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1.
Biosci Biotechnol Biochem ; 80(7): 1362-7, 2016 Jul.
Artigo em Inglês | MEDLINE | ID: mdl-26979837

RESUMO

RNA localization is an important event that is essential for the polarization and differentiation of a cell. Although several methods are currently used to detect localized RNAs, a simplified detection system has not yet been developed for Schizosaccharomyces pombe. In the present study, we describe a new vector system for the visualization of localized RNAs in S. pombe using a U1A-tag-GFP system. A pREP1-U1A-tag vector plasmid to express U1A-tagged RNA and a pREP2-U1AGFP plasmid to produce a U1A-GFP fusion protein were constructed for this system. Since the U1A-GFP protein binds U1A-tagged RNA, fluorescence is observed at the location of U1A-tagged RNA in cells expressing both of these. The nucleolar localization of U3 snoRNA was successfully detected using this system, and a novel RNA localized at the DNA region of the nucleus was found by screening localized RNAs. This system will accelerate the study of localized RNAs in S. pombe.


Assuntos
Núcleo Celular/genética , Regulação Fúngica da Expressão Gênica , Vetores Genéticos/metabolismo , RNA Fúngico/genética , RNA Nucleolar Pequeno/genética , Schizosaccharomyces/genética , Núcleo Celular/metabolismo , Núcleo Celular/ultraestrutura , Expressão Gênica , Genes Reporter , Vetores Genéticos/química , Proteínas de Fluorescência Verde/genética , Proteínas de Fluorescência Verde/metabolismo , Imagem Óptica , RNA Fúngico/metabolismo , RNA Nucleolar Pequeno/metabolismo , Proteínas Recombinantes de Fusão/genética , Proteínas Recombinantes de Fusão/metabolismo , Ribonucleoproteína Nuclear Pequena U1/genética , Ribonucleoproteína Nuclear Pequena U1/metabolismo , Schizosaccharomyces/metabolismo , Schizosaccharomyces/ultraestrutura
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