Radiolabelled DOTA-TATE: its evaluation for targeted radiotherapy

La marcación de péptido análogo de somatostatina DOTA-TATE (DOTA-D-phe-cys-tyr-D-trp-lys-thr-cys-thr) con 125I y sus propiedades biológicas fueron investigadas. 125I-DOTA-TATE se marco por el método de cloramina-T y se purificó por RP-HPLC a fin de aumentar su actividad especifica. La estabilidad fue evaluada por HPLC, cromatografía y electroforesis. La interacción del péptido marcado con receptores de somatostatina fue investigada usando membranas obtenidas de tejidos o de células AR42J, y por unión e internalización en cultivos celulares. El rendimiento de marcado fue mayor de 90 por ciento, el perfil de HPLC reveló dos especies radioquímicas con tiempos de retención diferentes respecto del péptido no marcado, permitiendo la obtención de una mayor actividad especifica. La máxima capacidad de unión fue de 23 por ciento y la concentración inhibitoria 50 ppor ciento fue 9 µg/mL. Se internalizó el 73 por ciento de la actividad unida en 3-4 horas. El radioconjugado presenta la capacidad de unirse específicamente a los receptores de somatostatina expresados en células tumorales viables así como en preparaciones de membranas obtenidas de tejidos animales.

Labeling and quality control of 188Re-lanreotide.

Lanreotide was labelled with 188Re obtained from 188W/188Re generator, using stannous ion as reducing agent, ascorbic acid as stabilizers and hydroxy ethylidene bisphosphonate (HEDP) as intermediary ligand at different molar ratios, pH and incubation times. Best yields (>95%) were obtained using molar ratios SnF2/lanreotide, ascorbic/lanreotide and HEDP/lanreotide of 40, 12 and 260, respectively, pH 1-2 with an incubation at 100 degrees C for 30 min. Quality control evaluation and stability of the radiolabel compound was done by the following selected methods: chromatography in Whatman 3 MM with MEK and NaCl 0.15 M as solvents, ITLC-SG with ethanol-HCl 0.01N (90:10); reverse phase extraction cartridge (Sep-pak C18, Waters Associated) and RP-HPLC with radiometric and UV detection (220 nm) using MCH-5 n-capp column with linear gradient from 90% H2O (TFA 0.1%): 10% ACN (TFA 0.1%) up to 10% H2O (TFA 0.1%):90% ACN (TFA 0.1%) in 30 min, at flow 1 ml/min. Biodistribution in normal mice showed that 188Re-lanreotide is excreted mainly through the hepatobiliary system: more than 70% I.D. is present in gallbladder and intestines at 2 hr post injection. The stability of the 188Re-peptide bond by cysteine challenge test at 37 degrees C, during 2 and 24 hr of incubation time, reveals that approximately 300 and 100 molar ratio cys/peptide is required to displace 50% of the 188Re from the complex. In vitro stability of 188Re-lanreotide at room temperature (Rt) was demonstrated during 24 hr Future works must be done in order to investigate its binding capacity to somatostatin receptors.