Mutaciones en JAK2, MPL y CALR en neoplasias mieloproliferativas: análisis de disociación de alta resolución / Mutations in JAK2, MPL and CALR in myeloproliferative neoplasms: High Resolution Melting analysis / Mutações em JAK2, MPL e CALR em neoplasias mieloproliferativas: análise de dissociação em alta resolução

La policitemia vera (PV), la trombocitemia esencial (TE) y la mielofibrosis idiopática (MI) constituyen las Neoplasias Mieloproliferativas cromosoma Filadelfia negativas (NMP Ph-neg). La mutación V617F en el exón 14 del gen JAK2 ha sido descripta en un 90% de los casos de PV y en un 50% de TE y MI. Recientemente, se identificaron mutaciones en el exón 10 del gen MPL y en el exón 9 del gen CALR, presentes en un 5 y 73% de pacientes con TE y MI sin mutaciones en JAK2, respectivamente. En el presente trabajo se estudió la detección de dichas mutaciones en 52 pacientes con NMP, mediante amplificaciones por PCR en Tiempo Real con posterior análisis por High Resolution Melting (HRM) y secuenciación. La mutación V617F en JAK2 fue registrada en un 83,3% de pacientes con PV y 42,8% con TE y MI. Un 6,25% y 56,25% de pacientes con TE y MI JAK2 negativos resultaron positivos para mutaciones en el exón 10 de gen del receptor de la trombopoyetina (MPL) y el exón 9 de gen de la calreticulina (CALR). El análisis por HRM puede ser considerado como herramienta diagnóstica eficaz para las NMP debido a su alta sensibilidad, bajo costo y tiempo de procesado, teniendo en cuenta el impacto clínico que podría tener en los pacientes la detección temprana de dichas mutaciones.

Polycythemia vera (PV), essential thrombocythemia (TE) and idiopathic myelofibrosis (MI) are Philadelphia chromosome-negative myeloproliferative neoplasms (MPN-Ph. Neg). The presence of the V617F mutation in exon 14 of the JAK2 gene has been described in 90% of cases of PV and 50% of MI and TE. Recently, mutations in exon 10 of the MPL gene and exon 9 of CALR gene have been identified, which are present in 5 to 73% of patients with TE and MI without mutations in JAK2, respectively. In this work, the detection of these mutations was studied in 52 patients with NMP, using real time PCR amplifications with subsequent High Resolution Melting (HRM) analysis and sequencing. A total of 83.3% of patients with PV and 42.8% with MI and TE were recorded as positive for the V617F mutation in JAK2. A total of 6.25% and 56.25% of the patients with MI and TE with non-mutated JAK2 were positive for mutations in MPL exon 10 and CALR exon 9. HRM analysis could be considered an effective diagnostic tool for NMP due to its high sensitivity, low cost and processing time, taking into account the clinical impact that early detection of such mutations could have on patients.

Policitemia vera (PV), trombocitemia essencial (TE) e mielofibrose idiopática (MI) constituem as Neoplasias Mieloproliferativas cromossomo Filadélfia negativas (NMP Ph-neg). A mutação V617F no exon 14 do gene JAK2 foi descrita em 90% dos casos de PV e em 50% de TE e MI. Recentemente, foram identificadas mutações no exon 10 do gene MPL e no exon 9 do gene CALR, presentes em 5 a 73% de pacientes com TE e MI sem mutações em JAK2, respectivamente. Neste trabalho foi estudada a detecção de tais mutações em 52 pacientes com NMP, usando amplificações por PCR em Tempo Real, com posterior análise por High Resolution Melting (HRM) e sequenciamento. 83,3% dos pacientes com PV e 42,8% com TE e MI foram positivos para a mutação V617F em JAK2. 6,25% e 56,25% de pacientes com TE e MI JAK2 negativo foram positivos para mutações no exon 10 de gene do receptor da trombopoietina (MPL) e o exon 9 de gene da calreticulina (CALR). A análise por HRM pode ser considerada como ferramenta de diagnóstico eficaz para as NMP, devido à sua alta sensibilidade, baixo custo e tempo de processamento, tendo em conta o impacto clínico que poderia ter a detecção precoce de tais mutações nos pacientes.

Detección de la mutación V617F del genJAK2 mediante análisis de disociación de alta resolución / Detection of V617F mutation of JAK2 gene by high resolution melting / Detecção da mutação V617F do gene JAK2 através da análise de dissociação em alta resolução

La Policitemia Vera (PV), la Trombocitemia Esencial (TE) y la Mielofibrosis Primaria (MP) son neoplasias mieloproliferativas caracterizadas por una proliferación excesiva de una o más líneas mieloides. En el año 2005 se identificó una mutación somática en el gen Janus kinase 2 (JAK2), que resulta en el reemplazo en la proteína de una fenilalanina por una valina en la posición 617 (JAK2 V617F). Esta mutación se encuentra en el 95% de pacientes con PV, y en la mitad de los casos de TE o MP. Se han descripto metodologías que permiten identificar esta mutación: dentro de las más utilizadas se encuentran la ARMS PCR (del inglés Amplification Refractory Mutation System PCR), la secuenciación y recientemente la HRM (High Resolution Melting). En este trabajo se estudió la detección de JAK2 V617F en muestras de pacientes con desórdenes mieloproliferativos mediante HRM, determinando especificidad y sensibilidad de la misma, comparándola con la ARMS PCR y la secuenciación. Los resultados demostraron que la técnica de HRM es superior a la secuenciación y equivalente a la ARMS PCR. Las metodologías sensibles y específicas para la detección de JAK2 V617F, en pacientes con neoplasias mieloproliferativas, son de gran importancia a nivel diagnóstico ya que permiten diferenciar entre desórdenes neoplásicos y condiciones reactivas.

Polycythemia Vera (PV), Essential Thrombocythemia (TE) and Primary Myelofibrosis (MP) are myeloproliferative neoplasias characterized by excessive proliferation of one or more myeloid lines. In 2005, a somatic mutation was identified in the Janus kinase 2 gene (JAK2), resulting in the replacement of a phenylalanine in the protein for a valine at position 617 (JAK2 V617F). This mutation was found in 95% of patients with PV, and in half of the cases of TE or MP. Different methodologies have been described to identify this mutation: the most used are ARMS PCR (Amplification Refractory Mutation System PCR), sequencing and recently HRM (High Resolution Melting). In this work, detection of JAK2 V617F was studied in samples from patients with myeloproliferative disorders using HRM, determining its specificity and sensitivity in comparison with ARMS PCR and sequencing. The results showed that the technique is superior to sequencing and equivalent to ARMS PCR. Sensitive and specific methodologies for the detection of JAK2 V617F in patients with myeloproliferative neoplasias are of great importance at diagnostic level since they can differentiate between neoplastic disorders and reactive conditions.

Policitemia Vera (PV), Trombocitemia Essencial (TE) e Mielofibrose Primária (MP) são neoplasias mieloproliferativas caracterizadas por uma proliferação excessiva de uma ou mais linhas mieloides. Em 2005, uma mutação somática foi identificada no gene Janus quinase 2 (JAK2), resultando na substituição na proteína de uma fenilalanina para uma valina na posição 617 (JAK2 V617F). Esta mutação é encontrada em 95% dos pacientes com policitemia vera, e na metade dos casos de TE ou MP. Foram descritas metodologias para identificar esta mutação: dentre as mais utilizadas estão ARMS PCR (Amplification Refractory Mutation System PCR), sequenciamento e, recentemente, HRM (High Resolution Melting). Neste trabalho a detecção de JAK2 V617F foi estudada em amostras de pacientes com neoplasias mieloproliferativas usando HRM, determinando a sensibilidade e especificidade da mesma, comparando-a com a ARMS PCR e o sequenciamento. Os resultados mostraram que a técnica de HRM é superior ao sequenciamento e equivalente à ARMS PCR. Sensíveis e específicas para a detecção de JAK2 V617F em pacientes com neoplasias mieloproliferativas, as metodologias são de grande importância em nível de diagnóstico, uma vez que permitem diferenciar entre doenças neoplásicas e condições reativas.

Detección de la mutación V617F del gen JAK2 mediante análisis de disociación de alta resolución / Detection of V617F mutation of JAK2 gene by high resolution melting / DetecþÒo da mutaþÒo V617F do gene JAK2 através da análise de dissociaþÒo em alta resoluþÒo

La Policitemia Vera (PV), la Trombocitemia Esencial (TE) y la Mielofibrosis Primaria (MP) son neoplasias mieloproliferativas caracterizadas por una proliferación excesiva de una o más líneas mieloides. En el año 2005 se identificó una mutación somática en el gen Janus kinase 2 (JAK2), que resulta en el reemplazo en la proteína de una fenilalanina por una valina en la posición 617 (JAK2 V617F). Esta mutación se encuentra en el 95% de pacientes con PV, y en la mitad de los casos de TE o MP. Se han descripto metodologías que permiten identificar esta mutación: dentro de las más utilizadas se encuentran la ARMS PCR (del inglés Amplification Refractory Mutation System PCR), la secuenciación y recientemente la HRM (High Resolution Melting). En este trabajo se estudió la detección de JAK2 V617F en muestras de pacientes con desórdenes mieloproliferativos mediante HRM, determinando especificidad y sensibilidad de la misma, comparándola con la ARMS PCR y la secuenciación. Los resultados demostraron que la técnica de HRM es superior a la secuenciación y equivalente a la ARMS PCR. Las metodologías sensibles y específicas para la detección de JAK2 V617F, en pacientes con neoplasias mieloproliferativas, son de gran importancia a nivel diagnóstico ya que permiten diferenciar entre desórdenes neoplásicos y condiciones reactivas.(AU)

Polycythemia Vera (PV), Essential Thrombocythemia (TE) and Primary Myelofibrosis (MP) are myeloproliferative neoplasias characterized by excessive proliferation of one or more myeloid lines. In 2005, a somatic mutation was identified in the Janus kinase 2 gene (JAK2), resulting in the replacement of a phenylalanine in the protein for a valine at position 617 (JAK2 V617F). This mutation was found in 95% of patients with PV, and in half of the cases of TE or MP. Different methodologies have been described to identify this mutation: the most used are ARMS PCR (Amplification Refractory Mutation System PCR), sequencing and recently HRM (High Resolution Melting). In this work, detection of JAK2 V617F was studied in samples from patients with myeloproliferative disorders using HRM, determining its specificity and sensitivity in comparison with ARMS PCR and sequencing. The results showed that the technique is superior to sequencing and equivalent to ARMS PCR. Sensitive and specific methodologies for the detection of JAK2 V617F in patients with myeloproliferative neoplasias are of great importance at diagnostic level since they can differentiate between neoplastic disorders and reactive conditions.(AU)

Policitemia Vera (PV), Trombocitemia Essencial (TE) e Mielofibrose Primária (MP) sÒo neoplasias mieloproliferativas caracterizadas por uma proliferaþÒo excessiva de uma ou mais linhas mieloides. Em 2005, uma mutaþÒo somática foi identificada no gene Janus quinase 2 (JAK2), resultando na substituiþÒo na proteína de uma fenilalanina para uma valina na posiþÒo 617 (JAK2 V617F). Esta mutaþÒo é encontrada em 95% dos pacientes com policitemia vera, e na metade dos casos de TE ou MP. Foram descritas metodologias para identificar esta mutaþÒo: dentre as mais utilizadas estÒo ARMS PCR (Amplification Refractory Mutation System PCR), sequenciamento e, recentemente, HRM (High Resolution Melting). Neste trabalho a detecþÒo de JAK2 V617F foi estudada em amostras de pacientes com neoplasias mieloproliferativas usando HRM, determinando a sensibilidade e especificidade da mesma, comparando-a com a ARMS PCR e o sequenciamento. Os resultados mostraram que a técnica de HRM é superior ao sequenciamento e equivalente O ARMS PCR. Sensíveis e específicas para a detecþÒo de JAK2 V617F em pacientes com neoplasias mieloproliferativas, as metodologias sÒo de grande importÔncia em nível de diagnóstico, uma vez que permitem diferenciar entre doenþas neoplásicas e condiþ§es reativas.(AU)

Risk-adapted therapy with three or six cycles of doxorubicin/bleomycin/vinblastine/dacarbazine plus involved-field radiation therapy in Hodgkin lymphoma, based on prognosis at diagnosis and early response: results from the GATLA study.

BACKGROUND: Doxorubicin/bleomycin/vinblastine/dacarbazine (ABVD) plus involved-field radiation therapy (IFRT) is the gold-standard treatment for early and advanced stages of Hodgkin lymphoma (HL). We evaluated the outcomes of patients according to prognosis at diagnosis and over time to determine who achieved complete remission (CR). PATIENTS AND METHODS: Treatment-naive patients under the age of 75 years at all stages of HL were eligible. The favorable group (FG) contained patients with stage IA-IIIA disease without bulky areas who achieved CR after the third cycle of ABVD. They received only IFRT at 25 Gy. Patients in the unfavorable group (UG) exhibited stages IIIB and IV HL. The UG also included all patients with bulky disease and the subset of the FG without CR after 3 cycles of ABVD, ie, slow responders (FGSR). The UG received 6 cycles of ABVD plus IFRT at 30 Gy to bulky areas at diagnosis or to those areas remaining positive after the third cycle of ABVD. RESULTS: In total, 584 patients were evaluable: 285 of them belonged to the FG, and 299 to the UG. Rates of CR were 98% and 85% for the FG and the UG, respectively (P < .001). Sixty patients in the FG received 6 cycles of ABVD because they had not achieved CR after 3 cycles (ie, the FGSR subgroup). The 5-year event-free survival rate was 89% for the FG, 66% for the FGSR, and 72% for the UG (P < .001). The overall survival at 5 years was significantly better for the FG (98%) than for the FGSR (87%) and the UG (88%; P < .001). CONCLUSION: Patients from the FG demonstrated excellent outcomes compared with those from the FGSR and UG, despite receiving less chemotherapy and fewer doses of IFRT.

Presentación de 6 casos de osteonecrosis asociados a trombofilia / Six patients with osteonecrosis associated with trombophilia

Introducción: La osteonecrosis es una entidad frecuente, localizada principalmente en la cabeza femoral; puede estar asociada a diferentes trastornos (osteonecrosis secundarias): traumáticas, por uso de corticoides, anemia falciforme, tumores, enfermedades del tejido conectivo, alcoholismo, enfermedad de Gaucher, etc. Cuando no presentan causa aparente se las denomina osteonecrosis idiopáticas. Estas presentan hipertensión venosa debido a oclusión trombótica, lo cual altera el drenaje venoso, resultando en una isquemia progresiva hasta la necrosis. Material y Métodos: se presentan seis casos de osteonecrosis idiopática donde se detalla la forma de presentación, diagnóstico, perfil trombofílico y tratamiento. Discusión: con la presentación de estos casos de osteonecrosis asociada a trombofilia queremos resaltar: 1) el conocimiento fisiopatogénico de la osteonecrosis idiopática por oclusión venosa trombótica. 2) el diagnóstico diferencial entre osteonecrosis idiopática y secundaria. 3) la utilidad de la realización de estudios de trombofilia, principalmente en cuadros a repetición. 4) evaluar la posibilidad de tratamiento con anticoagulantes orales

Aplasia blanca pura con infiltrado linfoide T asociado a clomipramina. Presentación de un caso y revisión de la literatura / Pure white cell aplasia with marrow T cell infiltrate related to clomipramino case report and review of literature

Se presenta una paciente con aplasia blanca pura (abp) inducida por la droga antidepresiva clomipramina que cursa con agranulocitosis, fiebre y estomatitis candidiásica. La médula ósea mostraba ausencia de la serie granulocítica, eritropoyesis y trombopoyesis conservadas, e infiltración linfocitaria nodular T. La paciente evoluciona favorablemente con antibióticosantifúngicos y G-CSE. Siete años después la paciente está asintomática con leve neutropenia. Durante ese lapso varias biopsias de médula ósea mostraron persistencia de nódulos linfoideos pequeños con patrón de hiperplasia benigna. Se revisan los mecanismos patogénicos de la abp y su diagnóstico diferencial

Presentación de 6 casos de osteonecrosis asociados a trombofilia / Six patients with osteonecrosis associated with trombophilia

Introducción: La osteonecrosis es una entidad frecuente, localizada principalmente en la cabeza femoral; puede estar asociada a diferentes trastornos (osteonecrosis secundarias): traumáticas, por uso de corticoides, anemia falciforme, tumores, enfermedades del tejido conectivo, alcoholismo, enfermedad de Gaucher, etc. Cuando no presentan causa aparente se las denomina osteonecrosis idiopáticas. Estas presentan hipertensión venosa debido a oclusión trombótica, lo cual altera el drenaje venoso, resultando en una isquemia progresiva hasta la necrosis. Material y Métodos: se presentan seis casos de osteonecrosis idiopática donde se detalla la forma de presentación, diagnóstico, perfil trombofílico y tratamiento. Discusión: con la presentación de estos casos de osteonecrosis asociada a trombofilia queremos resaltar: 1) el conocimiento fisiopatogénico de la osteonecrosis idiopática por oclusión venosa trombótica. 2) el diagnóstico diferencial entre osteonecrosis idiopática y secundaria. 3) la utilidad de la realización de estudios de trombofilia, principalmente en cuadros a repetición. 4) evaluar la posibilidad de tratamiento con anticoagulantes orales (AU)

Aplasia blanca pura con infiltrado linfoide T asociado a clomipramina. Presentación de un caso y revisión de la literatura / Pure white cell aplasia with marrow T cell infiltrate related to clomipramino case report and review of literature

Se presenta una paciente con aplasia blanca pura (abp) inducida por la droga antidepresiva clomipramina que cursa con agranulocitosis, fiebre y estomatitis candidiásica. La médula ósea mostraba ausencia de la serie granulocítica, eritropoyesis y trombopoyesis conservadas, e infiltración linfocitaria nodular T. La paciente evoluciona favorablemente con antibióticosantifúngicos y G-CSE. Siete años después la paciente está asintomática con leve neutropenia. Durante ese lapso varias biopsias de médula ósea mostraron persistencia de nódulos linfoideos pequeños con patrón de hiperplasia benigna. Se revisan los mecanismos patogénicos de la abp y su diagnóstico diferencial (AU)

Presentación de 3 casos de microangiopatía trombótica asociada a embarazo / 3 cases presentation thrombotic microangiopathy associated to pregnancy

Introducción: La microangiopatía trombótica es una entidad infrecuente debida a la agregación plaquetaria intravascular (trombocitopenia); al producirse oclusiones parciales de capilares y arteriolas se produce anemia hemolítica mecánica (anemia, reticulocitosis, LDH aumentado) con signología neurológica, renal, fiebre, púrpura, habiendo causas primarias y secundarias, entre las cuales se incluyen las asociadas al embarazo. Material y Métodos: se presentan 3 casos de microangiopatía trombótica asociada al embarazo,donde se detallan las formas de presentación, diagnóstico inicial, evaluación y tratamiento. Discusión: con estos casos de microangiopatía trombótica asociada a embarazo queremos resaltar la gran importancia del diagnóstico precoz para una rápida elección de la terapéutica. Remarcamos: 1) los beneficios de la plasmaféresis versus la infusión de plasma; 2) la necesidad de estar alerta por la recaída microangiopática (sobre todo en HELLP); 3) la importancia del seguimiento diario y del recuento de plaquetas y LDH como factores evolutivos; 4) el diagnóstico deferencial entre las diferentes microangiopatías trombóticas asociadas al embarazo para instaurar la terapéutica apropiada (HELLP: parto/cesárea, y FTT: plasmaféresis); 5) la importancia del valor de la normalización y persistencia del recuento plaquetario y LDH

Presentación de 3 casos de microangiopatía trombótica asociada a embarazo / 3 cases presentation thrombotic microangiopathy associated to pregnancy

Introducción: La microangiopatía trombótica es una entidad infrecuente debida a la agregación plaquetaria intravascular (trombocitopenia); al producirse oclusiones parciales de capilares y arteriolas se produce anemia hemolítica mecánica (anemia, reticulocitosis, LDH aumentado) con signología neurológica, renal, fiebre, púrpura, habiendo causas primarias y secundarias, entre las cuales se incluyen las asociadas al embarazo. Material y Métodos: se presentan 3 casos de microangiopatía trombótica asociada al embarazo,donde se detallan las formas de presentación, diagnóstico inicial, evaluación y tratamiento. Discusión: con estos casos de microangiopatía trombótica asociada a embarazo queremos resaltar la gran importancia del diagnóstico precoz para una rápida elección de la terapéutica. Remarcamos: 1) los beneficios de la plasmaféresis versus la infusión de plasma; 2) la necesidad de estar alerta por la recaída microangiopática (sobre todo en HELLP); 3) la importancia del seguimiento diario y del recuento de plaquetas y LDH como factores evolutivos; 4) el diagnóstico deferencial entre las diferentes microangiopatías trombóticas asociadas al embarazo para instaurar la terapéutica apropiada (HELLP: parto/cesárea, y FTT: plasmaféresis); 5) la importancia del valor de la normalización y persistencia del recuento plaquetario y LDH (AU)

Presentación de cinco casos de linfocitopenia CD4+ idiopática / Report of five cases of idiopathic CD4+ lymphocytopenia

Introducción: el objetivo de este trabajo es llamar la atención sobre una inmunodeficiencia recientemente descripta y ofrecer una propuesta de estudio y tratamiento. Material y métodos: período de estudio: enero de 1998 a agosto de 2000. Presentamos 5 pacientes de entre 23 y 86 años de edad (media 51,2 años), todos de sexo femenino, que fueron estudiadas por presentar infecciones a repetición (micóticas, virales y bacterianas). Se les realizó determinación de VIH por ELISA, pruebas cutáneas para antígenos habitualmente reconocidos por el organismo, medición de linfocitos CD4+ y CD8+ por partículas magnéticas. Proteinograma electroforético, dosaje de inmunoglobulinas plasmáticas por inmunodifusión radial. Se efectuó tratamiento con timomodulina 60 mg por día. Conclusiones: al momento del diagnóstico se observó: pruebas cutáneas hipoérgicas, VIH negativo y disminución de linfocitos CD4+. Posterior al tratamiento con timomodulina, se observó buena respuesta clínica, mejoría de las pruebas cutáneas y elevación de los linfocitos CD4+ en todas las pacientes

Presentación de cinco casos de linfocitopenia CD4+ idiopática / Report of five cases of idiopathic CD4+ lymphocytopenia

Introducción: el objetivo de este trabajo es llamar la atención sobre una inmunodeficiencia recientemente descripta y ofrecer una propuesta de estudio y tratamiento. Material y métodos: período de estudio: enero de 1998 a agosto de 2000. Presentamos 5 pacientes de entre 23 y 86 años de edad (media 51,2 años), todos de sexo femenino, que fueron estudiadas por presentar infecciones a repetición (micóticas, virales y bacterianas). Se les realizó determinación de VIH por ELISA, pruebas cutáneas para antígenos habitualmente reconocidos por el organismo, medición de linfocitos CD4+ y CD8+ por partículas magnéticas. Proteinograma electroforético, dosaje de inmunoglobulinas plasmáticas por inmunodifusión radial. Se efectuó tratamiento con timomodulina 60 mg por día. Conclusiones: al momento del diagnóstico se observó: pruebas cutáneas hipoérgicas, VIH negativo y disminución de linfocitos CD4+. Posterior al tratamiento con timomodulina, se observó buena respuesta clínica, mejoría de las pruebas cutáneas y elevación de los linfocitos CD4+ en todas las pacientes (AU)

Anemias hemolíticas autoinmunes: análisis de 20 casos / Autoimmune hemolytic anemias: analysis of 20 cases

Se estudiaron 20 pacientes con AHAI, desde 1982 a 1996, siendo el criterio principal la prueba de Coombs (directa), analizando la sintomatología, datos de laboratorio para diagnóstico y clasificación del tipo de AHAI (AHAI por AC fríos o AC calientes; o AHAI idiopática o secundaria), y se evaluaron tratamiento y evolución. Las AHAI secundarias tienen mejor pronóstico que las idiopáticas, por lo cual se debe priorizar la causa etiológica

Anemias hemolíticas autoinmunes: análisis de 20 casos / Autoimmune hemolytic anemias: analysis of 20 cases

Se estudiaron 20 pacientes con AHAI, desde 1982 a 1996, siendo el criterio principal la prueba de Coombs (directa), analizando la sintomatología, datos de laboratorio para diagnóstico y clasificación del tipo de AHAI (AHAI por AC fríos o AC calientes; o AHAI idiopática o secundaria), y se evaluaron tratamiento y evolución. Las AHAI secundarias tienen mejor pronóstico que las idiopáticas, por lo cual se debe priorizar la causa etiológica (AU)