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Entamoeba histolytica/genética , Genes de Protozoários , Proteínas rab de Ligação ao GTP/genética , Sequência de Aminoácidos , Animais , Western Blotting , Citoplasma/química , Entamoeba histolytica/química , Imunofluorescência , Dados de Sequência Molecular , Alinhamento de Sequência , Proteínas rab de Ligação ao GTP/análiseRESUMO
Peptide nucleic acids (PNAs) may be a potent tool for gene function studies in medically important parasitic organisms, especially those that have not before been accessible to molecular genetic knockout approaches. One such organism is Entamoeba histolytica, the causative agent of amebiasis, which infects about 500 million people and is the cause of clinical disease in over 40 million each year, mainly in the tropical and subtropical world. We used PNA antisense oligomers to inhibit expression of an episomally expressed gene (neomycin phosphorotransferase, NPT) and a chromosomal gene (EhErd2, a homolog of Erd2, a marker of the Golgi system in eukaryotic cells) in axenically cultured trophozoites of E. histolytica. Measurement of NPT enzyme activity and EhErd2 protein levels, as well as measurement of cellular proliferation, revealed specific decreases in expression of the target genes, and concomitant inhibition of cell growth, in trophozoites treated with micromolar concentrations of unmodified antisense PNA oligomers.
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Elementos Antissenso (Genética)/farmacologia , Regulação para Baixo/efeitos dos fármacos , Entamoeba histolytica/efeitos dos fármacos , Canamicina Quinase/metabolismo , Ácidos Nucleicos Peptídicos/farmacologia , Animais , Elementos Antissenso (Genética)/genética , Biomarcadores/análise , Divisão Celular/efeitos dos fármacos , Entamoeba histolytica/enzimologia , Entamoeba histolytica/genética , Entamoeba histolytica/crescimento & desenvolvimento , Gentamicinas/farmacologia , Complexo de Golgi/efeitos dos fármacos , Complexo de Golgi/metabolismo , Canamicina Quinase/biossíntese , Canamicina Quinase/genética , Proteínas de Membrana/biossíntese , Proteínas de Membrana/genética , Proteínas de Membrana/metabolismo , Microscopia de Fluorescência , Neomicina/metabolismo , Ácidos Nucleicos Peptídicos/genética , Permeabilidade , TransfecçãoAssuntos
Entamoeba histolytica/metabolismo , Proteínas rab de Ligação ao GTP/metabolismo , Sequência de Aminoácidos , Animais , Transporte Biológico , Clonagem Molecular , Entamoeba histolytica/genética , Modelos Moleculares , Dados de Sequência Molecular , Homologia de Sequência de Aminoácidos , Proteínas rab de Ligação ao GTP/química , Proteínas rab de Ligação ao GTP/genéticaAssuntos
Entamoeba histolytica/genética , Proteínas de Membrana/genética , Proteínas de Saccharomyces cerevisiae , Sequência de Aminoácidos , Animais , Clonagem Molecular , DNA Complementar , Hexosiltransferases , Humanos , Proteínas de Membrana/química , Dados de Sequência Molecular , Homologia de Sequência de AminoácidosAssuntos
Entamoeba histolytica/genética , Regulação da Expressão Gênica , Proteínas de Membrana/genética , Proteínas de Protozoários/genética , Sequência de Aminoácidos , Animais , Biomarcadores , Clonagem Molecular , Entamoeba histolytica/metabolismo , Proteínas de Membrana/metabolismo , Dados de Sequência Molecular , Proteínas de Protozoários/metabolismo , Receptores de Peptídeos/metabolismo , Homologia de Sequência de AminoácidosAssuntos
Entamoeba histolytica/genética , Regulação da Expressão Gênica/fisiologia , Genes de Protozoários , Proteínas de Membrana/genética , Proteínas de Protozoários/metabolismo , Sequência de Aminoácidos , Animais , Entamoeba histolytica/fisiologia , Dados de Sequência Molecular , Homologia de Sequência de AminoácidosRESUMO
Among the small nuclear RNAs (snRNAs) involved in the spliceosomal processing of pre-mRNA, U6 is the most conserved. As a first evidence for the presence of the splicing machinery in the amitochondrial protozoan Entamoeba histolytica (Eh), we have cloned the u6 snRNA gene. We find that in this organism u6 is a single copy gene that is transcribed as a poly(A)- RNA molecule of approximately 105 nucleotides. We have mapped the 5' end of the U6 snRNA transcript, and identified typical elements of a putative polymerase III promoter. This is the first snRNA gene reported in Eh. Sequence analysis indicates that this gene contains all the conserved nucleotides known to be important for U6 snRNA function. These results, in conjunction with the earlier finding of genes that contain pre-mRNA introns, suggest that Eh has a functional spliceosomal complex.