RESUMO
BACKGROUND: Oxidative modification of low density lipoproteins (LDL) is recognized as one of the major processes involved in atherogenesis. The in vitro standardized measurement of LDL oxidative susceptibility could thus be of clinical significance. The aim of the present study was to establish a method which would allow the evaluation of oxidative susceptibility of LDL in the general clinical laboratory. RESULTS: LDL was isolated from human plasma by selective precipitation with amphipathic polymers. The ability of LDL to form peroxides was assessed by measuring thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) after incubation with Cu2+ and H2O2. Reaction kinetics showed a three-phase pattern (latency, propagation and decomposition phases) which allowed us to select 150 min as the time point to stop the incubation by cooling and EDTA addition. The mixture Cu2+/H2O2 yielded more lipoperoxides than each one on its own at the same time end-point. Induced peroxidation was measured in normal subjects and in type 2 diabetic patients. In the control group, results were 21.7 +/- 1.5 nmol MDA/mg LDL protein, while in the diabetic group results were significantly increased (39.0 +/- 3.0 nmol MDA/mg LDL protein; p < 0.001). CONCLUSION: a simple and useful method is presented for the routine determination of LDL susceptibility to peroxidation in a clinical laboratory.
RESUMO
En el presente trabajo se modifica el método cinético de Johnson y colaboradores para la determinación de proteínas séricas glicosiladas(PSG), mediante la técnica manual de punto final y se adapta en su forma original para el uso en un analizador automático. Se establece el intervalo de referencia de PSG en población no diabética y se aplica el método a muestras obtenidas de pacientes diabéticos tipo II para evaluar el uso de la determinación como indicador de control glucémico. La reacción se detiene al acidificar a pH 7.0-7.2; glucosa y bilirrubina no interfieren, al menos hasta 50 mmol/l y 4.5 mg%respectivamente; la hemólisis moderada interfiere. No hay diferencia en los resultados por edad y sexo en el grupo no diabético elegido(n=116), con edades comprendidas entre 15-35 años. Ambas técnicas son capaces de diferenciar individuos normales de diabéticos tipo II no compensados desde el punto de vista de su metabolismo hidrocarbonado. El método es rápido, sencillo y económico. Presenta repetibilidad y reproductividad aceptables; queda de manifiesto la mayor precisión de la técnica automatizada y la accesibilidad de la técnica manual a cualquier laboratorio clínico
Assuntos
Proteínas SanguíneasRESUMO
En el presente trabajo se modifica el método cinético de Johnson y colaboradores para la determinación de proteínas séricas glicosiladas(PSG), mediante la técnica manual de punto final y se adapta en su forma original para el uso en un analizador automático. Se establece el intervalo de referencia de PSG en población no diabética y se aplica el método a muestras obtenidas de pacientes diabéticos tipo II para evaluar el uso de la determinación como indicador de control glucémico. La reacción se detiene al acidificar a pH 7.0-7.2; glucosa y bilirrubina no interfieren, al menos hasta 50 mmol/l y 4.5 mg%respectivamente; la hemólisis moderada interfiere. No hay diferencia en los resultados por edad y sexo en el grupo no diabético elegido(n=116), con edades comprendidas entre 15-35 años. Ambas técnicas son capaces de diferenciar individuos normales de diabéticos tipo II no compensados desde el punto de vista de su metabolismo hidrocarbonado. El método es rápido, sencillo y económico. Presenta repetibilidad y reproductividad aceptables; queda de manifiesto la mayor precisión de la técnica automatizada y la accesibilidad de la técnica manual a cualquier laboratorio clínico
