Leptodactylus latrans Amphibian Skin Secretions as a Novel Source for the Isolation of Antibacterial Peptides.

Amphibians´ skin produces a diverse array of antimicrobial peptides that play a crucial role as the first line of defense against microbial invasion. Despite the immense richness of wild amphibians in Argentina, current knowledge about the presence of peptides with antimicrobial properties is limited to a only few species. Here we used LC-MS-MS to identify antimicrobial peptides with masses ranging from 1000 to 4000 Da from samples of skin secretions of Leptodactylus latrans (Anura: Leptodactylidae). Three novel amino acid sequences were selected for chemical synthesis and further studies. The three synthetic peptides, named P1-Ll-1577, P2-Ll-1298, and P3-Ll-2085, inhibited the growth of two ATCC strains, namely Escherichia coli and Staphylococcus aureus. P3-Ll-2085 was the most active peptide. In the presence of trifluoroethanol (TFE) and anionic liposomes, it adopted an amphipathic α-helical structure. P2-Ll-1298 showed slightly lower activity than P3-Ll-2085. Comparison of the MIC values of these two peptides revealed that the addition of seven amino acid residues (GLLDFLK) on the N-terminal of P2-Ll-1298 significantly improved activity against both strains. P1-Ll-1577, which remarkably is an anionic peptide, showed interesting antimicrobial activity against E. coli and S. aureus strain, showing marked membrane selectivity and non-hemolysis. Due to this, P1-L1-1577 emerges as a potential candidate for the development of new antibacterial drugs.

Antimicrobial peptides from skin secretions of Hypsiboas pulchellus (Anura: Hylidae).

The skin of many amphibians produces a large repertoire of antimicrobial peptides that are crucial in the first line of defense against microbial invasion. Despite the immense richness of wild amphibians in Argentina, knowledge about peptides with antimicrobial properties is limited to a few species. Here we used LC-MS-MS to analyze samples of Hypsiboas pulchellus skin with the aim to identify antimicrobial peptides in the mass range of 1000 to 2000 Da. Twenty-three novel sequences were identified by MS, three of which were selected for chemical synthesis and further studies. The three synthetic peptides, named P1-Hp-1971, P2-Hp-1935, and P3-Hp-1891, inhibited the growth of two ATCC strains: Escherichia coli (MIC: 16, 33, and 17 µM, respectively) and Staphylococcus aureus (MIC: 8, 66, and 17 µM, respectively). P1-Hp-1971 and P3-Hp-1891 were the most active peptides. P1-Hp-1971, which showed the highest therapeutic indices (40 for E. coli and 80 for S. aureus), is a proline-glycine-rich peptide with a highly unordered structure, while P3-Hp-1891 adopts an amphipathic α-helical structure in the presence of 2,2,2-trifluoroethanol and anionic liposomes. This is the first peptidomic study of Hypsiboas pulchellus skin secretions to allow the identification of antimicrobial peptides.

A synthetic analog of plantaricin 149 inhibiting food-borne pathogenic bacteria:evidence for alpha-helical conformation involved in bacteria-membrane interaction.

Plantaricin-149 is a bacteriocin produced by Lactobacillus plantarum NRIC 149 (a LAB isolated from pineapple), which consists of a peptidic chain made up of 22 amino acid residues [Kato et al. J. Ferment. Bioeng. 1994; 77: 277-282]. In this work, a synthetic C-terminal amidated peptide analog denoted Pln149a was prepared by SPPS-Fmoc chemistry and the antagonistic activity against gram-positive and gram-negative bacteria was tested. The secondary structure was studied by circular dichroism (CD) and the vicinity of the tyrosine residue by fluorescence spectroscopy under different conditions. We report the results of the interaction of Pln149a with reverse micelles prepared from the amphiphilic AOT in cyclohexane. Synthetic plantaricin was active against one strain of Staphylococcus aureus and four strains of Listeria genus at pH 5.5 and 7.4 and, like its natural variant, inhibited L. plantarum ATCC 8014. The data derived from spectroscopic measurements in presence of AOT reverse micelles suggest that the secondary structure of the peptide upon interaction is an alpha-helix. In this membrane model, the hydrophobic side of the alpha-helix is inserted into the micelles, leaving the lysines exposed to the solvent and interacting with the polar moieties of AOT. The fluorescence data point out that the N-terminal tyrosine residue is close to the micellar interface.

Producción de aminas no volátiles por cepas de enterococos / Production of non-volatile amines by strains of enterococci

En años recientes ha surgido un marcado interés por los problemas relacionados con la presencia de aminas no volátiles en distintos tipos de quesos, en especial desde la puesta en evidencia de un "síndrome del queso". Dado que no ha sido aún totalmente aclarada la capacidad de los distintos grupos microbianos empleados en los procesos de caseificación para producir estas aminas, se estudió la capacidad de producción de tiramina, triptamina e histamina de cepas de enterococos de probable utilización para la elaboración de "startes". Se esayaron 41 epas de enterococos, cultivándolas en leche sola y en leche con el agregado de los aminoácidos precursores. La extracción y análisis cromatográfico para detectar la presencia de animas se llevaron a cabo según el método indicado por Colonna y col. Se determinó que sólo bajos porcentajes de cepas de Streptococcus faecalis subsp. liquefaciens y de Streptococcus durans (34 y 11%, respectivamente) produjeron trazas de tiramina y triptamina al desarrolar en leche sola. En cambio, cuando se cultivaron en presencia de los aminoácidos precursores, elevados porcentajes de cepas de todas las especies produjeron tiramina en altas concentraciones, y porcentajes variables de ellas produjeron triptamina en concentraciones no superiores a 200 ppm. Todas las cepas ensayadas resultaron incapaces de producir histamina, en las dos condiciones de cultivo estudiadas. Se puede concluir que existe una alta probabilidad de que los enterococos produzcan tiramina ... (AU)

Producción de aminas no volátiles por cepas de enterococos / Production of non-volatile amines by strains of enterococci

En años recientes ha surgido un marcado interés por los problemas relacionados con la presencia de aminas no volátiles en distintos tipos de quesos, en especial desde la puesta en evidencia de un "síndrome del queso". Dado que no ha sido aún totalmente aclarada la capacidad de los distintos grupos microbianos empleados en los procesos de caseificación para producir estas aminas, se estudió la capacidad de producción de tiramina, triptamina e histamina de cepas de enterococos de probable utilización para la elaboración de "startes". Se esayaron 41 epas de enterococos, cultivándolas en leche sola y en leche con el agregado de los aminoácidos precursores. La extracción y análisis cromatográfico para detectar la presencia de animas se llevaron a cabo según el método indicado por Colonna y col. Se determinó que sólo bajos porcentajes de cepas de Streptococcus faecalis subsp. liquefaciens y de Streptococcus durans (34 y 11%, respectivamente) produjeron trazas de tiramina y triptamina al desarrolar en leche sola. En cambio, cuando se cultivaron en presencia de los aminoácidos precursores, elevados porcentajes de cepas de todas las especies produjeron tiramina en altas concentraciones, y porcentajes variables de ellas produjeron triptamina en concentraciones no superiores a 200 ppm. Todas las cepas ensayadas resultaron incapaces de producir histamina, en las dos condiciones de cultivo estudiadas. Se puede concluir que existe una alta probabilidad de que los enterococos produzcan tiramina ...