Ausencia del receptor CD16b en neutrófilos / Neutrophils without CD16b receptors

Se presentan dos pacientes (mujeres de 41 y 15 años de edad) con ausencia del receptor para el fragmento Fc de IgG, CD16b en neutrófilos (fenotipo "null"). El caso 1 fue referida al laboratorio con diagnóstico de hemoglobinuria nocturna paroxística y el caso 2) con diagnóstico presuntivo de neutropenia inmune. En ambos casos se comprobó por citometría de flujo la ausencia de expresión de CD16b, sin deficiencias en la expresión de otras moléculas del sistema de alloantígenos propios de neutrófilos ni defectos en el anclaje a membrana por glicosil fosfatidil inositol (GPI). Las manifestaciones clínicas en ambas pacientes: anemia en el caso 1 y leucopenia en el caso 2 no pueden ser atribuidas exclusivamente a la carencia de CD16b, ya que otros receptores para Fc de IgG (CD32 y CD64) podrían suplir la función de CD16b. Sin embargo, es importante tener en cuenta esta rara deficiencia (b y neutropenia isoinmune natal transitoria en niños nacidos de mujeres con fenotipo "null".

Occurrence of the rare CD16b deficiency ("null" phenotype) in neutrophils from two female patients (41 and 15 years old) is reported. The first case was referred with a diagnosis of anemia related to paroxistic nocturnal hemoglobinuria and the second case, with presumptive diagnosis of immune neutropenia. In both cases, absence of CD16b expression was determined by flow cytometry without deficiencies of other neutrophil alloantigens or defects of membrane anchorage through glycosil phosphatydil inositol (GPI) linkage. Clinical manifestations in both patients could not be attributed exclusively to the absence of CD16b, as other receptors for the IgG Fc fragment (CD32 and CD64) could compensate this deficiency that occurs in < 1% of the caucasic population. Nevertheless, it is important to take this rare deficiency into account in order to prevent isoantibody formation after eventual blood transfusions, or transient neonatal immune neutropenia in children born to women with the "null" phenotype.

[Neutrophils without CD16b receptors]. / Ausencia del receptor CD16b en neutrófilos.

Occurrence of the rare CD16b deficiency ("null" phenotype) in neutrophils from two female patients (41 and 15 years old) is reported. The first case was referred with a diagnosis of anemia related to paroxistic nocturnal hemoglobinuria and the second case, with presumptive diagnosis of immune neutropenia. In both cases, absence of CD16b expression was determined by flow cytometry without deficiencies of other neutrophil alloantigens or defects of membrane anchorage through glycosil phosphatydil inositol (GPI) linkage. Clinical manifestations in both patients could not be attributed exclusively to the absence of CD16b, as other receptors for the IgG Fc fragment (CD32 and CD64) could compensate this deficiency that occurs in <1% of the caucasic population. Nevertheless, it is important to take this rare deficiency into account in order to prevent isoantibody formation after eventual blood transfusions, or transient neonatal immune neutropenia in children born to women with the "null" phenotype.

[Autoimmune-alloimmune neonatal neutropenia. Serum reactive IgG and neutrophil-specific phenotype detected by flow cytometry]. / Neutropenia inmune-aloinmune neonatal. IgG sérica reactiva y fenotipo específico de los neutrófilos evaluados por citometría de flujo.

Auto or alloantibodies reactive with neutrophils define immune neutropenia. Alloimmune neonatal neutropenia is caused by maternal sensitization to paternal neutrophil antigens, resulting in IgG antibodies that are transferred to the fetus through the placenta. We present the studies in 4 children from 3 families with neutropenia of unknown origin (two of them were brothers). They were evaluated by flow cytometry in parallel with leukoagglutination. Reference values were established for serum reactive IgG in healthy volunteers for three dilutions (1/2, 1/5 and 1/20), both for the autologous reaction (serum and cells of the same individual) and for the heterologous reaction (serum and cells of different individuals). Results were expressed by an index defined by the quotient of the mean fluorescence intensity of the patient's serum divided by that of the reference serum. Serum reactive/agglutinant factors and circulating immune complexes were evaluated in patients and parents serum. Neutrophil specific phenotypes were determined for HNA-1a, HNA-1b and HNA-2a. Reactive IgG/agglutinant factors were found in 4 children. Two maternal sera were reactive against paternal and/or children neutrophils. Circulating immune complexes were detected in 2/4 children sera and were negative in 3/3 maternal sera. Maternal/children incompatibility was detected in the four cases. The three mothers had the same phenotype: homozygous NA1/NA1, NB1+.

Neutropenia inmune - aloinmune neonatal IgG serica reactiva y fenotipo especifico de los neutrofilos evaluados por citometria de flujo / Autoimmune-alloimmune neonatal neutropenia. Serum reactive IgG and neutrophil-specific

La neutropenia inmune se diagnostica por la presencia de auto o aloanticuerpos reactivos con losneutrófilos. La neutropenia aloinmune neonatal es consecuencia de la sensibilización materna alos antígenos específicos de los neutrófilos paternos que afectan al neonato al atravesar la barrera placentaria. Se presentan 4 casos de niños, 2 de ellos hermanos consanguíneos con doble vínculo. Se estudiaron los sueros de los pacientes y sus padres. Por citometría de flujo se establecen los valores de referencia de la IgG sérica reactiva con los neutrófilos en voluntarios sanos, para 3 diluciones (1/2, 1/5 y 1/20) en reacción autóloga(suero y células de un mismo individuo) y heteróloga (suero y células de diferentes individuos). Los resultadosse expresan por un índice definido como el cociente entre la mediana de la intensidad de fluorescencia media del suero incógnita y la de un suero utilizado como referencia. Por leucoaglutinación se evaluó la dilucióndel suero 1/20. Se determinó el nivel de complejos inmunes circulantes. Se determinó el fenotipo, para los epitopes HNA-1a, HNA-1b y HNA-2a. En los 4 niños se encontró IgG reactiva y/o factores aglutinantes; 2/3 sueros maternos fueron reactivos con los neutrófilos del cónyuge y de los hijos. Los complejos inmunes circulantes fueron positivos en 2/4 sueros negativos en 3/3 sueros maternos. Se encontró incompatibilidad materno-infantil en los 4 casos. Las 3 madres tenían igual fenotipo: homocigotos NA1/NA1, NB1+. En síntesis, se presenta el hallazgo de 4 casos con neutropenia inmune: 3/4 auto-inmune, 1/3 se asocia a complejos inmunes circulantes y 1/4 con neutropenia neonatal aloinmune

Auto or alloantibodies reactive with neutrophils define immune neutropenia. Alloimmune neonatal neutropenia is caused by maternal sensitization to paternal neutrophil antigens, resulting in IgG antibodies that are transferred to the fetus through the placenta. We present the studies in 4 children from 3 families with neutropenia of unknown origin (two of them were brothers). Theywere evaluated by flow cytometry in parallel with leukoagglutination. Reference values were established forserum reactive IgG in healthy volunteers for three dilutions (1/2, 1/5 and 1/20), both for the autologous reaction (serum and cells of the same individual) and for the heterologous reaction (serum and cells of differentindividuals). Results were expressed by an index defined by the quotient of the mean fluorescence intensityof the patient’s serum divided by that of the reference serum. Serum reactive/agglutinant factors and circulating immune complexes were evaluated in patients and parents serum. Neutrophil specific phenotypes weredetermined for HNA-1a, HNA-1b and HNA-2a. Reactive IgG/agglutinant factors were found in 4 children. Twomaternal sera were reactive against paternal and/or children neutrophils. Circulating immune complexes weredetected in 2/4 children sera and were negative in 3/3 maternal sera. Maternal/children incompatibility wasdetected in the four cases. The three mothers had the same phenotype: homozygous NA1/NA1, NB1+

Neutropenia inmune - aloinmune neonatal IgG serica reactiva y fenotipo especifico de los neutrofilos evaluados por citometria de flujo / Autoimmune-alloimmune neonatal neutropenia. Serum reactive IgG and neutrophil-specific

La neutropenia inmune se diagnostica por la presencia de auto o aloanticuerpos reactivos con losneutrófilos. La neutropenia aloinmune neonatal es consecuencia de la sensibilización materna alos antígenos específicos de los neutrófilos paternos que afectan al neonato al atravesar la barrera placentaria. Se presentan 4 casos de niños, 2 de ellos hermanos consanguíneos con doble vínculo. Se estudiaron los sueros de los pacientes y sus padres. Por citometría de flujo se establecen los valores de referencia de la IgG sérica reactiva con los neutrófilos en voluntarios sanos, para 3 diluciones (1/2, 1/5 y 1/20) en reacción autóloga(suero y células de un mismo individuo) y heteróloga (suero y células de diferentes individuos). Los resultadosse expresan por un índice definido como el cociente entre la mediana de la intensidad de fluorescencia media del suero incógnita y la de un suero utilizado como referencia. Por leucoaglutinación se evaluó la dilucióndel suero 1/20. Se determinó el nivel de complejos inmunes circulantes. Se determinó el fenotipo, para los epitopes HNA-1a, HNA-1b y HNA-2a. En los 4 niños se encontró IgG reactiva y/o factores aglutinantes; 2/3 sueros maternos fueron reactivos con los neutrófilos del cónyuge y de los hijos. Los complejos inmunes circulantes fueron positivos en 2/4 sueros negativos en 3/3 sueros maternos. Se encontró incompatibilidad materno-infantil en los 4 casos. Las 3 madres tenían igual fenotipo: homocigotos NA1/NA1, NB1+. En síntesis, se presenta el hallazgo de 4 casos con neutropenia inmune: 3/4 auto-inmune, 1/3 se asocia a complejos inmunes circulantes y 1/4 con neutropenia neonatal aloinmune (AU)

Auto or alloantibodies reactive with neutrophils define immune neutropenia. Alloimmune neonatal neutropenia is caused by maternal sensitization to paternal neutrophil antigens, resulting in IgG antibodies that are transferred to the fetus through the placenta. We present the studies in 4 children from 3 families with neutropenia of unknown origin (two of them were brothers). Theywere evaluated by flow cytometry in parallel with leukoagglutination. Reference values were established forserum reactive IgG in healthy volunteers for three dilutions (1/2, 1/5 and 1/20), both for the autologous reaction (serum and cells of the same individual) and for the heterologous reaction (serum and cells of differentindividuals). Results were expressed by an index defined by the quotient of the mean fluorescence intensityof the patientãs serum divided by that of the reference serum. Serum reactive/agglutinant factors and circulating immune complexes were evaluated in patients and parents serum. Neutrophil specific phenotypes weredetermined for HNA-1a, HNA-1b and HNA-2a. Reactive IgG/agglutinant factors were found in 4 children. Twomaternal sera were reactive against paternal and/or children neutrophils. Circulating immune complexes weredetected in 2/4 children sera and were negative in 3/3 maternal sera. Maternal/children incompatibility wasdetected in the four cases. The three mothers had the same phenotype: homozygous NA1/NA1, NB1+ (AU)

Neutropenia inmune - aloinmune neonatal IgG serica reactiva y fenotipo especifico de los neutrofilos evaluados por citometria de flujo / Autoimmune-alloimmune neonatal neutropenia. Serum reactive IgG and neutrophil-specific

La neutropenia inmune se diagnostica por la presencia de auto o aloanticuerpos reactivos con losneutrófilos. La neutropenia aloinmune neonatal es consecuencia de la sensibilización materna alos antígenos específicos de los neutrófilos paternos que afectan al neonato al atravesar la barrera placentaria. Se presentan 4 casos de niños, 2 de ellos hermanos consanguíneos con doble vínculo. Se estudiaron los sueros de los pacientes y sus padres. Por citometría de flujo se establecen los valores de referencia de la IgG sérica reactiva con los neutrófilos en voluntarios sanos, para 3 diluciones (1/2, 1/5 y 1/20) en reacción autóloga(suero y células de un mismo individuo) y heteróloga (suero y células de diferentes individuos). Los resultadosse expresan por un índice definido como el cociente entre la mediana de la intensidad de fluorescencia media del suero incógnita y la de un suero utilizado como referencia. Por leucoaglutinación se evaluó la dilucióndel suero 1/20. Se determinó el nivel de complejos inmunes circulantes. Se determinó el fenotipo, para los epitopes HNA-1a, HNA-1b y HNA-2a. En los 4 niños se encontró IgG reactiva y/o factores aglutinantes; 2/3 sueros maternos fueron reactivos con los neutrófilos del cónyuge y de los hijos. Los complejos inmunes circulantes fueron positivos en 2/4 sueros negativos en 3/3 sueros maternos. Se encontró incompatibilidad materno-infantil en los 4 casos. Las 3 madres tenían igual fenotipo: homocigotos NA1/NA1, NB1+. En síntesis, se presenta el hallazgo de 4 casos con neutropenia inmune: 3/4 auto-inmune, 1/3 se asocia a complejos inmunes circulantes y 1/4 con neutropenia neonatal aloinmune (AU)

Auto or alloantibodies reactive with neutrophils define immune neutropenia. Alloimmune neonatal neutropenia is caused by maternal sensitization to paternal neutrophil antigens, resulting in IgG antibodies that are transferred to the fetus through the placenta. We present the studies in 4 children from 3 families with neutropenia of unknown origin (two of them were brothers). Theywere evaluated by flow cytometry in parallel with leukoagglutination. Reference values were established forserum reactive IgG in healthy volunteers for three dilutions (1/2, 1/5 and 1/20), both for the autologous reaction (serum and cells of the same individual) and for the heterologous reaction (serum and cells of differentindividuals). Results were expressed by an index defined by the quotient of the mean fluorescence intensityof the patientãs serum divided by that of the reference serum. Serum reactive/agglutinant factors and circulating immune complexes were evaluated in patients and parents serum. Neutrophil specific phenotypes weredetermined for HNA-1a, HNA-1b and HNA-2a. Reactive IgG/agglutinant factors were found in 4 children. Twomaternal sera were reactive against paternal and/or children neutrophils. Circulating immune complexes weredetected in 2/4 children sera and were negative in 3/3 maternal sera. Maternal/children incompatibility wasdetected in the four cases. The three mothers had the same phenotype: homozygous NA1/NA1, NB1+ (AU)

[Chronic urticaria. Clinical evolution, autologous serum test, count and activation of basophils]. / Urticaria crónica. Evolución clínica, prueba del suero autólogo, recuento y activación de basófilos.

Recent advances on the pathogenesis of chronic urticaria have defined a group of patients with autoantibodies directed to the IgE or to the alpha chain of the Fc high affinity receptor of IgE, Fc epsilon RI alpha. These antibodies are detected in vivo through the autologous serum test (AST) and in vitro with a variety of techniques. We here describe 37 patients with chronic urticaria, 28 female and 9 male, with a f/m ratio of 3.1. Mean age at onset was 36.5 years (range 16-78). AST was positive in 25 (68%) of 37 patients. Serum induced a wheal significantly larger than plasma (122 +/- 78 mm2 vs 57 +/- 66 mm2, p < 0.05). Median persistence of the chronic urticaria, estimated by Kaplan-Meyer analysis, was 437 days, with no difference between AST(+) and AST(-) patients (437 vs. 369, p = 0.18). Mean IgE concentration was 157 +/- 173 IU/mL, as expected in an unselected population. Basophil count was lower in patients compared with controls (17 +/- 12 cel/microL vs. 43 +/- 27 cel/microL, p < 0.008). Only sera from 2/7 (28.6%) patients AST (+) and very low basophil count consistently induced expression of CD63. This effect was abrogated in non-releasing basophils, confirming the presence of antibodies directed to the Fc epsilon RI alpha-IgE. We conclude that functional antibodies are present in only a minority of patients and that their identification does not predict the outcome.

Urticaria cronica. Evolucion clinica, prueba del suero autologo, recuento y activacion de basofilos / Chronic urticaria. Clinical evolution, autologous serum test, count and activation of basophils

Recent advances on the pathogenesis of chronic urticaria have defined a group of patients with autoantibodies directed to the IgE or to the alpha chain of the Fc high affinity receptor of IgE, Fc epsilon RI alpha. These antibodies are detected in vivo through the autologous serum test (AST) and in vitro with a variety of techniques. We here describe 37 patients with chronic urticaria, 28 female and 9 male, with a f/m ratio of 3.1. Mean age at onset was 36.5 years (range 16-78). AST was positive in 25 (68%) of 37 patients. Serum induced a wheal significantly larger than plasma (122 +/- 78 mm2 vs 57 +/- 66 mm2, p < 0.05). Median persistence of the chronic urticaria, estimated by Kaplan-Meyer analysis, was 437 days, with no difference between AST(+) and AST(-) patients (437 vs. 369, p = 0.18). Mean IgE concentration was 157 +/- 173 IU/mL, as expected in an unselected population. Basophil count was lower in patients compared with controls (17 +/- 12 cel/microL vs. 43 +/- 27 cel/microL, p < 0.008). Only sera from 2/7 (28.6%) patients AST (+) and very low basophil count consistently induced expression of CD63. This effect was abrogated in non-releasing basophils, confirming the presence of antibodies directed to the Fc epsilon RI alpha-IgE. We conclude that functional antibodies are present in only a minority of patients and that their identification does not predict the outcome

Urticaria crónica. Evolución clínica, prueba del suero autólogo, recuento y activación de basófilos. / [Chronic urticaria. Clinical evolution, autologous serum test, count and activation of basophils]

Recent advances on the pathogenesis of chronic urticaria have defined a group of patients with autoantibodies directed to the IgE or to the alpha chain of the Fc high affinity receptor of IgE, Fc epsilon RI alpha. These antibodies are detected in vivo through the autologous serum test (AST) and in vitro with a variety of techniques. We here describe 37 patients with chronic urticaria, 28 female and 9 male, with a f/m ratio of 3.1. Mean age at onset was 36.5 years (range 16-78). AST was positive in 25 (68

) of 37 patients. Serum induced a wheal significantly larger than plasma (122 +/- 78 mm2 vs 57 +/- 66 mm2, p < 0.05). Median persistence of the chronic urticaria, estimated by Kaplan-Meyer analysis, was 437 days, with no difference between AST(+) and AST(-) patients (437 vs. 369, p = 0.18). Mean IgE concentration was 157 +/- 173 IU/mL, as expected in an unselected population. Basophil count was lower in patients compared with controls (17 +/- 12 cel/microL vs. 43 +/- 27 cel/microL, p < 0.008). Only sera from 2/7 (28.6

) patients AST (+) and very low basophil count consistently induced expression of CD63. This effect was abrogated in non-releasing basophils, confirming the presence of antibodies directed to the Fc epsilon RI alpha-IgE. We conclude that functional antibodies are present in only a minority of patients and that their identification does not predict the outcome.

Urticaria cronica. Evolucion clinica, prueba del suero autologo, recuento y activacion de basofilos / Chronic urticaria. Clinical evolution, autologous serum test, count and activation of basophils

Recent advances on the pathogenesis of chronic urticaria have defined a group of patients with autoantibodies directed to the IgE or to the alpha chain of the Fc high affinity receptor of IgE, Fc epsilon RI alpha. These antibodies are detected in vivo through the autologous serum test (AST) and in vitro with a variety of techniques. We here describe 37 patients with chronic urticaria, 28 female and 9 male, with a f/m ratio of 3.1. Mean age at onset was 36.5 years (range 16-78). AST was positive in 25 (68%) of 37 patients. Serum induced a wheal significantly larger than plasma (122 +/- 78 mm2 vs 57 +/- 66 mm2, p < 0.05). Median persistence of the chronic urticaria, estimated by Kaplan-Meyer analysis, was 437 days, with no difference between AST(+) and AST(-) patients (437 vs. 369, p = 0.18). Mean IgE concentration was 157 +/- 173 IU/mL, as expected in an unselected population. Basophil count was lower in patients compared with controls (17 +/- 12 cel/microL vs. 43 +/- 27 cel/microL, p < 0.008). Only sera from 2/7 (28.6%) patients AST (+) and very low basophil count consistently induced expression of CD63. This effect was abrogated in non-releasing basophils, confirming the presence of antibodies directed to the Fc epsilon RI alpha-IgE. We conclude that functional antibodies are present in only a minority of patients and that their identification does not predict the outcome (AU)

Evolución del clon de la hemoglobinuria paroxística nocturna en la crisis hemolítica de una anemia aplásica: estudio por citometria de flujo / Evolution of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria clone during an hemolytic crisis in a patient with aplastic anemia: flow cytometry study

Se estudió por citometría de flujo la expansión de un clon HPN durante una crisis hemolítica en una paciente con anemia aplásica (AA) de 18 años de evolución. Cuando las pruebas de Ham y Sacarosa fueron positivas (día 0) estaban disminuidos los niveles de hemoglobina y los recuentos de eritrocitos y leucocitos. Estos descensos se fueron acentuando hasta el último día del estudio (día 24). Durante este período los niveles de LDH, bilirrubina indirecta y reticulocitos se mantuvieron elevados. El clon HPN se investigó evaluando la expresión de CD55 y CD59 sobre los eritrocitos. Las células de la paciente presentaron una menor intensidad de fluorescencia para CD55 respecto del control normal. Con la marcación con anti CD59 se detectó la presencia de dos poblaciones de hematíes: HPN I, con fluorescencia positiva semejante a la de la población normal y HPN III, con fluorescencia negativa, correspondiente al clon HPN. El porcentaje de la población HPN III se incrementó de 52 por ciento (días 0 y 7) a 70 por ciento (día 24). Las proteínas de la membrana leucocitaria también se encontraron afectadas (CD14 ausente y CD16 disminuida). El análisis global de los datos reveló una buena correlación entre la observación clínica, la evolución de los valores del laboratorio y la expansión del clon.

Evolución del clon de la hemoglobinuria paroxística nocturna en la crisis hemolítica de una anemia aplásica: estudio por citometria de flujo / Evolution of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria clone during an hemolytic crisis in a patient with aplastic anemia: flow cytometry study

Se estudió por citometría de flujo la expansión de un clon HPN durante una crisis hemolítica en una paciente con anemia aplásica (AA) de 18 años de evolución. Cuando las pruebas de Ham y Sacarosa fueron positivas (día 0) estaban disminuidos los niveles de hemoglobina y los recuentos de eritrocitos y leucocitos. Estos descensos se fueron acentuando hasta el último día del estudio (día 24). Durante este período los niveles de LDH, bilirrubina indirecta y reticulocitos se mantuvieron elevados. El clon HPN se investigó evaluando la expresión de CD55 y CD59 sobre los eritrocitos. Las células de la paciente presentaron una menor intensidad de fluorescencia para CD55 respecto del control normal. Con la marcación con anti CD59 se detectó la presencia de dos poblaciones de hematíes: HPN I, con fluorescencia positiva semejante a la de la población normal y HPN III, con fluorescencia negativa, correspondiente al clon HPN. El porcentaje de la población HPN III se incrementó de 52 por ciento (días 0 y 7) a 70 por ciento (día 24). Las proteínas de la membrana leucocitaria también se encontraron afectadas (CD14 ausente y CD16 disminuida). El análisis global de los datos reveló una buena correlación entre la observación clínica, la evolución de los valores del laboratorio y la expansión del clon. (AU)

Citometría de flujo: valores absolutos y relativos de células CD3 CD4 obtenidos con dos técnicas / Flow cytometry: absolute and relative values of CD3 CD4 cells obtained by two different techniques

Se compararon los valores absolutos y relativos de linfocitos CD4 con dos técnicas de inmunofluorescensia en paralelo, utilizando un citómetro de flujo: 1) Método Convencional (MC): incluye cuatro tubos por muestra y requiere los datos externos del hemograma para calcular el valor absoluto. 2) Método de Microesferas (MME): incluye un tubo y no depende de datos externos. Ambas técnicas se realizaron a partir de sangre periférica con lisis de eritrocitos en 10 muestras de individuos normales (N), 18 de pacientes con hemofilia (He) e infectados con el virus de la inmunodeficiencia humana (HIV+) y 10 muestras de individuos HIV+ no He. Los resultados con la prueba de Wilcoxon para muestras pareadas mostraron diferencias significativas (p <0,05) entre ambas técnicas sólo para los valores absolutos del grupo normal, no así en los otros grupos ni para los valores relativos. Se observaron niveles consistentemente menores para el MME. Cuando los datos se redistribuyeron en cinco intervalos según los valores absolutos, no se encontraron diferencias significativas. La elección de una u otra técnica depende de las posibilidades de cada laboratorio. El MME es más rápido y simple, el MC permite realizar la confrontación de datos (cálculo directo de CD4 comparado con los datos obtenidos por substracción de CD8) dando confiabilidad al resultado

Citometría de flujo: valores absolutos y relativos de células CD3 CD4 obtenidos con dos técnicas / Flow cytometry: absolute and relative values of CD3 CD4 cells obtained by two different techniques

Se compararon los valores absolutos y relativos de linfocitos CD4 con dos técnicas de inmunofluorescensia en paralelo, utilizando un citómetro de flujo: 1) Método Convencional (MC): incluye cuatro tubos por muestra y requiere los datos externos del hemograma para calcular el valor absoluto. 2) Método de Microesferas (MME): incluye un tubo y no depende de datos externos. Ambas técnicas se realizaron a partir de sangre periférica con lisis de eritrocitos en 10 muestras de individuos normales (N), 18 de pacientes con hemofilia (He) e infectados con el virus de la inmunodeficiencia humana (HIV+) y 10 muestras de individuos HIV+ no He. Los resultados con la prueba de Wilcoxon para muestras pareadas mostraron diferencias significativas (p <0,05) entre ambas técnicas sólo para los valores absolutos del grupo normal, no así en los otros grupos ni para los valores relativos. Se observaron niveles consistentemente menores para el MME. Cuando los datos se redistribuyeron en cinco intervalos según los valores absolutos, no se encontraron diferencias significativas. La elección de una u otra técnica depende de las posibilidades de cada laboratorio. El MME es más rápido y simple, el MC permite realizar la confrontación de datos (cálculo directo de CD4 comparado con los datos obtenidos por substracción de CD8) dando confiabilidad al resultado (AU)

Primer estudio multicéntrico realizado por el Grupo Rioplatense de Citometría de Flujo: control de calidad en las mediciones de subpoblaciones de linfocitos T / First multicentric study by Grupo Rioplatense de Citometría de Flujo : quality control of lymphocyte subsets

El control de calidad se efectuó sobre los valores obtenidos, relativos y absolutos, de linfocitos T y de sus subpoblaciones CD4+ y CD8+ en muestras de sangre de pacientes infectados con el virus de la inmunodeficiencia humana (HIV). El estudio incluyó dieciocho centros: diez utilizaron citómetros de flujo de Becton Dickinson, tres de Coulter y 5 de Ortho que representan a 17 laboratorios de Argentina y a uno de Uruguay. Los siguientes programas se utilizaron para analizar los datos : SimulSET, Paint a Gate (Becton Dickinson), Profile II, XL System (Coulter), ImmunoCount Trio y Combo Cytoron (Ortho). Se obtuvieron muestras de sangre periférica en horas de la mañana (8 a 10 hs) de 10 voluntarios normales (por serología y hemograma) y de 10 pacientes HIV positivos con valores previos de CD4 que variaron entre 200-350 células por microlito y fueron procesadas dentro de las 12 horas. Cada centro obtuvo los valores relativos con el procedimiento técnico habitual y el de los valores absolutos utilizando el hemograma propio. Además, en un contador hematológico Cell-Dyn 3500 se obtuvo para cada muestra el hemograma correspondiente considerado de referencia. Los valores absolutos medios, obtenidos en cada centro con el hemograma propio, para los linfocitos T y los de sus subpoblaciones fueron significativamente diferentes. No hubo diferencias significativas para los valores porcentuales entre los diferentes centros ni para los valores absolutos obtenidos con el hemograma de referencia. Concluimos que las diferencias en los valores absolutos de los linfocitos T y sus subpoblaciones dependen del recuento hematológico empleado.

Primer estudio multicéntrico realizado por el Grupo Rioplatense de Citometría de Flujo: control de calidad en las mediciones de subpoblaciones de linfocitos T / First multicentric study by Grupo Rioplatense de Citometría de Flujo : quality control of lymphocyte subsets

El control de calidad se efectuó sobre los valores obtenidos, relativos y absolutos, de linfocitos T y de sus subpoblaciones CD4+ y CD8+ en muestras de sangre de pacientes infectados con el virus de la inmunodeficiencia humana (HIV). El estudio incluyó dieciocho centros: diez utilizaron citómetros de flujo de Becton Dickinson, tres de Coulter y 5 de Ortho que representan a 17 laboratorios de Argentina y a uno de Uruguay. Los siguientes programas se utilizaron para analizar los datos : SimulSET, Paint a Gate (Becton Dickinson), Profile II, XL System (Coulter), ImmunoCount Trio y Combo Cytoron (Ortho). Se obtuvieron muestras de sangre periférica en horas de la mañana (8 a 10 hs) de 10 voluntarios normales (por serología y hemograma) y de 10 pacientes HIV positivos con valores previos de CD4 que variaron entre 200-350 células por microlito y fueron procesadas dentro de las 12 horas. Cada centro obtuvo los valores relativos con el procedimiento técnico habitual y el de los valores absolutos utilizando el hemograma propio. Además, en un contador hematológico Cell-Dyn 3500 se obtuvo para cada muestra el hemograma correspondiente considerado de referencia. Los valores absolutos medios, obtenidos en cada centro con el hemograma propio, para los linfocitos T y los de sus subpoblaciones fueron significativamente diferentes. No hubo diferencias significativas para los valores porcentuales entre los diferentes centros ni para los valores absolutos obtenidos con el hemograma de referencia. Concluimos que las diferencias en los valores absolutos de los linfocitos T y sus subpoblaciones dependen del recuento hematológico empleado. (AU)

Aumento de CD4 en monocitos de pacientes con Hemofilia VIH positivos / Increased CD4 in monocytes from HIV+ Hemophilia patients

El sistema monocito macrofágico (M/M) juega un papel central en la infección por el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) y la expresión del antígeno CD4 sobre la superficie del M/M es un factor clave para la entrada del VIH a células susceptibles. En este trabajo evaluamos los niveles del receptor CD4 en monocitos de pacientes con hemofilia (He) infectados o no con el VIH (He-VIH+). Se estudiaron treinta pacientes He-VIH+, cuatro pacientes seronegativos (He-VIH-) y veinte dadores normales voluntarios. La evaluación fenotípica de los monocitos fue realizada por citometría de flujo a partir de sangre periférica teñida con anticuerpos monoclonales anti CD45, CD3, CD4 y CD14. Se encontró que el porcentaje de monocitos CD4+ estaba incrementado en todos los grupos de pacientes (incluyendo He-VIH-), pero fue más alto en pacientes sintomáticos He-VIH+. Además el valor más frecuente de intensidad de fluorescencia para CD4 de la población de monocitos de estos pacientes, estaba desplazado hacia zonas de mayor intensidad respecto de los individuos normales. Esto indicaría una expresión incrementada del número de moléculas CD4 sobre la membrana celular de los monocitos. Las características de esta células en los pacientes He-VIH+, podrían favorecer la persistencia y la diseminación viral.

Aumento de CD4 en monocitos de pacientes con Hemofilia VIH positivos / Increased CD4 in monocytes from HIV+ Hemophilia patients

El sistema monocito macrofágico (M/M) juega un papel central en la infección por el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) y la expresión del antígeno CD4 sobre la superficie del M/M es un factor clave para la entrada del VIH a células susceptibles. En este trabajo evaluamos los niveles del receptor CD4 en monocitos de pacientes con hemofilia (He) infectados o no con el VIH (He-VIH+). Se estudiaron treinta pacientes He-VIH+, cuatro pacientes seronegativos (He-VIH-) y veinte dadores normales voluntarios. La evaluación fenotípica de los monocitos fue realizada por citometría de flujo a partir de sangre periférica teñida con anticuerpos monoclonales anti CD45, CD3, CD4 y CD14. Se encontró que el porcentaje de monocitos CD4+ estaba incrementado en todos los grupos de pacientes (incluyendo He-VIH-), pero fue más alto en pacientes sintomáticos He-VIH+. Además el valor más frecuente de intensidad de fluorescencia para CD4 de la población de monocitos de estos pacientes, estaba desplazado hacia zonas de mayor intensidad respecto de los individuos normales. Esto indicaría una expresión incrementada del número de moléculas CD4 sobre la membrana celular de los monocitos. Las características de esta células en los pacientes He-VIH+, podrían favorecer la persistencia y la diseminación viral.(AU)