Relationship of semen quality to inbreeding and gait of Colombian Creole horses / Relação da qualidade do sêmen com endogamia e marcha de cavalos crioulos colombianos

ABSTRACT: High consanguinity among equines has negative effects on semen quality, thus resulting in low motility and high levels of abnormality in the spermatozoa. However, such a relationship has not been studied in Colombian Creole horses, which have been subjected to particular selection practices focusing mainly on their gait. This research assessed the relationship of semen quality to inbreeding and gait of Colombian Creole horses. Semen was collected from 50 horses using the artificial vagina method. Sperm motility and kinematics were assessed with a computerized analysis system (SCA®). Sperm vitality (SV) and abnormal morphology (AM) were assessed via the eosin-nigrosin staining test. Functional membrane integrity (FMI) was assessed via the hypo-osmotic swelling test (HOST). Genealogies and consanguinity analysis was conducted using the Breeders Assistant for Horses program. An average of 3.6 ± 0.4 % was reported for the inbreeding coefficient (Ft). A decrease in sperm motility and kinematics was reported, which was associated with an increase in consanguinity (P < 0.05). Furthermore, differences in consanguinity were found based on gait. Similarly, a relationship between horse gait and semen quality (P < 0.05) was found. Authors concluded that semen quality of Colombian Creole horses has been affected by inbreeding and its relationship with genetic selection based on gait.

RESUMO: A alta consanguinidade entre equinos tem efeitos negativos na qualidade do sêmen, resultando em baixa motilidade e altos níveis de anormalidade nos espermatozóides. No entanto, tal relação não foi estudada em cavalos crioulos colombianos, que tem sido submetidos a práticas de seleção específicas com foco principalmente em sua marcha. O objetivo desta pesquisa foi avaliar o relação da qualidade do sêmen com endogamia e marcha de cavalos crioulos colombianos. O sêmen foi coletado de 50 cavalos pelo método da vagina artificial. A motilidade e a cinética dos espermatozoides foram avaliadas com um sistema de análise computadorizado (SCA®). A vitalidade do esperma (VE) e a morfologia anormal (MA) foram avaliadas por meio do teste de coloração com eosina-nigrosina. A integridade funcional da membrana (IFM) foi avaliada por meio do test hipo-osmótico (HOST). A análise de genealogias e consanguinidade foi conduzida usando o programa Breeders Assistant for Horses. Uma média de 3,6 ± 0,4% foi encontrada para o coeficiente de endogamia (Ft). Uma diminuição na motilidade e cinética dos espermatozoides, que foi associada a um aumento na consanguinidade (P < 0,05). Além disso, diferenças na consanguinidade foram encontradas com base na marcha. Da mesma forma, foi encontrada uma relação entre a marcha do cavalo e a qualidade do sêmen (P < 0,05). Os autores concluíram que a qualidade do sêmen de cavalos crioulos colombianos foi afetada pela endogamia e sua relação com a seleção genética baseada na marcha.

Relationship of semen quality to inbreeding and gait of Colombian Creole horses / Relação da qualidade do sêmen com endogamia e marcha de cavalos crioulos colombianos

High consanguinity among equines has negative effects on semen quality, thus resulting in low motility and high levels of abnormality in the spermatozoa. However, such a relationship has not been studied in Colombian Creole horses, which have been subjected to particular selection practices focusing mainly on their gait. This research assessed the relationship of semen quality to inbreeding and gait of Colombian Creole horses. Semen was collected from 50 horses using the artificial vagina method. Sperm motility and kinematics were assessed with a computerized analysis system (SCA®). Sperm vitality (SV) and abnormal morphology (AM) were assessed via the eosin-nigrosin staining test. Functional membrane integrity (FMI) was assessed via the hypo-osmotic swelling test (HOST). Genealogies and consanguinity analysis was conducted using the Breeders Assistant for Horses program. An average of 3.6 ± 0.4 % was reported for the inbreeding coefficient (Ft). A decrease in sperm motility and kinematics was reported, which was associated with an increase in consanguinity (P < 0.05). Furthermore, differences in consanguinity were found based on gait. Similarly, a relationship between horse gait and semen quality (P < 0.05) was found. Authors concluded that semen quality of Colombian Creole horses has been affected by inbreeding and its relationship with genetic selection based on gait.

A alta consanguinidade entre equinos tem efeitos negativos na qualidade do sêmen, resultando em baixa motilidade e altos níveis de anormalidade nos espermatozóides. No entanto, tal relação não foi estudada em cavalos crioulos colombianos, que tem sido submetidos a práticas de seleção específicas com foco principalmente em sua marcha. O objetivo desta pesquisa foi avaliar o relação da qualidade do sêmen com endogamia e marcha de cavalos crioulos colombianos. O sêmen foi coletado de 50 cavalos pelo método da vagina artificial. A motilidade e a cinética dos espermatozoides foram avaliadas com um sistema de análise computadorizado (SCA®). A vitalidade do esperma (VE) e a morfologia anormal (MA) foram avaliadas por meio do teste de coloração com eosina-nigrosina. A integridade funcional da membrana (IFM) foi avaliada por meio do test hipo-osmótico (HOST). A análise de genealogias e consanguinidade foi conduzida usando o programa Breeders Assistant for Horses. Uma média de 3,6 ± 0,4% foi encontrada para o coeficiente de endogamia (Ft). Uma diminuição na motilidade e cinética dos espermatozoides, que foi associada a um aumento na consanguinidade (P < 0,05). Além disso, diferenças na consanguinidade foram encontradas com base na marcha. Da mesma forma, foi encontrada uma relação entre a marcha do cavalo e a qualidade do sêmen (P < 0,05). Os autores concluíram que a qualidade do sêmen de cavalos crioulos colombianos foi afetada pela endogamia e sua relação com a seleção genética baseada na marcha.

Equine semen cooled with chemically defined extender containing soy lecithin / Sêmen equino refrigerado com diluidor quimicamente definido contendo lecitina de soja

Equine semen has historically been chilled using milk-based media. However, the use of animal-based components presents several potential concerns, such as variability in formulations, microbial contamination and regulatory issues. We aimed to evaluate the potential of including different concentrations of soy lecithin (LS) in chemically defined Biggers, Whitten and Whittingham (BWW) medium for cooling equine semen to 15°C. Ejaculates were diluted as six different experimental groups: 1) BotuSêmen® (control); 2) BWW; 3) BWW + 1% LS; 4) BWW + 2% LS; 5) BWW + 4% LS and 6) BWW + 6% LS. BWW medium, did not preserve motility, velocity, straightness (STR), linearity (LIN), amplitude of lateral sperm head displacement (ALH), cross flagellar beat frequency (BCF), functional and structural integrity of equine spermatozoa during 24 h of refrigeration when compared to BotuSêmen® (P <0.05). The use of BWW for cooling equine semen was only possible with the addition of LS, being the concentrations equal or higher than 2% better, because they preserved total motility, curvilinear velocity (VCL) and LIN with the same potential of BotuSêmen® (P >0.05). Nevertheless, BotuSêmen® showed superiority in preserving the percentage of sperm progressive motility, average path velocity (VAP), linear progressive velocity (VSL) and BCF during cooling compared to the other extenders (P <0.05). The inclusion of soy lecithin, from 2 to 6% in the BWW medium, allowed maintaining the viability of equine semen cooled at 15ºC for up to 24 hours.

O sêmen equino tem sido historicamente refrigerado usando meios à base de leite. No entanto, o uso de componentes de origem animal causa várias preocupações potenciais, como variabilidade nas formulações, contaminação microbiana e questões regulatórias. Objetivou-se avaliar o potencial de inclusão de diferentes concentrações de lecitina de soja (LS) no meio quimicamente definido BWW - Biggers, Whitten e Whittingham para refrigeração de sêmen equino e armazenamento na temperatura de 15°C. Os ejaculados foram diluídos em seis diferentes grupos experimentais: 1) BotuSêmen® (controle); 2) BWW; 3) BWW + 1% lecitina de soja (LS); 4) BWW + 2% LS; 5) BWW + 4% LS e 6) BWW + 6% LS. O meio BWW, não preservou a motilidade, a velocidade, a retilinearidade (STR), a linearidade (LIN), a amplitude do deslocamento lateral da cabeça (ALH), a frequência de batimento flagelar cruzado (BCF), a integridade funcional e estrutural dos espermatozoides equino durante 24 h de refrigeração quando comparado ao BotuSêmen® (P <0,05). O uso de BWW para refrigeração de sêmen equino só foi possível com adição de lecitina de soja, sendo as concentrações igual ou superior a 2% melhores, pois preservaram a motilidade total, a velocidade curvilinear (VCL) e LIN com mesmo potencial do BotuSêmen® (P >0,05). Ainda assim, o diluidor comercial BotuSêmen® apresentou superioridade em preservar o percentual de espermatozoides progressivamente móveis, a velocidade média da trajetória (VAP), a velocidade linear progressiva (VSL) e a frequência do batimento flagelar cruzado (BCF) durante a refrigeração comparado aos demais diluidores (P <0,05). A inclusão de lecitina de soja, de 2 a 6% no meio BWW, permitiu a manutenção da viabilidade do sêmen equino refrigerado a 15ºC por até 24 horas.

Padronização do Sperm Class Analyzer® (SCA®) para avaliação de espermatozoides equinos criopreservados / [Standardization of the Sperm Class Analyzer® (SCA®) for the evaluation of cryopreserved equine sperm]

Objetivou-se, no primeiro experimento, avaliar o efeito da velocidade de captura de imagens de 25Hz, 30Hz e 50Hz na cinética dos espermatozoides equinos criopreservados. Todas as velocidades mostraram-se adequadas para capturar o movimento espermático (P>0,05). No segundo experimento, objetivou-se avaliar o efeito da deposição de sêmen em lâmina sob lamínula, Leja®10 e 20, na cinética espermática. O uso de lâmina e lamínula foi superior às lejas para manter a LIN e o WOB (P<0,05). No terceiro experimento, objetivou-se avaliar o efeito das concentrações de 25, 50 e 100x106 na cinética espermática. As concentrações de 25 e 50 x106 foram superiores a 100x106 para preservar a LIN, a STR e a BCF e não afetar negativamente a motilidade (P<0,05). No quarto experimento, objetivou-se avaliar o efeito dos diluidores BotuCrio®, BotuSêmen®, TALP sperm e da solução fisiológica na cinética espermática. O BotuCrio® foi superior a todos os diluidores em preservar a BCF e os hiperativos (P<0,05). Conclui-se que o emprego da velocidade de captura entre 25 e 50Hz, a deposição do sêmen entre lâmina e lamínula e a rediluição em diluidor de congelação para atingir 25 a 50x106 de espermatozoides/mL são ideais para o SCA® avaliar, de forma fidedigna, o sêmen equino criopreservado.(AU)

The objective of the first experiment was to evaluate the effect of 25, 30 and 50Hz frame acquisition rate on equine cryopreserved sperm. All frame acquisition rates tested were adequate to capture the sperm movement (P>0.05). The aim of the second experiment was to evaluate the effect of chambers, slide-coverslip, Leja®10 and 20 on sperm movement. The use of slide-coverslip was superior to maintain LIN and WOB (P<0.05). The aim of the third experiment was to evaluate the effect of 25, 50 and 100x106 sperm/mL concentration on sperm movement. Concentrations of 25 and 50x106 sperm/mL were greater than 100x106 to preserve LIN, STR and BCF and did not adversely affect motility (P<0.05). The aim of the fourth experiment was to evaluate the effect of BotuCrio®, BotuSêmen®, TALP sperm and physiological solution on sperm movement. BotuCrio® was superior among other extenders in preserving BCF and hyperactive (P<0.05). It is concluded that the use of the frame acquisition rate between 25 and 50 Hz; the deposition of semen between slide and coverslip and new dilution in the freezing extender to 25-50x106 of sperm/mL is ideal to reliably evaluate cryopreserved equine semen by SCA®.(AU)

Padronização do Sperm Class Analyzer® (SCA®) para avaliação de espermatozoides equinos criopreservados / [Standardization of the Sperm Class Analyzer® (SCA®) for the evaluation of cryopreserved equine sperm]

Objetivou-se, no primeiro experimento, avaliar o efeito da velocidade de captura de imagens de 25Hz, 30Hz e 50Hz na cinética dos espermatozoides equinos criopreservados. Todas as velocidades mostraram-se adequadas para capturar o movimento espermático (P>0,05). No segundo experimento, objetivou-se avaliar o efeito da deposição de sêmen em lâmina sob lamínula, Leja®10 e 20, na cinética espermática. O uso de lâmina e lamínula foi superior às lejas para manter a LIN e o WOB (P<0,05). No terceiro experimento, objetivou-se avaliar o efeito das concentrações de 25, 50 e 100x106 na cinética espermática. As concentrações de 25 e 50 x106 foram superiores a 100x106 para preservar a LIN, a STR e a BCF e não afetar negativamente a motilidade (P<0,05). No quarto experimento, objetivou-se avaliar o efeito dos diluidores BotuCrio®, BotuSêmen®, TALP sperm e da solução fisiológica na cinética espermática. O BotuCrio® foi superior a todos os diluidores em preservar a BCF e os hiperativos (P<0,05). Conclui-se que o emprego da velocidade de captura entre 25 e 50Hz, a deposição do sêmen entre lâmina e lamínula e a rediluição em diluidor de congelação para atingir 25 a 50x106 de espermatozoides/mL são ideais para o SCA® avaliar, de forma fidedigna, o sêmen equino criopreservado.(AU)

The objective of the first experiment was to evaluate the effect of 25, 30 and 50Hz frame acquisition rate on equine cryopreserved sperm. All frame acquisition rates tested were adequate to capture the sperm movement (P>0.05). The aim of the second experiment was to evaluate the effect of chambers, slide-coverslip, Leja®10 and 20 on sperm movement. The use of slide-coverslip was superior to maintain LIN and WOB (P<0.05). The aim of the third experiment was to evaluate the effect of 25, 50 and 100x106 sperm/mL concentration on sperm movement. Concentrations of 25 and 50x106 sperm/mL were greater than 100x106 to preserve LIN, STR and BCF and did not adversely affect motility (P<0.05). The aim of the fourth experiment was to evaluate the effect of BotuCrio®, BotuSêmen®, TALP sperm and physiological solution on sperm movement. BotuCrio® was superior among other extenders in preserving BCF and hyperactive (P<0.05). It is concluded that the use of the frame acquisition rate between 25 and 50 Hz; the deposition of semen between slide and coverslip and new dilution in the freezing extender to 25-50x106 of sperm/mL is ideal to reliably evaluate cryopreserved equine semen by SCA®.(AU)

Utilização de leite com diferentes concentrações de gordura como diluentes para sêmen equino refrigerado / Use of milk with different fat concentrations as extenders for equine cooled semen

Dois experimentos foram realizados para verificar a viabilidade de diluentes para sêmen equino refrigerado. O objetivo do primeiro experimento foi verificar a eficiência do leite UHT integral e semidesnatado, comparado ao leite desnatado. Amostras foram analisadas a fresco e posteriormente diluídas em leite UHT integral, semidesnatado e desnatado. Foram realizados exames de motilidade espermática e vigor, CFDA/PI e HOST pós-diluição (0h), e no sêmen refrigerado a 5 ºC após 24 e 48 horas. Não houve diferença entre os três diluentes, quanto à motilidade espermática (p=0,9880), vigor (p=0,7249), CFDA/PI (p=0,3382) e HOST (p > 0,01). Houve uma diminuição na qualidade do sêmen, no decorrer do tempo (p < 0,01), independente do diluente utilizado. Pode-se afirmar que, na falta de leite UHT desnatado, o semidesnatado e o integral podem ser usados, uma vez que eles não provocam prejuízo na qualidade do sêmen refrigerado armazenado por até 48 horas. No segundo experimento, o objetivo foi verificar a eficácia do leite desnatado em comparação com diluentes comerciais (Botusemen® (BS) e Botusemen Special® (BSS)). Logo após a coleta do sêmen, as amostras foram diluídas com leite UHT desnatado (LD), Botusemen® (BS) e Botusemen Special®(BSS). A análise de sêmen seguiu o mesmo protocolo do primeiro experimento. As amostras de sêmen refrigeradas com BSS apresentaram HOST e CFDA/PI (p< 0,001) maiores nas 24h e 48 h o que indica que o diluente BSS promove aumento da longevidade dos espermatozoides em comparação com os outros analisados.

Two trials were performed to verify the viability of extenders equine cooled semen. The objective of the first trial was to verify the efficacy of whole and semi-skimmed UHT milk compared to skim milk. Fresh semen samples were analyzed and later diluted in UHT whole milk, semi skimmed and skimmed milk. Sperm motility and vigor, CFDA / PI and HOST tests were performed post-dilution (0h), and in semen cooled at 5oC after 24 and 48h. There was no difference between the 3 extenders, for sperm motility (p = 0.9880), vigor (p = 0.7249), CFDA / PI (p = 0.3882) and HOST (p> 0.01). There was a decrease in semen quality over time (p <0.01), regardless of the extender used. It can be stated that in the absence of skimmed UHT milk, semi-skimmed and whole milk can be used since they do not impair the quality of refrigerated semen stored for up to 48 hours. In the second trial the objective was to verify the efficacy of the skim milk compared to commercial extenders (Botusemen® (BS) and Botusemen Special® (BSS)). Soon after semen collection, the samples were diluted with UHT skim milk (LD), Botusemen® (BS) and Botusemen Special® (BSS). Semen analysis followed the same protocol as the first experiment. BSS-cooled semen showed higher HOST and CFDA / PI (p <0.001) in 24h and 48h indicating that BSS diluent promotes increased sperm longevity compared to the others analyzed.

Utilização de leite com diferentes concentrações de gordura como diluentes para sêmen equino refrigerado / Use of milk with different fat concentrations as extenders for equine cooled semen

Dois experimentos foram realizados para verificar a viabilidade de diluentes para sêmen equino refrigerado. O objetivo do primeiro experimento foi verificar a eficiência do leite UHT integral e semidesnatado, comparado ao leite desnatado. Amostras foram analisadas a fresco e posteriormente diluídas em leite UHT integral, semidesnatado e desnatado. Foram realizados exames de motilidade espermática e vigor, CFDA/PI e HOST pós-diluição (0h), e no sêmen refrigerado a 5 ºC após 24 e 48 horas. Não houve diferença entre os três diluentes, quanto à motilidade espermática (p=0,9880), vigor (p=0,7249), CFDA/PI (p=0,3382) e HOST (p > 0,01). Houve uma diminuição na qualidade do sêmen, no decorrer do tempo (p < 0,01), independente do diluente utilizado. Pode-se afirmar que, na falta de leite UHT desnatado, o semidesnatado e o integral podem ser usados, uma vez que eles não provocam prejuízo na qualidade do sêmen refrigerado armazenado por até 48 horas. No segundo experimento, o objetivo foi verificar a eficácia do leite desnatado em comparação com diluentes comerciais (Botusemen® (BS) e Botusemen Special® (BSS)). Logo após a coleta do sêmen, as amostras foram diluídas com leite UHT desnatado (LD), Botusemen® (BS) e Botusemen Special®(BSS). A análise de sêmen seguiu o mesmo protocolo do primeiro experimento. As amostras de sêmen refrigeradas com BSS apresentaram HOST e CFDA/PI (p< 0,001) maiores nas 24h e 48 h o que indica que o diluente BSS promove aumento da longevidade dos espermatozoides em comparação com os outros analisados.(AU)

Two trials were performed to verify the viability of extenders equine cooled semen. The objective of the first trial was to verify the efficacy of whole and semi-skimmed UHT milk compared to skim milk. Fresh semen samples were analyzed and later diluted in UHT whole milk, semi skimmed and skimmed milk. Sperm motility and vigor, CFDA / PI and HOST tests were performed post-dilution (0h), and in semen cooled at 5oC after 24 and 48h. There was no difference between the 3 extenders, for sperm motility (p = 0.9880), vigor (p = 0.7249), CFDA / PI (p = 0.3882) and HOST (p> 0.01). There was a decrease in semen quality over time (p <0.01), regardless of the extender used. It can be stated that in the absence of skimmed UHT milk, semi-skimmed and whole milk can be used since they do not impair the quality of refrigerated semen stored for up to 48 hours. In the second trial the objective was to verify the efficacy of the skim milk compared to commercial extenders (Botusemen® (BS) and Botusemen Special® (BSS)). Soon after semen collection, the samples were diluted with UHT skim milk (LD), Botusemen® (BS) and Botusemen Special® (BSS). Semen analysis followed the same protocol as the first experiment. BSS-cooled semen showed higher HOST and CFDA / PI (p <0.001) in 24h and 48h indicating that BSS diluent promotes increased sperm longevity compared to the others analyzed.(AU)

Effects of the addition of docosahexaenoic acid and a-tocopherol on quality of equine spermatozoa stored at 5ºC / Efeitos da adição de ácido docosahexaenoico e a-tocoferol na qualidade do espermatozoide equino armazenados a 5ºC

Plasma membrane composition has impact on phase transition from liquid crystal to gel state of cooled sperm cell. The incorporation of polyunsaturated fatty acids increases its fluidity and can contribute to sperm motility. The aim of this study was to compare the effect of adding docosahexaenoic acid (DHA) and α-tocopherol (α-Toh) to the cooling extender, singly or combined, to the equine sperm parameters, submitted to cooling, up to 72 hours. Two ejaculates of ten stallions collected with artificial vagina were used, and evaluated for motility, plasma membrane integrity, chromatin fragmentation, mitochondrial activity and lipid peroxidation, according to the following treatments: C; DHA; α-Toh; DHA/α-Toh; EtOH 100: and EtOH 140 (corresponding to control; 10 ng mL-1 of DHA; 2 mM of α-Toh; : 10 ng mL-1 of DHA + 2 mM of α-Toh; 100 µL of ethanol and 140 µL of ethanol respectively). DHA treatment showed higher motility (68.2 ± 12.3; p < 0.05) when compared to control (62.1 ± 16.2), DHA/α-Toh (61.3 ± 12.7) and EtOH (58.1 ± 8.6) groups. In lipid peroxidation assay, the control group showed 2,506.2 ± 796.4 ng of MDA 108 spermatozoa-1, being significantly higher (p < 0.05) than the groups treated with DHA (2,036.0 ± 687.0), α-Toh (1,890.8 ± 749.5) and DHA/α-Toh (1,821.1 ± 627.2). In conclusion, α-Toh was effective in diminishing lipid peroxidation of equine sperm subjected to cooling, and DHA improved sperm motility and, in spite of being a polyunsaturated fatty acid with high susceptibility to peroxidation, reduced lipid peroxidation.

A composição da membrana plasmática tem impacto na transição de fase do estado cristal líquido para o estado gel das células espermáticas submetidas à refrigeração. A incorporação de ácidos graxos poliinsaturados aumenta sua fluidez e pode contribuir para a motilidade espermática. O objetivo deste estudo foi comparar o efeito da adição de ácido docosahexaenóico (DHA) e α-tocoferol (α-Toh) ao diluidor de refrigeração, isoladamente ou combinado, aos parâmetros do sêmen equino, submetidos à refrigeração por até 72 horas. Foram utilizados dois ejaculados de dez garanhões coletados com vagina artificial e avaliados quanto à motilidade, integridade da membrana plasmática, fragmentação da cromatina, atividade mitocondrial e peroxidação lipídica, de acordo com os seguintes tratamentos: C; DHA; a-Toh; DHA / a-Toh; EtOH 100: e EtOH 140 (correspondentes ao controle; 10 ng mL-1 de DHA; 2 mM de α-Toh;: 10 ng mL-1 de DHA + 2 mM de α-Toh; 100 µL de etanol e 140 µL de etanol, respectivamente). O tratamento com DHA mostrou maior motilidade (68,2 ± 12,3; p < 0,05) quando comparado aos grupos controle (62,1 ± 16,2), DHA/α-Toh (61,3 ± 12,7) e EtOH (58,1 ± 8,6). Na análise de peroxidação lipídica, o grupo controle mostrou 2.506,2 ± 796,4 ng de MDA 108 espermatozoides-1, sendo significativamente maior (p < 0,05) do que os grupos tratados com DHA (2.036,0 ± 687,0), α-Toh (1.890,8 ± 749,5) e DHA / a-Toh (1.821,1 ± 627,2). Em conclusão, α-Toh foi eficaz na diminuição da peroxidação lipídica de espermatozoide equino submetido ao resfriamento, e o DHA melhorou a motilidade espermática e, apesar de ser um ácido graxo poliinsaturado com alta suscetibilidade à peroxidação, reduziu a peroxidação lipídica.

Effects of the addition of docosahexaenoic acid and a-tocopherol on quality of equine spermatozoa stored at 5ºC / Efeitos da adição de ácido docosahexaenoico e a-tocoferol na qualidade do espermatozoide equino armazenados a 5ºC

Plasma membrane composition has impact on phase transition from liquid crystal to gel state of cooled sperm cell. The incorporation of polyunsaturated fatty acids increases its fluidity and can contribute to sperm motility. The aim of this study was to compare the effect of adding docosahexaenoic acid (DHA) and α-tocopherol (α-Toh) to the cooling extender, singly or combined, to the equine sperm parameters, submitted to cooling, up to 72 hours. Two ejaculates of ten stallions collected with artificial vagina were used, and evaluated for motility, plasma membrane integrity, chromatin fragmentation, mitochondrial activity and lipid peroxidation, according to the following treatments: C; DHA; α-Toh; DHA/α-Toh; EtOH 100: and EtOH 140 (corresponding to control; 10 ng mL-1 of DHA; 2 mM of α-Toh; : 10 ng mL-1 of DHA + 2 mM of α-Toh; 100 µL of ethanol and 140 µL of ethanol respectively). DHA treatment showed higher motility (68.2 ± 12.3; p < 0.05) when compared to control (62.1 ± 16.2), DHA/α-Toh (61.3 ± 12.7) and EtOH (58.1 ± 8.6) groups. In lipid peroxidation assay, the control group showed 2,506.2 ± 796.4 ng of MDA 108 spermatozoa-1, being significantly higher (p < 0.05) than the groups treated with DHA (2,036.0 ± 687.0), α-Toh (1,890.8 ± 749.5) and DHA/α-Toh (1,821.1 ± 627.2). In conclusion, α-Toh was effective in diminishing lipid peroxidation of equine sperm subjected to cooling, and DHA improved sperm motility and, in spite of being a polyunsaturated fatty acid with high susceptibility to peroxidation, reduced lipid peroxidation.(AU)

A composição da membrana plasmática tem impacto na transição de fase do estado cristal líquido para o estado gel das células espermáticas submetidas à refrigeração. A incorporação de ácidos graxos poliinsaturados aumenta sua fluidez e pode contribuir para a motilidade espermática. O objetivo deste estudo foi comparar o efeito da adição de ácido docosahexaenóico (DHA) e α-tocoferol (α-Toh) ao diluidor de refrigeração, isoladamente ou combinado, aos parâmetros do sêmen equino, submetidos à refrigeração por até 72 horas. Foram utilizados dois ejaculados de dez garanhões coletados com vagina artificial e avaliados quanto à motilidade, integridade da membrana plasmática, fragmentação da cromatina, atividade mitocondrial e peroxidação lipídica, de acordo com os seguintes tratamentos: C; DHA; a-Toh; DHA / a-Toh; EtOH 100: e EtOH 140 (correspondentes ao controle; 10 ng mL-1 de DHA; 2 mM de α-Toh;: 10 ng mL-1 de DHA + 2 mM de α-Toh; 100 µL de etanol e 140 µL de etanol, respectivamente). O tratamento com DHA mostrou maior motilidade (68,2 ± 12,3; p < 0,05) quando comparado aos grupos controle (62,1 ± 16,2), DHA/α-Toh (61,3 ± 12,7) e EtOH (58,1 ± 8,6). Na análise de peroxidação lipídica, o grupo controle mostrou 2.506,2 ± 796,4 ng de MDA 108 espermatozoides-1, sendo significativamente maior (p < 0,05) do que os grupos tratados com DHA (2.036,0 ± 687,0), α-Toh (1.890,8 ± 749,5) e DHA / a-Toh (1.821,1 ± 627,2). Em conclusão, α-Toh foi eficaz na diminuição da peroxidação lipídica de espermatozoide equino submetido ao resfriamento, e o DHA melhorou a motilidade espermática e, apesar de ser um ácido graxo poliinsaturado com alta suscetibilidade à peroxidação, reduziu a peroxidação lipídica.(AU)

Penectomia parcial como tratamento de paralisia crônica secundária a hematoma peniano em um equino – relato de caso / Partial penectomy as treatment to secondary chronic paralysis of penile hematoma in a horse – case report

O presente trabalho relata o caso de um equino da raça American Trotter, garanhão, com 10 anos de idade, apresentando lesão edematosa ao longo do corpo do pênis que apresentava desvio ventrocaudal associado a focos de ferimentos abrasivos e disfunção do movimento de retração em direção à cavidade prepucial, com diagnóstico clínico e ultrassonográfico de hematoma peniano generalizado. O tratamento clínico inicial se baseou em terapia anti-inflamatória, massagem, hidroterapia fria alternada com compressas quentes durante 5 dias consecutivos, porém sem melhora significativa da lesão. Optou-se então pela realização da técnica de penectomia parcial com incisão de pele e fáscia no aspecto ventral do pênis em formato triangular seguida de uretroplastia. O animal recebeu alta hospitalar 15 dias após o procedimento, com frequência e aspecto normais de micção, além de retorno à função de exposição e retração do pênis. A opção pela técnica cirúrgica de penectomia parcial mostrou ser uma alternativa eficiente, sendo um procedimento a se considerar no tratamento de hematoma associado à paralisia peniana crônica.~ipt

The present study reports the case of a 10-year-old American Trotter stallion, presenting edematous lesion along the body of the penis which presented ventrocaudal deviation associated with abrasive injury foci and dysfunction of retraction movement towards the preputial cavity, with clinical and ultrasonographic diagnosis of generalized penile hematoma. Initial clinical treatment was based on anti-inflammatory therapy, massage, cold hydrotherapy alternating with warm compresses for 5 consecutive days, but without significant improvement of the lesion. It was decided to perform the partial penectomy technique with skin and fascia triangular shaped incision in the ventral aspect of the penis followed by urethroplasty. The animal was discharged from the hospital 15 days after the procedure, with normal frequency and aspect of urination, in addition to returning to the function of exposure and retraction of the penis. The option for the partial penectomy surgical technique proved to be an efficient alternative, being a procedure to consider in the treatment of hematoma associated with chronic penile paralysis.

Influência da orquiectomia na avaliação ultrassonográfica das glândulas anexas de equinos / Influence of orchiectomy on ultrasound assessment of equine accessory glands

A ultrassonografia confere uma avaliação minuciosa do trato reprodutivo de equinos, conferindo relevância no exame andrológico para percepção de higidez ou diagnóstico antecipado de afecções. Portanto, objetivou-se descrever e determinar as mensurações e alterações das glândulas anexas de equinos submetidos à orquiectomia. Garanhões da raça Quarto de Milha (n = 5), com idade de 4-6 anos, foram avaliados por meio de palpação e ultrassonografia transretal previamente à orquiectomia e após, com intervalo de 30, 60 e 90 dias do procedimento. As glândulas bulbouretrais, vesículas seminais e ampolas foram palpadas e delimitadas quanto ao tamanho e higidez. Além disso, procedeu-se o escaneamento e mensuração através da ultrassonografia modo-B, por via transretal. A orquiectomia foi realizada de forma independente ao estudo. Para comparação dos dados utilizou-se o teste T-Student e de Variância (ANOVA). A ultrassonografia mostrou-se eficiente para avaliação e mensuração das ampolas dos ductos deferentes, glândulas vesiculares, bulbouretrais e a próstata de equinos. Considerando as consequências da orquiectomia nas estruturas supracitadas, sugere-se que a mesma não promove hipoplasia das glândulas anexas durante o período de 90 dias após cirurgia. No entanto, apenas as ampolas dos ductos deferentes demonstraram mensurações distintas nesse período, com diminuição significativa associada à orquiectomia.

Ultrasonography provides a thorough assessment of the reproductive tract of horses, giving relevance to the andrological examination for the perception of health or early diagnosis of conditions. Thus, the objective is to describe the assessment and measurement of the attached glands of horses submitted to orchiectomy. Quarter Horses (n = 5), aged 4-6 years, were assessed by palpation and transrectal ultrasound prior to orchiectomy and after 30, 60 and 90 days after the procedure. Bulbourethral glands, seminal vesicles and ampoules were palpated and delimited in terms of size and health. In addition, scanning and measurement was carried out using B-mode ultrasound, linear probe, frequency of 7.5 Hz, by transrectal approach. Orchiectomy was performed independently from the study. To compare the data, was used T-Student and Variance test (ANOVA). The ultrasonography proved to be efficient for evaluating and measuring the ampoules of the vas deferens, vesicular gland, bulbourethral and the prostate of horses. Considering the consequences of orchiectomy on the aforementioned structures, it is suggested that it does not promote hypoplasia of the attached glands during the period of 90 days after surgery. However, only the ampoules of the vas deferens showed different measurements during this period, with a significant decrease associated with orchiectomy.

Influência da orquiectomia na avaliação ultrassonográfica das glândulas anexas de equinos / Influence of orchiectomy on ultrasound assessment of equine accessory glands

A ultrassonografia confere uma avaliação minuciosa do trato reprodutivo de equinos, conferindo relevância no exame andrológico para percepção de higidez ou diagnóstico antecipado de afecções. Portanto, objetivou-se descrever e determinar as mensurações e alterações das glândulas anexas de equinos submetidos à orquiectomia. Garanhões da raça Quarto de Milha (n = 5), com idade de 4-6 anos, foram avaliados por meio de palpação e ultrassonografia transretal previamente à orquiectomia e após, com intervalo de 30, 60 e 90 dias do procedimento. As glândulas bulbouretrais, vesículas seminais e ampolas foram palpadas e delimitadas quanto ao tamanho e higidez. Além disso, procedeu-se o escaneamento e mensuração através da ultrassonografia modo-B, por via transretal. A orquiectomia foi realizada de forma independente ao estudo. Para comparação dos dados utilizou-se o teste T-Student e de Variância (ANOVA). A ultrassonografia mostrou-se eficiente para avaliação e mensuração das ampolas dos ductos deferentes, glândulas vesiculares, bulbouretrais e a próstata de equinos. Considerando as consequências da orquiectomia nas estruturas supracitadas, sugere-se que a mesma não promove hipoplasia das glândulas anexas durante o período de 90 dias após cirurgia. No entanto, apenas as ampolas dos ductos deferentes demonstraram mensurações distintas nesse período, com diminuição significativa associada à orquiectomia.(AU)

Ultrasonography provides a thorough assessment of the reproductive tract of horses, giving relevance to the andrological examination for the perception of health or early diagnosis of conditions. Thus, the objective is to describe the assessment and measurement of the attached glands of horses submitted to orchiectomy. Quarter Horses (n = 5), aged 4-6 years, were assessed by palpation and transrectal ultrasound prior to orchiectomy and after 30, 60 and 90 days after the procedure. Bulbourethral glands, seminal vesicles and ampoules were palpated and delimited in terms of size and health. In addition, scanning and measurement was carried out using B-mode ultrasound, linear probe, frequency of 7.5 Hz, by transrectal approach. Orchiectomy was performed independently from the study. To compare the data, was used T-Student and Variance test (ANOVA). The ultrasonography proved to be efficient for evaluating and measuring the ampoules of the vas deferens, vesicular gland, bulbourethral and the prostate of horses. Considering the consequences of orchiectomy on the aforementioned structures, it is suggested that it does not promote hypoplasia of the attached glands during the period of 90 days after surgery. However, only the ampoules of the vas deferens showed different measurements during this period, with a significant decrease associated with orchiectomy.(AU)

Uso de quercetina em meio de refrigeração de sêmen equino a base de leite em pó desnatado / Use of quercetin in equine semen cooling medium based on skimded milk poder

A biotécnica de refrigeração de sêmen equino para o trasporte de material genético está amplamente distribuida. Com a necessidade da manutenção da viabilidade espermática é indispensável a autilização e diluentes para este fim. O objetivo deste estudo foi avaliar se a adição de quercetina, que é um flavonóide antioxidante, em diluentes espermáticos altera a viabilidade dos espermatozoides equinos refrigerados. Foram avaliados cinco ejaculados de um garanhão, por meio da análise de motilidade e vigor espermático, em diferentes períodos de refrigeração em quatro meios de diluição: BotuSêmen®; BotuSêmen® adicionado de 20 µg/mL de quercetina (SIGMA®); Solução aquosa com 10% leite em pó desnatado (Molico®) ou Solução aquosa com 10% leite em pó desnatado (Molico®) adicionado de 20 µg/mL de quercetina (SIGMA®). Por meio dos resultados obtidos no presente estudo, foi possível verificar que não há diferença estatística entre a motilidade espermática de sêmen de garanhão diluído em BotuSêmen® em relação ao diluído solução aquosa com 10% leite em pó desnatado (Molico®) pelo período de refrigeração avaliado (36h).

The biotechnique of equine semen cooling for the transfer of genetic material is widely distributed. With the need to maintain sperm viability, it is indispensable to use and thinners for this purpose. The aim of this study was to evaluate whether the addition of quercetin, which is an anti-oxidant flavonoid, in spermatic diluents alters the viability of refrigerated equine spermatozoa. Five ejaculates of a stallion were evaluated by analysis of motility and spermatic vigor in different cooling periods in four dilution media: BotuSêmen® ; BotuSêmen® added 20 µg/mL of quercetin (SIGMA® ); Aqueous solution with 10% skimmilk powder (Molico® ) or Aqueous solution with 10% skimmilk powder (Molico® ) added 20 µg/mL quercetin (SIGMA® ). Through the data obtained, it was possible to verify that there is no statistical difference between the sperm motility of diluted stallion semen in BotuSêmen® in relation to the diluted aqueous solution with 10% skimmed milk powder (Molico® ) for the evaluated refrigeration period (36h).

Penectomia parcial como tratamento de paralisia crônica secundária a hematoma peniano em um equino relato de caso / Partial penectomy as treatment to secondary chronic paralysis of penile hematoma in a horse case report

O presente trabalho relata o caso de um equino da raça American Trotter, garanhão, com 10 anos de idade, apresentando lesão edematosa ao longo do corpo do pênis que apresentava desvio ventrocaudal associado a focos de ferimentos abrasivos e disfunção do movimento de retração em direção à cavidade prepucial, com diagnóstico clínico e ultrassonográfico de hematoma peniano generalizado. O tratamento clínico inicial se baseou em terapia anti-inflamatória, massagem, hidroterapia fria alternada com compressas quentes durante 5 dias consecutivos, porém sem melhora significativa da lesão. Optou-se então pela realização da técnica de penectomia parcial com incisão de pele e fáscia no aspecto ventral do pênis em formato triangular seguida de uretroplastia. O animal recebeu alta hospitalar 15 dias após o procedimento, com frequência e aspecto normais de micção, além de retorno à função de exposição e retração do pênis. A opção pela técnica cirúrgica de penectomia parcial mostrou ser uma alternativa eficiente, sendo um procedimento a se considerar no tratamento de hematoma associado à paralisia peniana crônica.(AU)~ipt

The present study reports the case of a 10-year-old American Trotter stallion, presenting edematous lesion along the body of the penis which presented ventrocaudal deviation associated with abrasive injury foci and dysfunction of retraction movement towards the preputial cavity, with clinical and ultrasonographic diagnosis of generalized penile hematoma. Initial clinical treatment was based on anti-inflammatory therapy, massage, cold hydrotherapy alternating with warm compresses for 5 consecutive days, but without significant improvement of the lesion. It was decided to perform the partial penectomy technique with skin and fascia triangular shaped incision in the ventral aspect of the penis followed by urethroplasty. The animal was discharged from the hospital 15 days after the procedure, with normal frequency and aspect of urination, in addition to returning to the function of exposure and retraction of the penis. The option for the partial penectomy surgical technique proved to be an efficient alternative, being a procedure to consider in the treatment of hematoma associated with chronic penile paralysis.(AU)

Uso de quercetina em meio de refrigeração de sêmen equino a base de leite em pó desnatado / Use of quercetin in equine semen cooling medium based on skimded milk poder

A biotécnica de refrigeração de sêmen equino para o trasporte de material genético está amplamente distribuida. Com a necessidade da manutenção da viabilidade espermática é indispensável a autilização e diluentes para este fim. O objetivo deste estudo foi avaliar se a adição de quercetina, que é um flavonóide antioxidante, em diluentes espermáticos altera a viabilidade dos espermatozoides equinos refrigerados. Foram avaliados cinco ejaculados de um garanhão, por meio da análise de motilidade e vigor espermático, em diferentes períodos de refrigeração em quatro meios de diluição: BotuSêmen®; BotuSêmen® adicionado de 20 µg/mL de quercetina (SIGMA®); Solução aquosa com 10% leite em pó desnatado (Molico®) ou Solução aquosa com 10% leite em pó desnatado (Molico®) adicionado de 20 µg/mL de quercetina (SIGMA®). Por meio dos resultados obtidos no presente estudo, foi possível verificar que não há diferença estatística entre a motilidade espermática de sêmen de garanhão diluído em BotuSêmen® em relação ao diluído solução aquosa com 10% leite em pó desnatado (Molico®) pelo período de refrigeração avaliado (36h).(AU)

The biotechnique of equine semen cooling for the transfer of genetic material is widely distributed. With the need to maintain sperm viability, it is indispensable to use and thinners for this purpose. The aim of this study was to evaluate whether the addition of quercetin, which is an anti-oxidant flavonoid, in spermatic diluents alters the viability of refrigerated equine spermatozoa. Five ejaculates of a stallion were evaluated by analysis of motility and spermatic vigor in different cooling periods in four dilution media: BotuSêmen® ; BotuSêmen® added 20 µg/mL of quercetin (SIGMA® ); Aqueous solution with 10% skimmilk powder (Molico® ) or Aqueous solution with 10% skimmilk powder (Molico® ) added 20 µg/mL quercetin (SIGMA® ). Through the data obtained, it was possible to verify that there is no statistical difference between the sperm motility of diluted stallion semen in BotuSêmen® in relation to the diluted aqueous solution with 10% skimmed milk powder (Molico® ) for the evaluated refrigeration period (36h).(AU)

Influência de diferentes sistemas e curvas de congelamento na congelabilidade e fertilidade do sêmen equino / Influence of systems and freezing curve in equine semen freezability and fertility

Avaliou-se o efeito de curvas de congelação nos parâmetros espermáticos e na fertilidade, usando sêmen de alta e baixa congelabilidade. Experimento 1 - utilizou-se sêmen de quatro garanhões resistentes à congelação: grupo 1, palhetas refrigeradas até 5°C e congeladas com curva de -8°C/min; grupos 2 e 3, palhetas refrigeradas até 5°C (0,5°C/min.) e congeladas com curvas de -20°C/min e -10°C/min, respectivamente. Experimentos 2 e 3 - utilizaram-se cinco garanhões (Mangalarga Marchador), respectivamente, de alta e baixa congelabilidade: grupo 4, a mesma metodologia descrita no grupo 1; grupos 5 e 6, palhetas refrigeradas até 5°C (0,5°C/min) e congeladas com curva de -20°C/min, entre 5°C e -60°C, e -10°C/min, entre -60°C e -100ºC (grupo 5), e -25°C/min, de 5°C até -100°C (grupo 6). O sêmen foi avaliado após descongelamento pelo método computadorizado. No experimento 1, não houve diferença nos parâmetros avaliados. No experimento 2, os parâmetros motilidade total (MT) e motilidade progressiva foram superiores aos do grupo 6 em relação ao grupo 4. No experimento 3, a MT foi superior no grupo 6 em relação ao grupo 4. As curvas de congelação mais rápidas apresentaram melhores parâmetros de cinética espermática, após a descongelação, para o sêmen de garanhões da raça Mangalarga Marchador.(AU)

The effect of freezing curves on sperm parameters and fertility, using resistant and sensitive semen to cryopreservation, was evaluated. In experiment 1, Semen from 4 stallions resistant to freezing was used: Group 1, straws were cooled to 5°C and frozen with a curve of - 8°C/min; Groups 2 and 3, straws were cooled to 5°C (0.5°C/min) and frozen with curves of - 20°C / min and - 10°C/min, respectively. In experiments 2 and 3, 5 stallions (Mangalarga Marchador) presenting respectively resistant and sensitive sperm to cryopreservation were used: Group 4, same methodology described for Group 1 was performed; Groups 5 and 6, straws were cooled to 5°C (0.5°C/min) and frozen with a curve of - 20°C/min. between 5°C and - 60°C and -10°C/min. between - 60°C and - 100°C (Group 5) and - 25°C/min. 5°C to - 100°C (Group 6). Thawed-semen was evaluated by the computerized method CASA. In Experiment 1, there was no difference in the evaluated parameters. In Experiment 2, total motility (MT) and progressive motility (PM) were higher in Group 6 compared to Group 4. In Experiment 3, TM was higher in Group 6 than Group 4. The faster freezing curves showed better parameters of sperm kinetics after thawing, for the Mangalarga Marchador stallion semen.(AU)

Influência de diferentes sistemas e curvas de congelamento na congelabilidade e fertilidade do sêmen equino / Influence of systems and freezing curve in equine semen freezability and fertility

Avaliou-se o efeito de curvas de congelação nos parâmetros espermáticos e na fertilidade, usando sêmen de alta e baixa congelabilidade. Experimento 1 - utilizou-se sêmen de quatro garanhões resistentes à congelação: grupo 1, palhetas refrigeradas até 5°C e congeladas com curva de -8°C/min; grupos 2 e 3, palhetas refrigeradas até 5°C (0,5°C/min.) e congeladas com curvas de -20°C/min e -10°C/min, respectivamente. Experimentos 2 e 3 - utilizaram-se cinco garanhões (Mangalarga Marchador), respectivamente, de alta e baixa congelabilidade: grupo 4, a mesma metodologia descrita no grupo 1; grupos 5 e 6, palhetas refrigeradas até 5°C (0,5°C/min) e congeladas com curva de -20°C/min, entre 5°C e -60°C, e -10°C/min, entre -60°C e -100ºC (grupo 5), e -25°C/min, de 5°C até -100°C (grupo 6). O sêmen foi avaliado após descongelamento pelo método computadorizado. No experimento 1, não houve diferença nos parâmetros avaliados. No experimento 2, os parâmetros motilidade total (MT) e motilidade progressiva foram superiores aos do grupo 6 em relação ao grupo 4. No experimento 3, a MT foi superior no grupo 6 em relação ao grupo 4. As curvas de congelação mais rápidas apresentaram melhores parâmetros de cinética espermática, após a descongelação, para o sêmen de garanhões da raça Mangalarga Marchador.(AU)

The effect of freezing curves on sperm parameters and fertility, using resistant and sensitive semen to cryopreservation, was evaluated. In experiment 1, Semen from 4 stallions resistant to freezing was used: Group 1, straws were cooled to 5°C and frozen with a curve of - 8°C/min; Groups 2 and 3, straws were cooled to 5°C (0.5°C/min) and frozen with curves of - 20°C / min and - 10°C/min, respectively. In experiments 2 and 3, 5 stallions (Mangalarga Marchador) presenting respectively resistant and sensitive sperm to cryopreservation were used: Group 4, same methodology described for Group 1 was performed; Groups 5 and 6, straws were cooled to 5°C (0.5°C/min) and frozen with a curve of - 20°C/min. between 5°C and - 60°C and -10°C/min. between - 60°C and - 100°C (Group 5) and - 25°C/min. 5°C to - 100°C (Group 6). Thawed-semen was evaluated by the computerized method CASA. In Experiment 1, there was no difference in the evaluated parameters. In Experiment 2, total motility (MT) and progressive motility (PM) were higher in Group 6 compared to Group 4. In Experiment 3, TM was higher in Group 6 than Group 4. The faster freezing curves showed better parameters of sperm kinetics after thawing, for the Mangalarga Marchador stallion semen.(AU)

The effects of xanthan gum on equine sperm quality during cooling storage / Efeitos de xantam gum em qualidade de esperma equino durante armazenamento resfriado

This study was designed to evaluate the possible benefits of adding xanthan gum to a standard extender for equine through in vitro analyzes of sperm quality. Semen was collected four times from five different stallions (n= 20 samples) and subjected to cooled storage under different conditions: control (only standard extender) and three different concentrations of xanthan gum (0.01%, 0.12%, and 0.25%) supplemented to the extenders. Sperm parameters, such as motility, mitochondrial functionality, and membrane, acrosome, and DNA integrity were measured after 0h, 24h, 48h, and 72h of sperm storage at 5ºC. Our observations indicated that sperm motility declined with longer cooling period with the 0.25% xanthan gum supplementation group compared with the control group. Other parameters, such as mitochondrial functionality and membrane and acrosome integrity also declined for all treatments during storage; however, no differences were observed between xanthan gum and control groups. DNA integrity did not significantly change during the storage. In conclusion, the addition of xanthan gum to equine semen extender is not harmful to the sperm structure, despite reducing the sperm motility.(AU)

Esse estudo foi desenvolvido para avaliar os possíveis benefícios de acrescentar xanthan gum a um extensor padrão através de analises in vitro de qualidade de esperma. Semen foi coletado quatro vezes de cinco garanhões diferentes (n = 20 amostras) e submetido a armazenamen to resfriado em diferentes condições: controle (apenas extensor padrão) e três diferentes concentrações de xanthan gum (0,01%, 0,12% e 0,25%) suplementado aos extensores. Parâmetros dos espermatozoides, como mobilidade, funcionamento mitocondrial e integridade de membranas, acrossomos e DNA forma medidos após 0h, 24h, 48h e 72h de armazenamento a 5oC. Nossas observações indicaram que motilidade reduziu com armazenamento resfriado prolongado no grupo de 0,25% de suplementação de xanthan gum comparado ao grupo controle. Outros parâmetros, como funcionalidade mitocondrial e integridade de membrana e acrossomos também reduziu em todos os tratamentos durante o armazenamento, no entanto não foram detectadas diferenças significativas entre grupos tratados e grupo controle. Integridade de DNA não mudou significativamente durante armazenamento. Em conclusão, a adição de xanthan gum a extensor de sêmen equino não é danosa à estrutura do espermatozoide apesar de reduzir motilidade.(AU)

The effects of xanthan gum on equine sperm quality during cooling storage / Efeitos de xantam gum em qualidade de esperma equino durante armazenamento resfriado

This study was designed to evaluate the possible benefits of adding xanthan gum to a standard extender for equine through in vitro analyzes of sperm quality. Semen was collected four times from five different stallions (n= 20 samples) and subjected to cooled storage under different conditions: control (only standard extender) and three different concentrations of xanthan gum (0.01%, 0.12%, and 0.25%) supplemented to the extenders. Sperm parameters, such as motility, mitochondrial functionality, and membrane, acrosome, and DNA integrity were measured after 0h, 24h, 48h, and 72h of sperm storage at 5ºC. Our observations indicated that sperm motility declined with longer cooling period with the 0.25% xanthan gum supplementation group compared with the control group. Other parameters, such as mitochondrial functionality and membrane and acrosome integrity also declined for all treatments during storage; however, no differences were observed between xanthan gum and control groups. DNA integrity did not significantly change during the storage. In conclusion, the addition of xanthan gum to equine semen extender is not harmful to the sperm structure, despite reducing the sperm motility.(AU)

Esse estudo foi desenvolvido para avaliar os possíveis benefícios de acrescentar xanthan gum a um extensor padrão através de analises in vitro de qualidade de esperma. Semen foi coletado quatro vezes de cinco garanhões diferentes (n = 20 amostras) e submetido a armazenamen to resfriado em diferentes condições: controle (apenas extensor padrão) e três diferentes concentrações de xanthan gum (0,01%, 0,12% e 0,25%) suplementado aos extensores. Parâmetros dos espermatozoides, como mobilidade, funcionamento mitocondrial e integridade de membranas, acrossomos e DNA forma medidos após 0h, 24h, 48h e 72h de armazenamento a 5oC. Nossas observações indicaram que motilidade reduziu com armazenamento resfriado prolongado no grupo de 0,25% de suplementação de xanthan gum comparado ao grupo controle. Outros parâmetros, como funcionalidade mitocondrial e integridade de membrana e acrossomos também reduziu em todos os tratamentos durante o armazenamento, no entanto não foram detectadas diferenças significativas entre grupos tratados e grupo controle. Integridade de DNA não mudou significativamente durante armazenamento. Em conclusão, a adição de xanthan gum a extensor de sêmen equino não é danosa à estrutura do espermatozoide apesar de reduzir motilidade.(AU)

Efeito da adição de glicerol em diferentes etapas do resfriamento na congelabilidade do sêmen equino / Effect of glycerol addition in different cooling periods on the freezability of equine semen

O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da adição do glicerol em diferentes etapas do resfriamento (pré-resfriamento e durante) do sêmen de garanhões, sobre os parâmetros de congelabilidade, como avaliações físicas e morfológicas dosêmen e testes complementares (teste hiposmótico, supravital e teste de termoresistência). Foram utilizados onze ejaculados de dois garanhões da raçaMangalarga Marchador. Não foram registradas diferenças (P > 0,05) entre os valores médios obtidos nos protocolos utilizados. Esses registros sugerem que o tempo de contato entre o glicerol e o sêmen antes do processo de congelamento não interfere na qualidade e na longevidade do sêmen de garanhões após o descongelamento.

The aim of this study was to evaluate the effect of glycerol addition in different cooling periods (before and during) of stallion semen, over its freezabilitycharacteristics, such as physical and morphological evaluations and complementary tests (hyposmotic swelling test, supravital staining and termoresistance test). The studyinvolved eleven ejaculates from two Mangalarga Marchador stallions. No relations (P > 0.05) were registered among average values of the treatments. These results suggest that the contact time between semen and glycerol does not affect quality and longevity of stallion semen after thawing.