Activación química de ovocitos de alpaca vitrificados después de la maduración in vitro / Chemical activation of alpaca oocytes vitrified after in vitro maturation

Se evaluó la viabilidad posdescongelamiento de ovocitos de alpaca vitrificados luego de la maduración in vitro. Los ovocitos fueron recuperados de ovarios obtenidos en el camal Municipal de Huancavelica, Perú, madurados in vitro por 24-25 h en una cámara modular con 5% de O2, 5% de CO2 y 90% de N2 en medio TCM-199 suplementado con Piruvato de Na, HEPES, sulfato de gentamicina, FSH, estradiol 17-beta y suero fetal bovino. Los ovocitos fueron separados de las células de la granulosa con hialuronidasa al 0.1% y distribuidos en tres tratamientos: T1 (n=107), ovocitos expuestos a las soluciones crioprotectoras y vitrificados; T2 (n=121), ovocitos expuestos a las soluciones crioprotectoras no vitrificados (control de toxicidad de los crioprotectantes); T3 (n=232), grupo control de ovocitos no expuestos a las soluciones vitrificantes. Los ovocitos fueron vitrificados en microgotas sobre un papel de aluminio flotando en nitrógeno líquido, utilizando una solución de equilibrio con 4% de etilenglicol y una solución de vitrificación con 35% de etilenglicol, 5% de polivinilpirrolidona y 0.4 M de trehalosa. Las microgotas vitrificadas se almacenaron en nitrógeno líquido y fueron descongeladas 1-4 después. Todos los ovocitos fueron cultivados en SOF-HEPES con 5 uM de ionomicina de Ca por 4 min a temperatura ambiente y luego cultivados por 3 h en 6-DMAP a 38.5 °C en una atmósfera húmeda con 5% de O2, 5% de CO2 y 90% de N2. Luego se cultivaron por 8 d en medio SOF-IVC. Se encontró 58.4, 68.7 y 97.3% de ovocitos morfológicamente normales para T1, T2 y T3, respectivamente. Las tasas de segmentación fueron de 39.9, 49.5 y 62.3%, y las tasas de blastocistos fueron de 0, 0 y 9.2% para T1, T2 y T3, respectivamente. Los resultados demuestran que los ovocitos de alpaca pueden ser vitrificados con el método de superficie sólida y que son viables morfológicamente y fisiológicamente posdescongelamiento.

The aim of this study was to evaluate the viability of vitrified/thawed alpaca oocytes after in vitro maturation. Alpaca oocytes were retrieved from ovaries obtained in theslaughterhouse of Huancavelica, Peru and matured in vitro for 24-25 h in a modular chamber with 5% O2, 5% CO2 and 90% N2 in TCM-199 medium supplemented with sodium pyruvate, HEPES, gentamycin sulphate, FSH, estradiol 17-beta and fetal calf serum. Then, oocytes were fully denuded of cumulus cells with 0.1% hyaluronidase and assigned to three treatments: T1 (n=107), oocytes exposed to cryoprotectans and vitrified; T2 (n=121), oocytes exposed to cryoprotectans without vitrification; and T3 (n=232), control group of oocytes not exposed to vitrification solutions. Alpaca oocytes were vitrified in microdrops on a precooled aluminum foil floating in liquid nitrogen, using an equilibrium solution with 4% ethylene glycol and a vitrification solution with 35% ethylene glycol, 5% polyvinyl-pyrrolidone and 0.4 M trehalose. The vitrified microdrops were stored in liquid nitrogen and were thawed 1-4 d later. All oocytes were cultured on SOF-HEPES with 5 umM Ca ionomycin by 4 min at room temperature followed by 3 h incubation in 6-DMAP at 38.5 ºC in a 5% O2, 5% CO2 and 90% N2 in humidified atmosphere. Subsequently, were cultivated on mSOF medium during 8 days. The rates of oocytes survival were 58.4, 68.7 and 97.3% in T1, T2 and T2 respectively. The rates of cleavage were 39.9, 49.5 and 62.3% and rates of development to blastocysts were 0, 0 and 9.2% in T1, T2 and T3 respectively. The results showed that alpaca oocytes were morphologically and physiologically viable after vitrification by solid surface method.

Efecto del sitio de deposición del plasma seminal sobre la tasa de ovulación y formación del cuerpo lúteo en alpacas / Effect of the deposition site of seminal plasma on the ovulation and corpus luteum development in alpacas

El estudio tuvo por objetivo evaluar el sitio de deposición del plasma seminal sobre la tasa de ovulación y formación del cuerpo lúteo en alpacas. Se seleccionaron 91 hembras no lactantes con folículos .7 mm detectados por ecografía transrectal. Se sincronizola onda folicular con la aplicación de 5 mg de LH, y 12 días después, se determinó la presencia de un folículo dominante (.7 mm). Las hembras se distribuyeron al azar en seis tratamientos: G1 =16 (Plasma seminal vía intramuscular), G2=15 (PBS vía intramuscular), G3=16 (Plasma seminal vía intrauterina), G4=15 (PBS vía intrauterina), G5 =15 (Plasma seminal vía intrauterina con curetaje), G6 =14 (PBS vía intrauterina con curetaje). La tasa de ovulación y presencia de cuerpo lúteo se determinó mediante ecografía el día D2 y D8 (D0 = inicio del tratamiento). Se tomó muestras de sangre los días D0, D3 y D9 para determinar perfiles séricos de progesterona mediante RIA. La tasa de ovulación fue de 93.8, 37.5 y 66.5% para G1, G3 y G5, respectivamente, y no se registraron ovulaciones en los otros grupos. Se encontró que las alpacas G1 producirían 25 veces más ovulaciones con respecto al G3. Los resultados sugieren que la absorción del factor inductor de ovulación (FIO) del plasma seminal es vía sistemica y que el curetaje facilitaría la absorción del FIO incrementando el efecto ovulatorio del plasma seminal.

The present study was carried out to evaluate the effect of deposition site of seminal plasma on the ovulation rate and size of corpus luteum in alpacas. Non-lactating females bearing a .7 mm follicle detected by ultrasound were selected (n = 91). Follicular wave was synchronized by injecting 5 mg of LH and then, the presence of a dominant follicle .7 mm was determined 12 days later through ultrasound evaluation. Alpacas were assigned to one of six experimental groups: G1 (n=16) seminal plasma (SP) by intramuscular injection . i.m.; G2 (n=15) phosphate-buffered saline (PBS) i.m.; G3 (n=16) SP by intrauterine administration . i.u.; G4 (n=15) PBS i.u.; G5 (n=15) SP i.u. with curettage; G6 (14) PBS by i.u. with curettage. Ovulation rate and corpus luteum were determined by ultrasound evaluation on D2 and D8 (D0 = day of treatment). Serum samples were taken from the jugular vein on D0, D3 and D9 to determine progesterone profiles by radioimmunoassay. Ovulation rate was 93.7, 37.5, and 66.5% for G1, G3 and G5 respectively, while none ovulations were observed in the other three groups. Alpacas in G1 would produce 25 more ovulations than G3. Results of the present study suggested that the ovulation-inducing factor (OIF) present in seminal plasma is absorbed systemically and that the mechanical action of curettage would contribute to the absorption of the OIF present in seminal plasma.

Efecto de fracciones del plasma seminal, según su peso molecular, sobre la inducción de la ovulación en llamas (Lama glama) / Effect of plasma seminal fractions, based on molecular weight, on the induction of ovulation in llamas (Lama glama)

El presente estudio fue realizado con el propósito de evaluar el efecto de varias fracciones de plasma seminal de llamas, según su peso molecular (PM), sobre la inducción de la ovulación. Se utilizó 54 llamas hembras sin cría y en óptimo estado reproductivo, con folículo dominante ≥7 mm de diámetro determinado por ecografía transrectal por tres días consecutivos. Los animales se distribuyeron al azar a uno de los seis tratamientos: A) fracción de plasma seminal con PM ≥30 kDa, B) fracción de plasma seminal con PM entre 10 y 30 kDa, C) fracción de plasma seminal con PM entre 5 y 10 kDa, D) fracción de plasma seminal con PM <5 kDa, E) plasma seminal completo, y F) PBS. Los animales fueron tratados con una solución de 1.5 ml de la fracción de plasma seminal o placebo correspondiente por vía intramuscular. Las llamas fueron evaluadas por ecografía en el día 2 y 9 post-tratamiento para determinar la tasa de ovulación y el tamaño del cuerpo lúteo. Los resultados indicaron una tasa de ovulación del 100 por ciento en los grupos A y E, 11.1 por ciento en B y 0 por ciento en los demás tratamientos. No se encontró diferencias estadísticas entre grupos respecto al diámetro luteal. Los resultados obtenidos permiten señalar que la fracción de plasma seminal con peso molecular mayor a 30 kDa induce la ovulación en llamas.

The present study was conducted to evaluate the effect of different fractions of llama seminal plasma, based on the molecular weight (MW), on the ovulation. Fifty four female adult llamas without calf at foot and in good reproductive conditions were used. The animals were bearing a ≥7 mm dominant follicle determined by ultrasound diagnosis during a three consecutive days. Females were randomly distributed in six groups: A, fraction of seminal plasma with MW ≥30 kDa; B, fraction of seminal plasma with MW ≥10 and <30 kDa; C, fraction of seminal plasma with MW ≥5 and <10 kDa ; D, fraction of seminal plasma with MW <5 kDa; E, complete plasma seminal; and F, PBS. Animals were treated with a 1.5 ml solution of the corresponding fraction or placebo via i.m. Ovarian ultrasound was performed at day 2 and 9 post-treatment to determine the ovulation rate and the size of the corpora lutea. Ovulation rate was 100 por ciento in groups A and E, 11.1 por ciento in group B and 0 por ciento in the other groups. No statistical differences were observed between groups on the size of the corpus luteum. The results indicated that the plasma seminal fraction with molecular weight ≥30 kDa induce ovulation in llamas.