácido caprílico. A las muestras se les añadió solución de ácido acético/acetatode sodio para alcanzar fuerzas iónicas de 0,05 a 0,4 moles/L y ácido caprílico para obtener concentracionesde 1 al 7 por ciento (v/v), con agitación vigorosa. Las proteínas no-inmunoglobulinas precipitaron en estas condiciones, mientras que las inmunoglobulinas permanecieron en el sobrenadante. Se seleccionaron las mejores condiciones de fraccionamiento y se comparó esta metodología con la precipitación con sulfato de amonio. Los mejores resultados se obtuvieron cuando se añadió el ácido caprílico al plasma hasta alcanzar una concentración final de 3 por ciento, a una fuerza iónica de 0,2 moles/L y un pH ajustado a 4,5. La IgG antitoxina fraccionada con ácido caprílico se obtuvo con una media de recuperación de proteína de91-95 por ciento, la concentración de proteínas fue de 27,1-29,3 mg/mL y la relación albúmina/inmunoglobulina de 0,019-0,021. Se alcanzó una pureza entre 91-95 por ciento y la actividad de antitoxina osciló entre el 93-96 por ciento(AU)

Purified horse anti tetanus toxin immunoglobulins with high antibody concentration and biological activity,are used as heterologous sera and standard serum for corresponding vaccine. However, the selection ofprecipitating agents for the purification of them is a problem in terms of purity, yield and economy, which stillremains to be solved. In this study, a procedure to fractionation horse plasma anti tetanus toxin by Caprylicacid precipitation is described. A solution of acetic acid/sodium acetate was added to the samples to achievedifferent ionic strengths, 0.05-0.4 moles/L, and caprylic acid was added to each volume to reach finalconcentrations from 1 to 7 percent (v / v), with vigorous stirring for 60 min. Non-immunoglobulin proteinsprecipitated under these conditions, while immunoglobulins remained in the supernatant, which was thendiafiltered to remove caprylic acid and concentrate inmunoglobulins. This methodology was compared tothat based on ammonium sulfate fractionation. The best results were given when caprylic acid was added toplasma, until a final caprylic acid concentration of 3 percent was reached, at ionic strength 0.2 moles/L and pH adjusted to 4.5. The IgG recovery was 91-95 percent by using the caprylic acid method. It was achieved a protein concentration of 27.1-29.3 mg/mL and an albumin/immunoglobulins ratio of 0.019-0.021. The purity was 91-95 percent and the anti-tetanus toxin activity recovery of 93-96 percent (AU)

Inmunoglobulinas y proteínas de fase aguda en niños atletas de alto rendimiento

En este estudio se cuantificaron las inmunoglobulinas G, A y M, las proteínas de fase aguda: alfa 1 antitripsina, haptoglobina y ceruloplasmina, así como las zonas de la electroforesis de proteínas, en 153 niños atletas de alto rendimiento y en 140 niños supuestamente sanos con actividad física normal para su edad, en busca de variaciones en estos parámetros con carácter permanente por la práctica sistemática de intensos ejercicios físicos. De las inmunoglobulinas dosificadas sólo estuvo marcadamente elevada la IgM y disminuida la zona alfa 2 en los niños atletas; sin embargo, no se obtuvieron diferencias en las proteínas de fase aguda dosificadas para ambos grupos, así como en las proteínas totales cuantificadas.

In this study, G, A and M immunoglobulins, the acute phase proteins: alpha 1-antitrypsin, haptoglobin and ceruloplasmin, as well as the zones of protein electrophoresis were quantified in 153 sportschildren of high performance and in 140 apparently sound children with normal physical activity according to their age, in order to look for variations in these parameters with permanent character due to the systematic practice of intensive physical exercises. Of the dosified immunoglobulins only IgM was significantly elevated, whereas the alpha 2 zone was diminished among sportschildren. Differences were found neither in the actue phase proteins dosified for both groups nor in the quantified total proteins.

Inmunoglobulinas y proteínas de fase aguda en niños atletas de alto rendimiento / Inmunoglobulins and acute phase proteins in athlete children of high performance

En este estudio se cuantificaron las inmunoglobulinas G, A y M, las proteínas de fase aguda: alfa 1 antitripsina, haptoglobina y ceruloplasmina, así como las zonas de la electroforesis de proteínas, en 153 niños atletas de alto rendimiento y en 140 niños supuestamente sanos con actividad física normal para su edad, en busca de variaciones en estos parámetros con carácter permanente por la práctica sistemática de intensos ejercicios físicos. De las inmunoglobulinas dosificadas sólo estuvo marcadamente elevada la IgM y disminuida la zona alfa 2 en los niños atletas; sin embargo, no se obtuvieron diferencias en las proteínas de fase aguda dosificadas para ambos grupos, así como en las proteínas totales cuantificadas(AU)