RESUMO
Oligomers possessing the Morpholino phosphorodiamidate backbone were evaluated for resistance to a variety of enzymes and biologic fluids. A 25-mer was incubated with nucleases, proteases, esterases, and serum, and the reaction mixtures were directly analyzed by MALDI-TOF mass spectrometry. The 25-mer was completely resistant to 13 different hydrolases and serum and plasma. The excellent resistance of Morpholino phosphorodiamidates to enzymatic attack indicates their suitability for in vivo use.
Assuntos
Fenômenos Fisiológicos Sanguíneos , Hidrolases/química , Morfolinas/química , Organofosfatos/química , Plasma/fisiologia , Desoxirribonucleases/química , Estabilidade de Medicamentos , Endopeptidases/química , Esterases/química , Espectrometria de Massas , Estrutura Molecular , Ribonucleases/químicaRESUMO
The ribosomes of Entamoeba invadens trophozoites have sedimentation coefficients of 77, 53 and 36 S. Most of the ribosomal proteins are basic and their one- and two-dimensional electrophoretic patterns differ from the corresponding patterns of Escherichia coli and Saccharomyces cerevisiae. Two dozen bands were observed in the 10 000 to 100 000 molecular weight range following sodium dodecylsulfate-gel electrophoresis of amoebal ribosomal proteins. Long, thin pronase-sensitive structures were seen in electron micrographs of E. invadens ribosomal preparations.
Assuntos
Entamoeba/ultraestrutura , Ribossomos/ultraestrutura , Animais , Proteínas de Bactérias/metabolismo , Eletroforese em Gel de Poliacrilamida , Escherichia coli/metabolismo , Proteínas/metabolismo , Saccharomyces cerevisiae/metabolismoRESUMO
Two bands of RNAase activity were observed on gel electrophoresis of fractions obtained during partial purification of the RNAase of Entamoeba invadens. The faster migrating band which was responsible for most of the RNAase activity was isolated by gel electrophoresis. A pI of 5.5 was determined for this RNAase activity and estimates of its molecular weight and sedimentation coefficient gave values of about 25 000 and approximately 2.8 S. It exhibited maximum activity around pH 6, and digestion of RNA showed a pattern expected of an endoribonuclease.
Assuntos
Entamoeba/enzimologia , Ribonucleases/metabolismo , Animais , Cátions Bivalentes/farmacologia , Centrifugação com Gradiente de Concentração , Temperatura Alta , Concentração de Íons de Hidrogênio , Ponto Isoelétrico , Peso Molecular , Polirribonucleotídeos/metabolismo , RNA/metabolismo , Ribonucleases/isolamento & purificação , Especificidade por SubstratoRESUMO
The behavior of an RNAase, present in centrifugally clarified homogenates of axenic trophozoites of Entamoeba invadens, on isoelectric focusing (IEF) and agarose-poly(G) chromatography is described. The results led to a simple two-step procedure for partial purification of the RNAase in which fractionation of the homogenate by IEF is followed by agarose-poly(G) chromatography. Recovery of enzyme activity has ranged from 50 to 80% of that present in homogenates, and increases of 80- to 160-fold in the specific activity have been obtained using the procedure. A single zone of activity was observed on analysis of the partially purified RNAase by sucrose gradient IEF and velocity zonal ultracentrifugation.
Assuntos
Entamoeba/enzimologia , Ribonucleases/isolamento & purificação , Animais , Centrifugação com Gradiente de Concentração , Centrifugação Zonal , Cromatografia em Agarose , Focalização Isoelétrica , MétodosAssuntos
Proteínas de Bactérias/análise , L-Lactato Desidrogenase/análise , Acrilamidas , Animais , Isótopos de Carbono , Centrifugação com Gradiente de Concentração , Eletroforese em Gel de Poliacrilamida , Escherichia coli/análise , Escherichia coli/citologia , Géis , Humanos , Concentração de Íons de Hidrogênio , Focalização Isoelétrica , Métodos , Músculos/enzimologia , Ribossomos/análise , Especificidade da Espécie , Espectrofotometria Ultravioleta , UreiaAssuntos
Silicatos de Alumínio , Proteínas de Bactérias , Nucleoproteínas , Ribossomos , Adsorção , Ágar , Proteínas de Bactérias/análise , Fenômenos Químicos , Química , Cromatografia , Cromatografia em Gel , Escherichia coli/citologia , Filtração , Lisina , Magnésio , Métodos , Nucleoproteínas/análise , Concentração Osmolar , Fenilalanina , Polinucleotídeos , RNA Bacteriano/análise , RNA Bacteriano/isolamento & purificação , RNA Ribossômico/isolamento & purificação , RNA de Transferência/isolamento & purificação , UltracentrifugaçãoAssuntos
Proteínas de Neoplasias/isolamento & purificação , Animais , Líquido Ascítico/análise , Líquido Ascítico/citologia , Proteínas Sanguíneas/isolamento & purificação , Cricetinae , Técnicas de Cultura , Eletroforese Descontínua , Feminino , Concentração de Íons de Hidrogênio , Focalização IsoelétricaAssuntos
Proteínas de Bactérias/análise , Eletroforese , Escherichia coli/análise , Ribossomos/análise , Acrilatos , Cloreto de Amônio , Proteínas de Bactérias/biossíntese , Proteínas de Bactérias/isolamento & purificação , Isótopos de Carbono , Centrifugação , Fenômenos Químicos , Química , Cromatografia DEAE-Celulose , Escherichia coli/citologia , Escherichia coli/metabolismo , Frutose/metabolismo , Géis , Concentração de Íons de Hidrogênio , Focalização Isoelétrica , Métodos , RNA Bacteriano/análise , Solubilidade , Análise Espectral , Raios UltravioletaAssuntos
Citratos , Concentração de Íons de Hidrogênio , L-Lactato Desidrogenase , Liases , Animais , Cricetinae , Métodos , Músculos/enzimologia , NeurosporaAssuntos
RNA/análise , Ribossomos/análise , Tetrahymena/análise , Aminas/análise , Animais , Centrifugação com Gradiente de Concentração , Eletroforese Descontínua , Peso Molecular , Nucleoproteínas/análise , Fósforo/análise , Espermina/análise , Tetrahymena/crescimento & desenvolvimento , ViscosidadeAssuntos
Entamoeba/citologia , Entamoeba/metabolismo , Ribossomos/metabolismo , Animais , Desoxirribonucleases/metabolismo , Entamoeba/ultraestrutura , Glicogênio/metabolismo , Ribossomos/ultraestrutura , Espectrofotometria Ultravioleta , Trofozoítos/citologia , Trofozoítos/ultraestrutura , UltracentrifugaçãoRESUMO
A reproducible method for the preparation of 75S ribosomes from cysts of Entamoeba invadens is presented. The method depends on the inactivation of the cyst's ribonuclease by high levels of Bentonite. The ribosomes are found to be extremely sensitive to ribonuclease, and to be stabilized by the addition of manganous and calcium ions to the magnesium customarily employed. Reasons are given for equating these ribosomes with the particles of which the crystalline chromatoid bodies are made.