[Validation of the immunological method of kinetic interaction of microparticles in solution (KIMS) for the determination of phenytoin in saliva at the Hospital de Niños de Santísima Trinidad.] / Validación del método inmunológico de interacción cinética de micropartículas en solución (KIMS) para la determinación de fenitoína en saliva en el hospital de Niños de la Santísima Trinidad.

Phenytoin (DFH), is an anticonvulsant widely used for the treatment of different types of seizures.(1) Therapeutic monitoring (TDM) is required for DFH due to its narrow therapeutic range and nonlinear pharmacokinetics, among other characteristics. Monitoring is frequently done on plasma or serum (total drug) through immunological methods. DFH can also be monitored in saliva, which shows a good correlation with plasma. The concentration of DFH in saliva reflects the concentration of free drug and due to the simplicity in its collection, it leads to a less stressful process for the patient. The aim of this study was to validate the immunological method of kinetic interaction of microparticles in solution (KIMS) for the determination of DFH using saliva as biological matrix. Linearity, precision, detection and quantification limit, accuracy and interference were analyzed. Infostat 8.0 student version software was used for statistical analysis. The method was linear in a range between 0.41 and 5ug/ml. The detection and quantification limits were 0.14 and 0.45ug/ml, respectively. The equation of the straight line obtained based on the method comparison between KIMS and HPLC-UV was DFHKIMS= 0,81* DFHHPLC ­ 0,03.  The KIMS method proved to have the necessary analytical characteristics to be applied as a useful and practical tool for the follow-up of those patients with difficult venous access and/or children with chronic DFH treatments.

La Fenitoína (DFH), es un anticonvulsivante ampliamente utilizado para el tratamiento de distintos tipos de convulsiones.(1) El monitoreo terapéutico (TDM) es requerido para la DFH debido a su estrecho rango terapéutico y farmacocinética no lineal, entre otras características. Los monitoreos se realizan frecuentemente en plasma o suero (droga total) a través de métodos inmunológicos. También se puede monitorear DFH en saliva, la cual presenta una buena correlación con el plasma. La concentración de DFH en saliva refleja la concentración de droga libre y debido a la simplicidad en su recolección, conlleva a un proceso menos estresante para el paciente. El objetivo del trabajo fue validar el método inmunológico de interacción cinética de micropartículas en solución (KIMS) para la determinación de DFH usando como matriz biológica saliva. Se analizó linealidad, precisión, límite de detección y cuantificación, exactitud e interferencia. Se utilizó el software Infostat 8.0 versión estudiantil para el análisis estadístico. El método fue lineal en un intervalo entre 0,41 y 5ug/ml. Los límites de detección y cuantificación fueron 0,14 y 0,45ug/ml respectivamente. La ecuación de la recta obtenida en base a la comparación de métodos entre KIMS y HPLC-UV fue DFHKIMS= 0,81* DFHHPLC - 0,03.  El método KIMS demostró tener las características analíticas necesarias paran ser aplicada como herramienta útil y práctica para el seguimiento de aquellos pacientes de difícil acceso venoso y/o niños con tratamientos crónicos con DFH.

Validation of a immunoassay for the determination of vancomycin in cerebospinal fluid. / [Validación de un método inmunológico para la determinación de vancomicina en líquido cefalorraquídeo.]

Introduction: Vancomycin (VAN) is an antibiotic used to treat serious infections. Its use is related to adverse effects such as acute facial hyperemia, nephrotoxicity and ototoxicity. By having a very narrow therapeutic range, its monitoring is necessary to maximize efficiency and minimize toxic effects. It is estimated that its concentration in CSF is approximately 10% of the plasma level in patients who receive intravenous treatment and who have meninges inflammation. Plasma concentrations of VAN are not a reliable indicator of those present in CSF. The aim of this study was to validate an immunological method based on the kinetic interaction of microparticles in solution (KIMS) for the determination of VAN in CSF. Materials and Methods: KIMS was validated for the evaluation of VAN in CSF. For this, the parameters of linearity, precision, accuracy, limit of detection, limit of quantification, interference, selectivity and specificity were determined. Results: The method was linear in a range between 0 and 15 µg/mL, the CV% obtained oscillated between 0.7 and 2.5% on the linear range. The LOD and LOQ were 0.4 µg/mL and 1.4 µg/mL respectively. The equation of the line obtained based on the correlation of methods between KIMS and HPLC-UV was y = 0.9151x + 1.1695, R² = 0.9453. Conclusion: The KIMS method demonstrated to have an adequate sensitivity and specificity to determine VAN in CSF and being a useful tool for monitoring patients who present complicated infections at CNS level. Materials and Methods: KIMS was validated for the evaluation of VAN in CSF. For this, the parameters of linearity, precision, accuracy, limit of detection, limit of quantification, interference, selectivity and specificity were determined. Results: The method was linear in a range between 0 and 15 µg/mL, the CV% obtained oscillated between 0.7 and 2.5% on the linear range. The LOD and LOQ were 0.4 µg/mL and 1.4 µg/mL respectively. The equation of the line obtained based on the correlation of methods between KIMS and HPLC-UV was y = 0.9151x + 1.1695, R² = 0.9453. Conclusion: The KIMS method demonstrated to have an adequate sensitivity and specificity to determine VAN in CSF and being a useful tool for monitoring patients who present complicated infections at CNS level.

Introducción: La vancomicina (VAN) es un antibiótico utilizado para el tratamiento de infecciones graves. Su uso está relacionado con efectos adversos como hiperemia facial aguda, nefrotoxicidad y ototoxicidad. Al tener un rango terapéutico muy estrecho, el monitoreo terapéutico resulta necesario para maximizar la eficiencia y minimizar los efectos tóxicos. Se estima que su concentración en LCR es, aproximadamente, un 10% de la plasmática en pacientes que reciben tratamiento endovenoso del mismo y que presentan inflamación de las meninges. Las concentraciones plasmáticas de VAN no son un indicador confiable de las presentes en LCR. El objetivo de este trabajo fue validar un método inmunológico basado en la interacción cinética de micropartículas en solución (KIMS) para la determinación de VAN en LCR. Materiales y Métodos: Se validó el método KIMS para la valoración de VAN en LCR. Para ello, se determinaron los parámetros de linealidad, precisión, exactitud, límite de detección, límite de cuantificación, interferencia, selectividad y especificidad. Resultados: el método fue lineal en un intervalo entre 0 y 15 µg/mL, los CV% obtenidos oscilaron entre 0,7 y 2,5% en el rango lineal. Los LOD y LOQ fueron 0,4 µg/mL y 1,4 µg/mL respectivamente. La ecuación de la recta obtenida en base a la correlación de métodos entre KIMS y HPLC-UV fue y= 0,9151x + 1,1695, R²=0,9453. Conclusión: El método KIMS demostró tener una sensibilidad y especificidad apropiadas para la determinación de VAN en LCR y, ser una herramienta útil para el monitoreo de pacientes que presenten infecciones complicadas a nivel del SNC.

Determinación de Levetiracetam en suero humano por cromatografía líquida con detección de arreglo de diodos / Levetiracetam determination in human serum by liquid chromatography with diode array detection / Determinação de Levetiracetam em soro humano por cromatografia líquida com detecção de arranjo de diodos

Se desarrolló y validó un nuevo método analítico para determinar Levetiracetam (LEV) en suero humano utilizando cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) con detección de arreglo de diodos. El procedimiento es sencillo, puede ser incluido en la rutina del laboratorio y prestar servicio tanto en el monitoreo terapéutico como en la urgencia. El método incluye las siguientes etapas: extracción líquido-líquido con diclorometano y evaporación de la fase orgánica, la droga se reconstituye con fase móvil, se inyecta en el cromatógrafo y se detecta a 205 nm. El tiempo de retención de LEV es de 5 minutos y no presenta interferentes con respecto a otras drogas comúnmente prescriptas con Levetiracetam. La curva de trabajo presentó un rango de linealidad entre 5,2 y 82,9 μg/mL, un límite de detección y cuantificación de 0,8 μg/mL y 2,7 μg/mL, respectivamente. La recuperación fue del 99,8%.

A new analytical method for Levetiracetam (LEV) determination in human serum was developed and validated by high performance liquid chromatography (HPLC) with diode detection. It is a simple methodology that can be included in the laboratory routine and can be useful in both therapeutic drug monitoring and emergencies. The drug extraction is performed through a liquid-liquid extraction with methyl chloride. Subsequently, the organic phase is evaporated, reconstituted with the mobile phase, and injected in the chromatograph to be detected at 205 nm. LEV retention time is 5 min and it does not show interference with respect to other drugs commonly prescribed with Levetiracetam. The work curve showed linearity between 5.2 and 82.9 μg/mL and a detection and quantification limit of 0.8 μg/mL and 2.7 μg/mL, respectively, while the recovery was of 99.8%.

Foi desenvolvido e validado um novo método analítico para determinar Levetiracetam (LEV) em soro humano, utilizando cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) com detecção de arranjo de diodos. O procedimento é simples, pode ser incluído na rotina do laboratório e prestar serviço tanto na monitorização terapêutica quanto na urgência. O método inclui as seguintes etapas: extração líquido-líquido com diclorometano, e evaporação da fase orgânica, o fármaco é reconstituído com fase móvel, é injetado no cromatógrafo e detectado a 205 nm. O tempo de retenção de LEV é de 5 minutos e não apresenta interferentes com relação a outras drogas, comumente prescritas com Levetiracetam. A curva de trabalho apresentou um intervalo de linearidade entre 5.2 a 82.9 μg/mL, um limite de detecção e quantificação de 0.8 μg/mL e 2.7 μg/mL respectivamente. A recuperação foi de 99.8%.