Evaluación de la capacidad de desarrollo in vitro de ovocitos bovinos provenientes de vacas con predominancia fenotípica Bos taurus y Bos indicus / Evaluation of in vitro development capacity of bovine oocytes obtained from predominantly Bos taurus and Bos indicus cows

El objetivo de este estudio fue evaluar la capacidad de desarrollo in vitro de ovocitos bovinos de vacas mestizas B. taurus y B. indicus. Los ovocitos fueron recuperados de ovarios de hembras bovinas provenientes de un matadero comercial. Para la obtención de los complejos cumulus-ovocitos (CCO) se realizó la técnica de slicing, seleccionando los ovocitos que tenían al menos una capa de células del cumulus y un citoplasma homogéneo. Los ovocitos seleccionados fueron madurados y fecundados in vitro (MIV-FIV). Se utilizó semen de un toro Brahman puro (B. indicus). Para la evaluación de la MIV y FIV todos los ovocitos se fijaron por al menos 24 h a 4°C en solución metanol-ácido acético (3:1) y teñidos con aceto-orceína al 1,1%. La tasa de maduración de ovocitos de vacas con predominancia fenotípica B. indicus fue del 66,17% mientras que las vacas con predominancia fenotípica B. taurus alcanzaron un 50,94% (P>0,05). En cuanto a la tasa de fecundación se obtuvo un 14,28 y 35,72% de ovocitos penetrados normalmente y anormales, respectivamente, para el grupo de ovocitos con predominancia fenotípica B. indicus. Mientras que para vacas con predominancia fenotípica B. taurus, un 10,22% correspondió a ovocitos penetrados normales y 19,31% de ovocitos penetrados anormales, sin encontrar diferencias estadísticamente significativas en ambos grupos. Los presentes resultados, tanto para la progresión meiótica como para las tasas de fecundación, indican que los ovocitos de vacas mestizas con predominancia fenotípica B. indicus son más competentes en las primeras etapas de desarrollo in vitro que los ovocitos de vacas mestizas con predominancia fenotípica B. taurus.

The aim of this study was to evaluate the in vitro development capacity of bovine oocytes from crossbred B. taurus and B. indicus cows. Oocytes from bovine cows were collected from commercial slaughterhouse. The cumulus-oocyte complex (COC) ovaries were obtained by Slicing technique, selecting those oocytes that had 2 to 3 layers of cumulus cells and homogeneous cytoplasm. After selection oocytes proceed with maturation (IVM) and fertilization in vitro (IVF). It used semen from a pure Brahman bull (B. indicus). For the assessment of IVM as for IVF oocytes were fixed for about 24 hours at 4°C in methanol-acetic acid (3:1) solution and stained with 1.1% aceto-orcein. The maturation rate of oocytes from cows with B. indicus phenotypic predominance was 66.17%, whereas cows with B. taurus phenotypic predominance 50.94% (P>0.05). Fertilization rate obtained in B. indicus phenotypic predominance group was 14.28% of oocytes normal penetrated and abnormal penetrated 35.72%, for cows with a phenotypic predominance B. taurus oocytes normal penetrated were 10.22% and 19.31% of abnormal oocytes penetrated. In conclusion, the present results indicate that oocytes from cows with phenotypic predominance B. indicus are more competent in the early stages of development in vitro than oocytes from cows with phenotypic predominance B. taurus.

Estudio estructural del huso meiótico de ovocitos bovinos vitrificados / Structural study of meiotic spindle of vitrified bovine oocytes

La verificación de ovocitos bovinos se ha venido utilizando como uno de los protocolos de criopreservación más prometedores. Se ha expresado el temor por los efectos que puede causar la utilización de aditivos crioprotectores sobre la integridad estructural de los ovocitos. En este trabajo, los experimentos fueron conducidos para evaluar e efecto de vitrificación sobre la estructura del huso meiótio y la capacidad de desarrollo de ovocitos bovinos. Para ello, ovocitos acabados de loberar de sus folículos y madurados in vitro fueron expuestos a temperatura ambiente a las soluciones vitrificadoras (etilendlicol y sacarosa), también fueron vitrificados ovocitos inmaduros y madurados in vitro. Los ovocitos fueron teñidos in toto, para evaluar la maduración nuclear y a través de la tinción inmunocitoquímica fueron estudiadas las alteraciones estructurales del huso mieótico. Los ovocitos en estadio de VG, son más sensibles al efecto tóxico causado por los agentes crioprotectores a temperatura ambiente y al proceso de criopreservación, valorados mediante la progresión meiótica y el análisis inmunocitoquímico del huso meiótico. La anomalía más frecuentemente observada fue la ausencia del huso meiótico. La estructura del huso meiótico de ovocitos vitrificados MIV, es más resistentes al daño crioinducido, que los ovocitos vitrificados en estadio de VG. Se recomienda la vitrificación de ovocitos bovinos madurados in vitro.

Bovine oocytes vitrification has been used as one of the most promising cryopreservation protocols. Fear of the effects of cryoprotectant additives on the oocytes structural integrity have been posed. In this study, trials were conducted to evaluate the effects of vitrification over meiotic spindle structure and development capability in bovine oocytes. Based in this evidence, oocytes recently released from their follicles and in vitro matured were exposed at room temperature to vitrifying solutions (ethylenglicol and sucrose), also immature and in vitro matured oocytes were vitrified. Oocytes were stained in toto to assess nuclear maturation stage and meiotic spindle structural alterations were studied by immunocytochemistry. Oocytes at GV stage are more sensitive to the toxic effects caused by cryoprotectant agents at room temperature and to the cryopreservation procedure, assessed through meiotic progression and immunocytochemical analysis of meiotic spindle. The most frequently encountered anomaly was absence of meiotic spindle. Meiotic spindle structure in vitrified and IVM oocytes endure better the cryoinduced injuries compared with oocytes vitrified the GV stage. It is recommend the vitrification of in vitro matured bovine oocytes.

Efecto de la exposición al cloruro de cadmio sobre la maduración in vitro de ovocitos bovinos / Effects of cadmium chloride exposure on in vitro maduration of bovine oocytes

Se estudió el efecto del cadmio sobre la maduración invitro de ovovitos bovinos. Ovocitos recuperados a partir de ovarios bovinos recolectados en mataderos y liberados mediante la técnica de slicing fueron madurados en TCM199 durante 24 h a 38,5°C en un atmósfera con 5% de Dioxido de carbono en aire saturado de humedad, en presencia de 0, 1, 5 y 10 ppm de cloruro de cadmio. Al finalizar el cultivo, los ovocitos fueron fijados en etanol: ácido acético (3/1 v/v) a 4°C durante al menos 24 h para luego teñirlos con aceto-orceína al 1,1 por ciento, para evaluar el estadio nuclear bajo microscopio óptico. El ANOVA demostró que el cadmio causa un bloqueo meiótico significativo (f= 150,996; p<0,01) e induce degeneración ovocitaria (F= 89,92; P<0,01) de manera dependiente de la concentración. El porcentaje de ovocitos que alcanzaron el estadio de MII fue superior en el grupo control (P<0,01) en comparación con los expuestos al metal a las diferentes concentraciones estudiadas. Se establece una correlación inversa altamente significativa entre el porcentaje de ovocitos madurados y la concentración del metal en el medio (r= 0,818; p<0,01), mientras que el porcentaje de ovocitos degenerados muestra una correlación directa altamente significativa (r= 0,842; P<0,01). Además se apreciaron aberraciones cromosómicas tales como: picnosis, stekinesisy puentes anafásicos. Se demostró el efecto deletéreo del cadmio sobre los ovocitos bovinos, reflejado en un bloqueo de la maduración in vitro, la inducción de degeneración y aberraciones cromosómicas.