Potentially pathogenic Staphylococcus aureus and Listeria spp. in Brazilian unpasteurized cheese production / Staphylococcus aureus e Listeria spp. potencialmente patogênicos na produção de queijos não pasteurizados

This study aimed to identify potentially pathogenic microorganisms (Listeria innocua, L. seeligeri, L. ivanovii, L. monocytogenes, Staphylococcus aureus, and several virulence genes) in unpasteurized cheese production in the northeastern region of the state of São Paulo, Brazil. Listeria species were detected in 68 (64.14%) out of 106 samples of bovine feces, swabs from milkers' and cheese handlers' hands, milking buckets, raw milk, whey, water, cheese processing surface,s and utensils. All the samples collected at one farm were contaminated with Listeria spp. L. innocua, L. seeligeri, L. ivanovii, or L. monocytogenes were not detected in the samples collected in this study. A set of 391 Staphylococcus spp. isolates were obtained in these samples, from which 60 (15.31%) were identified as S. aureus using PCR (Polymerase Chain Reaction). S. aureus carrying virulence genes (eta, hlg, seg, seh, sei) were detected in milk, in swabs from cheese handler's hands, whey, milk, sieves, buckets, and cheese. The hlg gene (encodes gamma hemolysin) was detected in all the S. aureus isolates. These findings show that poor hygienic practice is associated with a higher risk of pathogenic bacteria in milk or cheese, providing useful information for public health authorities to increase food safety surveillance and prevent the dissemination of pathogens.

O objetivo desse estudo foi identificar microrganismos potencialmente patogênicos (Listeria innocua, L. seeligeri, L. ivanovii, L. monocytogenes, Staphylococcus aureus e diversos genes de virulência) na produção de queijos de leite cru na região noroeste do Estado de São Paulo, Brasil. Listeria foram detectadas em 68 (64,14%) das 106 amostras obtidas de fezes bovinas, suabes das mãos de ordenhadores e queijeiros, baldes, leite cru, soro, água, superfícies e utensílios da produção de queijos. Todas as amostras coletadas em uma fazenda estavam contaminadas com Listeria spp. L. innocua, L. seeligeri, L. ivanovii, e L. monocytogenes não foram detectadas nas amostras coletadas nesse estudo. Um conjunto de 391 isolados de Staphylococcus spp. foram obtidos das amostras, e desses 60 (15,31%) foram identificados como S. aureus pela PCR (Polymerase Chain Reaction). S. aureus contendo genes de virulência (eta, hlg, seg, seh, sei) foram detectados em leite, mãos dos ordenhadores, soro, utensílios e queijos. O gene hlg (gama-hemolisina)foi detectado em todos os isolados de S. aureus.Esses resultados demonstram que práticas inadequadas de higiene estão associadas com um maior risco da presença de bactérias patogênicas no leite e queijos crus, fornecendo informações para as autoridades de saúde pública para incrementarem a vigilância e prevenirem a disseminação de patógenos.

Evaluation of forestripping milk and its effects on milk quality / Avaliação do leite do teste de Tamis e seu efeito sobre a qualidade do leite

Consumers demand for food safety affects dairy industry, restraining the sector to adapt to milk quality parameters established by legislation, such as somatic cell count (SCC) and standard plate count (SPC). Good agricultural practices have positive impact over these parameters, especially Forestripping Milk (FSM), which consists of observing the first milk streams collected in a dark-bottomed mug for identification of clinical mastitis. These first milk streams have high somatic cells count and bacteria. Therefore, the aim of this study was to evaluate the characteristics of milk from FSM, such as SCC and SPC values, and its impacts on milk quality of the cooling tank through simulating contamination. Fourteen dairy farms and one experimental farm were evaluated for SCC and SPC parameters of FSM. It was observed that there was no statistically significant difference for SCC and SPC between milk samples from the cooling tank and cooling tank simulating the inclusion of milk from FSM. Statistically significant difference for somatic cell score (SCS) and SPC was observed when tanks were classified by SCC. In addition, difference in SCS was observed between morning and afternoon milking. The collection of first milk streams can contribute to decrease in SCC and SPC of milk in the cooling tank. FSM must be practiced by all dairy farmers as milking management, to assist in clinical mastitis diagnosis and improve milk quality.(AU)

A exigência dos consumidores por alimentos seguros pressiona a indústria leiteira a se adequar aos parâmetros esta-belecidos pela legislação, como a contagem de células somáticas (CCS) e a contagem padrão em placas (CPP). As boas práticas agropecuárias impactam positivamente sobre esses parâmetros, destacando-se o teste de Tamis ou Forestripping Milk (FSM), que consiste na observação dos primeiros jatos de leite retirados em uma caneca de fundo escuro para a identificação da mastite clínica. Esses primeiros jatos possuem elevada quantidade de células somáticas e bactérias. O objetivo deste estudo foi avaliar as características do leite do FSM quanto aos valores de CCS e CPP, e seus impactos na qualidade do leite do tanque de res-friamento por meio de simulação de contaminação. Foram avaliadas 14 propriedades leiteiras comerciais e uma experimental quanto aos parâmetros de CCS e CPP oriundos do FSM. Observou-se que não houve diferença significante para CCS e CPP entre as amostras de leite do tanque e do tanque simulando a inclusão de leite do FSM. Diferenças estatisticamente significa-tivas para escore de CCS e CPP foram observadas quando os tanques foram classificados por CCS. Além disso, foi observada diferença nas CCS entre as ordenha da manhã e da tarde. A coleta dos primeiros fluxos de leite pode contribuir na redução da CCS e da CPP do leite do tanque de resfriamento. O FSM deve ser praticado por todos os produtores de leite no manejo da ordenha para auxiliar no diagnóstico clínico da mastite e melhorar a qualidade do leite.(AU)

Risk factors associated with intramammary colonization with Mollicutes in dairy cattle from Southeast Brazil / Fatores de risco associados à colonização intramamária por Mollicutes em bovinos leiteiros do Sudeste brasileiro

Bacteria of Mollicutes Class are associated with intramammary infection and decrease in milk production. This study investigated the occurrence of Mollicutes and elucidated their risk factors in dairy herds from Southeast Brazil. For this, milk samples from 387 lactation cows from Minas Gerais, Rio de Janeiro and São Paulo States were subjected to the polymerase chain reaction (PCR) to detect Mollicutes. Species of Mycoplasma were investigated in Mollicutes positive samples by PCR, including Mycoplasma bovis, M. alkalescens, M. bovigenitalium, M. bovirhinis, M. arginini and A. laidlawii. An epidemiological questionnaire was applied to collect data on possible risk factors, which were assessed using Pearson's Chi-square test followed by odds ratio (P≤0.05). Mollicutes were reported in 21% (4/19) of the herds and 4% (16/387) of the animals, while 1% (5/387) were positive for M. bovis and 3% (11/387) for M. arginini. All samples were negative to the other agents. Herds with more than 150 animals [OR=3.51 (95% CI 1.11-11.08)], manual milking [OR=9.97 (95% CI 2.80-35.49)] and not-milking animals with mastitis last [OR=6.54 (95% CI 1.92-22.29)] were risk factors. The presence of these conditions may favor intramammary infection by Mollicutes in dairy herds from Southeast Brazil. This is the first report of M. bovis in Rio de Janeiro and M. arginini in the studied states.(AU)

Bactérias da Classe Mollicutes estão associadas à infecção intramamária e diminuição da produção leiteira. O objetivo deste estudo foi investigar a ocorrência de Mollicutes e elucidar seus fatores de risco em rebanhos leiteiros do sudeste brasileiro. Para isso, amostras de leite de 387 vacas em lactação dos estados de Minas Gerais, Rio de Janeiro e São Paulo foram submetidas à reação em cadeia da polimerase (PCR) para detectar Mollicutes. Espécies de Mycoplasma foram investigadas nas amostras positivas por PCR, incluindo Mycoplasma bovis, M. alkalescens, M. bovigenitalium, M. bovirhinis, M. arginini e A. laidlawii. Foi aplicado um questionário epidemiológico para a coleta de dados sobre possíveis fatores de risco, que foram avaliados pelo teste de Qui-Quadrado de Pearson seguido de odds ratio (P≤0.05). Mollicutes foram detectados em 21% (4/19) dos rebanhos e 4% (16/387) dos animais, enquanto 1% (5/387) destes foram positivos para m. bovis, 3% (11/387) para m. arginini, sendo todas as amostras negativas para os demais agentes. Rebanhos com mais de 150 animais [OR=3,51 (95% IC 1,11-11,08)], ordenha manual [OR=9,97 (95% IC 2,80-35,49)] e ausência de linha de ordenha [OR=6,54 (95% IC 1,92-22,29)] foram considerados fatores de risco. A presença dessas condições pode favorecer a infecção intramamária por Mollicutes em rebanhos leiteiros no sudeste do Brasil. Este é o primeiro relato de M. bovis no Rio de Janeiro e M. arginini nos estados estudados.(AU)

Risk factors associated with intramammary colonization with Mollicutes in dairy cattle from Southeast Brazil / Fatores de risco associados à colonização intramamária por Mollicutes em bovinos leiteiros do Sudeste brasileiro

Bacteria of Mollicutes Class are associated with intramammary infection and decrease in milk production. This study investigated the occurrence of Mollicutes and elucidated their risk factors in dairy herds from Southeast Brazil. For this, milk samples from 387 lactation cows from Minas Gerais, Rio de Janeiro and São Paulo States were subjected to the polymerase chain reaction (PCR) to detect Mollicutes. Species of Mycoplasma were investigated in Mollicutes positive samples by PCR, including Mycoplasma bovis, M. alkalescens, M. bovigenitalium, M. bovirhinis, M. arginini and A. laidlawii. An epidemiological questionnaire was applied to collect data on possible risk factors, which were assessed using Pearson's Chi-square test followed by odds ratio (P≤0.05). Mollicutes were reported in 21% (4/19) of the herds and 4% (16/387) of the animals, while 1% (5/387) were positive for M. bovis and 3% (11/387) for M. arginini. All samples were negative to the other agents. Herds with more than 150 animals [OR=3.51 (95% CI 1.11-11.08)], manual milking [OR=9.97 (95% CI 2.80-35.49)] and not-milking animals with mastitis last [OR=6.54 (95% CI 1.92-22.29)] were risk factors. The presence of these conditions may favor intramammary infection by Mollicutes in dairy herds from Southeast Brazil. This is the first report of M. bovis in Rio de Janeiro and M. arginini in the studied states.

Bactérias da Classe Mollicutes estão associadas à infecção intramamária e diminuição da produção leiteira. O objetivo deste estudo foi investigar a ocorrência de Mollicutes e elucidar seus fatores de risco em rebanhos leiteiros do sudeste brasileiro. Para isso, amostras de leite de 387 vacas em lactação dos estados de Minas Gerais, Rio de Janeiro e São Paulo foram submetidas à reação em cadeia da polimerase (PCR) para detectar Mollicutes. Espécies de Mycoplasma foram investigadas nas amostras positivas por PCR, incluindo Mycoplasma bovis, M. alkalescens, M. bovigenitalium, M. bovirhinis, M. arginini e A. laidlawii. Foi aplicado um questionário epidemiológico para a coleta de dados sobre possíveis fatores de risco, que foram avaliados pelo teste de Qui-Quadrado de Pearson seguido de odds ratio (P≤0.05). Mollicutes foram detectados em 21% (4/19) dos rebanhos e 4% (16/387) dos animais, enquanto 1% (5/387) destes foram positivos para m. bovis, 3% (11/387) para m. arginini, sendo todas as amostras negativas para os demais agentes. Rebanhos com mais de 150 animais [OR=3,51 (95% IC 1,11-11,08)], ordenha manual [OR=9,97 (95% IC 2,80-35,49)] e ausência de linha de ordenha [OR=6,54 (95% IC 1,92-22,29)] foram considerados fatores de risco. A presença dessas condições pode favorecer a infecção intramamária por Mollicutes em rebanhos leiteiros no sudeste do Brasil. Este é o primeiro relato de M. bovis no Rio de Janeiro e M. arginini nos estados estudados.

Risk factors associated with intramammary colonization with Mollicutes in dairy cattle from Southeast Brazil / Fatores de risco associados à colonização intramamária por Mollicutes em bovinos leiteiros do Sudeste brasileiro

ABSTRACT: Bacteria of Mollicutes Class are associated with intramammary infection and decrease in milk production. This study investigated the occurrence of Mollicutes and elucidated their risk factors in dairy herds from Southeast Brazil. For this, milk samples from 387 lactation cows from Minas Gerais, Rio de Janeiro and São Paulo States were subjected to the polymerase chain reaction (PCR) to detect Mollicutes. Species of Mycoplasma were investigated in Mollicutes positive samples by PCR, including Mycoplasma bovis, M. alkalescens, M. bovigenitalium, M. bovirhinis, M. arginini and A. laidlawii. An epidemiological questionnaire was applied to collect data on possible risk factors, which were assessed using Pearson's Chi-square test followed by odds ratio (P≤0.05). Mollicutes were reported in 21% (4/19) of the herds and 4% (16/387) of the animals, while 1% (5/387) were positive for M. bovis and 3% (11/387) for M. arginini. All samples were negative to the other agents. Herds with more than 150 animals [OR=3.51 (95% CI 1.11-11.08)], manual milking [OR=9.97 (95% CI 2.80-35.49)] and not-milking animals with mastitis last [OR=6.54 (95% CI 1.92-22.29)] were risk factors. The presence of these conditions may favor intramammary infection by Mollicutes in dairy herds from Southeast Brazil. This is the first report of M. bovis in Rio de Janeiro and M. arginini in the studied states.

RESUMO: Bactérias da Classe Mollicutes estão associadas à infecção intramamária e diminuição da produção leiteira. O objetivo deste estudo foi investigar a ocorrência de Mollicutes e elucidar seus fatores de risco em rebanhos leiteiros do sudeste brasileiro. Para isso, amostras de leite de 387 vacas em lactação dos estados de Minas Gerais, Rio de Janeiro e São Paulo foram submetidas à reação em cadeia da polimerase (PCR) para detectar Mollicutes. Espécies de Mycoplasma foram investigadas nas amostras positivas por PCR, incluindo Mycoplasma bovis, M. alkalescens, M. bovigenitalium, M. bovirhinis, M. arginini e A. laidlawii. Foi aplicado um questionário epidemiológico para a coleta de dados sobre possíveis fatores de risco, que foram avaliados pelo teste de Qui-Quadrado de Pearson seguido de odds ratio (P≤0.05). Mollicutes foram detectados em 21% (4/19) dos rebanhos e 4% (16/387) dos animais, enquanto 1% (5/387) destes foram positivos para m. bovis, 3% (11/387) para m. arginini, sendo todas as amostras negativas para os demais agentes. Rebanhos com mais de 150 animais [OR=3,51 (95% IC 1,11-11,08)], ordenha manual [OR=9,97 (95% IC 2,80-35,49)] e ausência de linha de ordenha [OR=6,54 (95% IC 1,92-22,29)] foram considerados fatores de risco. A presença dessas condições pode favorecer a infecção intramamária por Mollicutes em rebanhos leiteiros no sudeste do Brasil. Este é o primeiro relato de M. bovis no Rio de Janeiro e M. arginini nos estados estudados.

Isolation and identification of Yersinia enterocolitica in bovine milk samples of bulk tanks from dairy farms in São Paulo, Brazil / Isolamento e identificação de Yersinia enterocolitica em amostras de leite cru bovino a partir de tanques de expansão, São Paulo, Brasil

Milk and its derivatives are good substrates for the proliferation of pathogenic and quality-deteriorating microorganisms, demanding rigorous care with milking, processing, and storage. Among the various bacteria that can grow in raw refrigerated milk, Yersinia enterocolitica, is an invasive enteropathogen of humans. This bacterium can cause a number of intestinal and extraintestinal clinical symptoms, ranging from mild gastroenteritis to mesenteric lymphadenitis, similar to appendicitis. To evaluate the prevalence of pathogenic Yersinia enterocolitica in raw milk from bulk milk tanks located in the State of São Paulo, 102 bovine milk samples (one per dairy farm) were evaluated by microbiological analyses, followed by biochemical tests PCR and genetic sequencing. Microbiological testing did not isolate Y. enterocolitica. However, PCR analysis revealed six samples that were positive for Y. enterocolitica (5.9%), confirmed by genetic sequencing. Only the inv gene was detected, which is present in virulent and avirulent Y. enterocolitica strains. There was great difficulty in microbiological isolation due to the difficulty of competitiveness of Y. enterocolitica in a very rich microbiota of raw milk. Although virulence genes known to be present in potentially pathogenic strains of Y. enterocolitica have not been identified, the presence of this pathogen in milk from expansion tanks...(AU)

O leite e seus derivados possuem substratos que favorecem o desenvolvimento de micro-organismos patogênicos e deteriorantes, devido a isso, cuidados rigorosos são exigindo durante a ordenha, processamento e seu armazenamento. Dentre os vários grupos de bactérias que podem contaminar o leite refrigerado cru está Yersinia enterocolitica. Esta bactéria pode causar a uma série de sintomas clínicos intestinais e extraintestinais, variando de gastroenterite leve a linfadenite mesentérica, semelhante à apendicite. Para avaliar a prevalência de Y. enterocolitica patogênica no leite cru de tanques de expansão localizados no estado de São Paulo, foram avaliadas 102 amostras de leite bovino, por análises microbiológicas, seguido de provas bioquímicas; a Reação em Cadeia de Polimerase (PCR) e sequenciamento genético. Não houve o isolamento de Y. enterocolitica pelas provas microbiológicas clássicas. No entanto, a análise de PCR, realizada diretamente do leite, revelou seis (6) amostras positivas para Y. enterocolitica (5,9%), confirmadas por sequenciamento genético. Somente o gene inv, foi detectado, que pode estar presente em cepas virulentas e avirulentas. Houve dificuldade de isolamento microbiológico devido à dificuldade de competitividade da Y. enterocolitica em uma microbiota muito rica do leite cru. Ainda que não tenham sido identificados os genes de virulência que sabidamente estão...(AU)

Isolation and identification of Yersinia enterocolitica in bovine milk samples of bulk tanks from dairy farms in São Paulo, Brazil / Isolamento e identificação de Yersinia enterocolitica em amostras de leite cru bovino a partir de tanques de expansão, São Paulo, Brasil

Milk and its derivatives are good substrates for the proliferation of pathogenic and quality-deteriorating microorganisms, demanding rigorous care with milking, processing, and storage. Among the various bacteria that can grow in raw refrigerated milk, Yersinia enterocolitica, is an invasive enteropathogen of humans. This bacterium can cause a number of intestinal and extraintestinal clinical symptoms, ranging from mild gastroenteritis to mesenteric lymphadenitis, similar to appendicitis. To evaluate the prevalence of pathogenic Yersinia enterocolitica in raw milk from bulk milk tanks located in the State of São Paulo, 102 bovine milk samples (one per dairy farm) were evaluated by microbiological analyses, followed by biochemical tests PCR and genetic sequencing. Microbiological testing did not isolate Y. enterocolitica. However, PCR analysis revealed six samples that were positive for Y. enterocolitica (5.9%), confirmed by genetic sequencing. Only the inv gene was detected, which is present in virulent and avirulent Y. enterocolitica strains. There was great difficulty in microbiological isolation due to the difficulty of competitiveness of Y. enterocolitica in a very rich microbiota of raw milk. Although virulence genes known to be present in potentially pathogenic strains of Y. enterocolitica have not been identified, the presence of this pathogen in milk from expansion tanks...

O leite e seus derivados possuem substratos que favorecem o desenvolvimento de micro-organismos patogênicos e deteriorantes, devido a isso, cuidados rigorosos são exigindo durante a ordenha, processamento e seu armazenamento. Dentre os vários grupos de bactérias que podem contaminar o leite refrigerado cru está Yersinia enterocolitica. Esta bactéria pode causar a uma série de sintomas clínicos intestinais e extraintestinais, variando de gastroenterite leve a linfadenite mesentérica, semelhante à apendicite. Para avaliar a prevalência de Y. enterocolitica patogênica no leite cru de tanques de expansão localizados no estado de São Paulo, foram avaliadas 102 amostras de leite bovino, por análises microbiológicas, seguido de provas bioquímicas; a Reação em Cadeia de Polimerase (PCR) e sequenciamento genético. Não houve o isolamento de Y. enterocolitica pelas provas microbiológicas clássicas. No entanto, a análise de PCR, realizada diretamente do leite, revelou seis (6) amostras positivas para Y. enterocolitica (5,9%), confirmadas por sequenciamento genético. Somente o gene inv, foi detectado, que pode estar presente em cepas virulentas e avirulentas. Houve dificuldade de isolamento microbiológico devido à dificuldade de competitividade da Y. enterocolitica em uma microbiota muito rica do leite cru. Ainda que não tenham sido identificados os genes de virulência que sabidamente estão...

In-house validation for multi-residue analysis of tetracycline in cow milk by HPLC with UV detection / Validação intralaboratorial para análise múltipla dos resíduos de tetraciclina em leite bovino por cromatografia líquida de alta eficiência com detecção UV

The indiscriminate use of antibiotics in dairy cattle without complying with the waiting period results in residual contamination, whose effective control in produced milk requires validated methods toensure analytical results. The aim of this study was to optimize and validate the HPLC-UV/VIS method at 365 nm for analyzingthe tetracycline in pasteurized cow milk in accordance with the European Community (2002/657/EC). Spiked milk with analytes (oxytetracycline, tetracycline, doxycycline, and chlortetracycline) was submitted to deproteinization and cleaning by a C18 solid-phase column and analyzed by HPLC using a gradient system with 0.01 mol L?1 oxalic acid-acetonitrile-triethylamine (90:9.9:0.1) and acetonitrile on a reverse phase (C18) column. Accuracy and precision were assessed by adding analytes to levels of 0.5, 1, and 1.5 times the permissible maximum limit allowed in Brazil. The method presented selectivity with a decision limit (CC?) and detection capability (CC?) ranging from 114.2 to 143.7 and from 129.3 to 188.7 µg kg?1, respectively. The recovery of tetracyclines was higher than 82.5% with a precision of 7.1%, demonstrating theefficiency in determining tetracycline residues in cow milk.

O uso indiscriminado de antibiótico em gado leiteiro, sem cumprimento do período de carência, resulta em contaminação residual, cujo controle efetivo no leite produzido requer métodos validados que garantam os resultados analíticos. O estudo visou otimizar e validar o método de CLAE-UV/VIS a 365 nm para análise de tetraciclina em leite bovino pasteurizado em conformidade com a Comunidade Europeia (2002/657/EC). O leite fortificado com analitos (oxitetraciclina, tetraciclina, doxiciclina e clortetraciclina) foi submetido à extração por desproteinização e limpeza por coluna de fase sólida C18 e submetido à análise por CLAE empregando sistema gradiente com 0,01 mol L-1 de ácido oxálico-acetonitrila-trietilamina (90:9,9:0,1) e acetonitrila, em coluna de fase reversa (C18). A exatidão e precisão foram avaliadas adicionando o analitos em níveis de 0,5, 1 e 1,5 vezes o limite máximo permitido no Brasil. O método apresentou seletividade com limite de decisão (CC?) e capacidade de detecção (CC?) variando de 114,2 a 143,7 e 129,3 a 188,7 µg kg-1, respectivamente. A recuperação de tetraciclinas foi superior a 82,5% e a precisão de 7,1%, demonstrando eficiência para a determinação de resíduos de tetraciclina em leite bovino.

In-house validation for multi-residue analysis of tetracycline in cow milk by HPLC with UV detection / Validação intralaboratorial para análise múltipla dos resíduos de tetraciclina em leite bovino por cromatografia líquida de alta eficiência com detecção UV

The indiscriminate use of antibiotics in dairy cattle without complying with the waiting period results in residual contamination, whose effective control in produced milk requires validated methods toensure analytical results. The aim of this study was to optimize and validate the HPLC-UV/VIS method at 365 nm for analyzingthe tetracycline in pasteurized cow milk in accordance with the European Community (2002/657/EC). Spiked milk with analytes (oxytetracycline, tetracycline, doxycycline, and chlortetracycline) was submitted to deproteinization and cleaning by a C18 solid-phase column and analyzed by HPLC using a gradient system with 0.01 mol L?1 oxalic acid-acetonitrile-triethylamine (90:9.9:0.1) and acetonitrile on a reverse phase (C18) column. Accuracy and precision were assessed by adding analytes to levels of 0.5, 1, and 1.5 times the permissible maximum limit allowed in Brazil. The method presented selectivity with a decision limit (CC?) and detection capability (CC?) ranging from 114.2 to 143.7 and from 129.3 to 188.7 µg kg?1, respectively. The recovery of tetracyclines was higher than 82.5% with a precision of 7.1%, demonstrating theefficiency in determining tetracycline residues in cow milk.(AU)

O uso indiscriminado de antibiótico em gado leiteiro, sem cumprimento do período de carência, resulta em contaminação residual, cujo controle efetivo no leite produzido requer métodos validados que garantam os resultados analíticos. O estudo visou otimizar e validar o método de CLAE-UV/VIS a 365 nm para análise de tetraciclina em leite bovino pasteurizado em conformidade com a Comunidade Europeia (2002/657/EC). O leite fortificado com analitos (oxitetraciclina, tetraciclina, doxiciclina e clortetraciclina) foi submetido à extração por desproteinização e limpeza por coluna de fase sólida C18 e submetido à análise por CLAE empregando sistema gradiente com 0,01 mol L-1 de ácido oxálico-acetonitrila-trietilamina (90:9,9:0,1) e acetonitrila, em coluna de fase reversa (C18). A exatidão e precisão foram avaliadas adicionando o analitos em níveis de 0,5, 1 e 1,5 vezes o limite máximo permitido no Brasil. O método apresentou seletividade com limite de decisão (CC?) e capacidade de detecção (CC?) variando de 114,2 a 143,7 e 129,3 a 188,7 µg kg-1, respectivamente. A recuperação de tetraciclinas foi superior a 82,5% e a precisão de 7,1%, demonstrando eficiência para a determinação de resíduos de tetraciclina em leite bovino.(AU)

Atividade antisséptica do óleo essencial de Lippia origanoides Cham. (Alecrim-pimenta) na presença de leite bovino / Antiseptic activity of the essential oil of Lippia origanoides in the presence of bovine milk

Objetivou-se determinar atividade antisséptica do óleo essencial de Lippia origanoides na presença de leite bovino. A composição química do óleo essencial de alecrim pimenta foi determinada por cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas (CG-EM), sendo detectados 53 compostos, dos quais 16 foram identificados (>0,1% área total). O carvacrol (32,7%), p-cimeno (23%), timilmetil éter, cariofileno (7,98%) e o γ-terpineno (5,40%) foram os componentes mais abundantes. A concentração inibitória mínima para Staphylococcus aureus ATCC 25923 e E. coli ATCC 8739 foi de 60µL/mL, enquanto para Salmonella Choleraesuis ATCC 35640 foi de 90µL/mL. A concentração bactericida mínima foi de 120µL/mL para as três bactérias. Avaliou-se a atividade antisséptica do óleo essencial na concentração de 120µL/mL na presença de leite bovino sobre as mesmas cepas bacterianas. O óleo em estudo apresentou efeito inibitório do crescimento das cepas em diferentes tempos de ação (p<0,05). S. aureus apresentou maiores índices de inibição após 5 min de contato e Escherichia coli e Salmonella Choleraesuis após 15 min. O óleo essencial de alecrim-pimenta revelou ser um potencial antimicrobiano natural, mesmo na presença de matéria orgânica constituída de uma matriz nutricional complexa que é o leite bovino.(AU)

This study aimed to determine the antiseptic activity of the essential oil of Lippia origanoides in the presence of bovine milk. The essential oil chemical composition was determined by gas chromatography-mass spectrometry (CG EM) 53 compounds were detected, of which 16 were identified (>0.1% total area). The carvacrol (32.7%), p-cymene (23%), thymil methyl ether (10.03%), caryophyllene (7.98 %) and γ-terpinene (5.40%) were the most abundant components. The minimum inhibitory concentration for Staphylococcus aureus ATCC 25923 and Escherichia coli ATCC 8739 was 60uL/mL, as for this Salmonella Choleraesuis ATCC 35640 was 90uL/mL. The minimum bactericidal concentration was 120µL/mL for all three bacteria. We evaluated the antiseptic activity of the essential oil in the concentration of 120µL/mL in the presence of bovine milk for the same bacterial strains. The oil under study It showed an inhibitory effect of growth of the strains in different action times (p <0.05). S. aureus showed higher inhibition rates after 5 min of contact and E. coli and Salmonella Choleraesuis after 15 min. The essential oil Lippia origanoides proved to be a natural antimicrobial potential even in the presence of organic matter consists of a complex nutritional matrix is bovine milk.(AU)

Atividade antisséptica do óleo essencial de Lippia origanoides Cham. (Alecrim-pimenta) na presença de leite bovino / Antiseptic activity of the essential oil of Lippia origanoides in the presence of bovine milk

This study aimed to determine the antiseptic activity of the essential oil of Lippia origanoides in the presence of bovine milk. The essential oil chemical composition was determined by gas chromatography-mass spectrometry (CG EM) 53 compounds were detected, of which 16 were identified (>0.1% total area). The carvacrol (32.7%), p-cymene (23%), thymil methyl ether (10.03%), caryophyllene (7.98 %) and γ-terpinene (5.40%) were the most abundant components. The minimum inhibitory concentration for Staphylococcus aureus ATCC 25923 and Escherichia coli ATCC 8739 was 60uL/mL, as for this Salmonella Choleraesuis ATCC 35640 was 90uL/mL. The minimum bactericidal concentration was 120μL/mL for all three bacteria. We evaluated the antiseptic activity of the essential oil in the concentration of 120μL/mL in the presence of bovine milk for the same bacterial strains. The oil under study It showed an inhibitory effect of growth of the strains in different action times (p <0.05). S. aureus showed higher inhibition rates after 5 min of contact and E. coli and Salmonella Choleraesuis after 15 min. The essential oil Lippia origanoides proved to be a natural antimicrobial potential even in the presence of organic matter consists of a complex nutritional matrix is bovine milk.(AU)

Objetivou-se determinar atividade antisséptica do óleo essencial de Lippia origanoides na presença de leite bovino. A composição química do óleo essencial de alecrim pimenta foi determinada por cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas (CG-EM), sendo detectados 53 compostos, dos quais 16 foram identificados (>0,1% área total). O carvacrol (32,7%), p-cimeno (23%), timilmetil éter, cariofileno (7,98%) e o γ-terpineno (5,40%) foram os componentes mais abundantes. A concentração inibitória mínima para Staphylococcus aureus ATCC 25923 e E. coli ATCC 8739 foi de 60μL/mL, enquanto para Salmonella Choleraesuis ATCC 35640 foi de 90μL/mL. A concentração bactericida mínima foi de 120μL/mL para as três bactérias. Avaliou-se a atividade antisséptica do óleo essencial na concentração de 120μL/mL na presença de leite bovino sobre as mesmas cepas bacterianas. O óleo em estudo apresentou efeito inibitório do crescimento das cepas em diferentes tempos de ação (p<0,05). S. aureus apresentou maiores índices de inibição após 5 min de contato e Escherichia coli e Salmonella Choleraesuis após 15 min. O óleo essencial de alecrim-pimenta revelou ser um potencial antimicrobiano natural, mesmo na presença de matéria orgânica constituída de uma matriz nutricional complexa que é o leite bovino.(AU)

Qualidade e segurança microbiológica de derivados lácteos fermentados de origem bovina produzidos no Distrito Federal, Brasil / Quality and microbiological safety of fermented bovine dairy produced in Federal District, Brazil

Considerando a crescente importância dos derivados lácteos fermentados no mercado nacional e a escassez de dados no Distrito Federal (DF), foi avaliada a qualidade e a segurança microbiológica destes produtos no DF e sua adequação aos padrões vigentes. O estudo foi desenvolvido em cinco laticínios sendo coletadas 105 amostras de derivados lácteos fermentados correspondentes a 21 lotes (n=5 por lote), com 65 amostras de iogurte, 20 de coalhada e 20 de bebida láctea fermentada. Todas as amostras foram submetidas à contagem de aeróbios mesófilos, psicrotróficos, coliformes a 35°C, Escherichia coli, Staphylococcus coagulase positivo, Salmonella spp., bolores, leveduras e bactérias ácido-láticas viáveis (BAL). Do total de lotes analisados, 62% foram considerados aceitáveis segundo as Instruções Normativas n° 46/2007 e n° 16/2005. Em ordem de qualidade, a bebida láctea fermentada foi a que apresentou mais lotes aptos ao consumo (75%), seguido do iogurte (61,5%) e, por último, da coalhada (50%). Por unidades amostrais, os resultados demonstraram que: 17% amostras de iogurtes, 15% de coalhada e 20% de bebida láctea fermentada apresentaram contagens de CT acima do permitido; 11% amostras de iogurtes e 30% de bebida láctea fermentada apresentaram contagens de BAL abaixo dos limites mínimos específicos; e 61% amostras de iogurtes e 30% de coalhada estavam com contagens de bolores e leveduras acima do permitido. Nenhuma amostra apresentou desenvolvimento de E. coli ou de Salmonella spp. Apesar da ausência de perigos microbiológicos nas amostras analisadas, o estudo realizado indica problemas na produção desses derivados no DF que podem estar relacionadas a deficiências na higiene dos processos, sendo necessário maior rigor nos controles de qualidade dos laticínios e na fiscalização das indústrias.(AU)

Considering the growing importance of fermented dairy products in the domestic market and the scarcity of data in the Federal District (DF), it was evaluated the quality and microbiological safety of these products in the DF and its adaptation to current standards. The study was conducted in five dairy being collected 105 samples of fermented dairy products corresponding to 21 lots (n = 5 per lot), with 65 samples of yogurt, 20 of curd and 20 of fermented dairy drink. All samples were submitted to a count of aerobic mesophilic, psychrotrophic, coliforms at 35 ° C, Escherichia coli, Staphylococcus coagulase positive, Salmonella spp., molds, yeasts and viable lactic acid bacteria (BAL). The total lots analyzed, 62% were considered acceptable under the Regulatory Instructions n ° 46/2007 and n ° 16/2005. In order of quality, fermented dairy drink was the one with lots more apt to consumption (75%) followed by yoghurt (61.5%) and, lastly, curd (50%). For samples units, the results showed that: 17% of yoghurt samples, 15% of curd and 20% of fermented dairy drink showed scores above the allowed CT; 11% of yoghurt samples and 30% of fermented dairy drink showed BAL counts below specific minimum limits; and 61% samples of yogurt and curd were 30% of curd was with yeasts and molds counts above permitted. No samples showed the development of E. coli or Salmonella spp. Despite the absence of microbiological hazards in the samples analyzed, the study indicates problems in the production of these products in the DF that may be related to deficiencies in hygienic of the processes, most rigor in the quality controls of dairy and oversight of industries is needed.(AU)

Occurrence of aflatoxin M1 in bovine milk commercialized in the Parana State, Brazil / Ocorrência de aflatoxina M1 em leite bovino comercializado no estado do Paraná, Brasil

The objective of this study was evaluate the presence of AFM1 in 82 samples of pasteurized bovine milk commercialized in 11 municipalities in the State of Parana, Brazil, from March 2010 to May 2011. Analytical methodology used was the enzyme immunoassay to determine qualitatively the presence of AFM1 (detection limit = 0.05 ?g.kg-1). AFM1 was not detected in any sample. The results were satisfactory. However, there is need for monitoring by government agencies, in order to provide safety, quality and integrity for human health.(AU)

O objetivo deste trabalho foi avaliar a presença de aflatoxina M1 em 82 amostras de leite bovino pasteurizado, coletadas no período de março/2010 a maio/2011 em 11 municípios do Estado do Paraná, Brasil. A metodologia analítica utilizada foi o ensaio imunoenzimático empregada para determinar qualitativamente a presença de AFM1 (limite de detecção = 0,05 ?g.kg-1). AFM1 não foi detectada em nenhuma das amostras avaliadas. Apesar dos resultados satisfatórios, se faz necessário a realização de uma vigilância ativa desta micotoxina, a fim de proporcionar segurança, qualidade e integridade a saúde humana.(AU)

Occurrence of aflatoxin M1 in bovine milk commercialized in the Parana State, Brazil / Ocorrência de aflatoxina M1 em leite bovino comercializado no estado do Paraná, Brasil

The objective of this study was evaluate the presence of AFM1 in 82 samples of pasteurized bovine milk commercialized in 11 municipalities in the State of Parana, Brazil, from March 2010 to May 2011. Analytical methodology used was the enzyme immunoassay to determine qualitatively the presence of AFM1 (detection limit = 0.05 ?g.kg-1). AFM1 was not detected in any sample. The results were satisfactory. However, there is need for monitoring by government agencies, in order to provide safety, quality and integrity for human health.

O objetivo deste trabalho foi avaliar a presença de aflatoxina M1 em 82 amostras de leite bovino pasteurizado, coletadas no período de março/2010 a maio/2011 em 11 municípios do Estado do Paraná, Brasil. A metodologia analítica utilizada foi o ensaio imunoenzimático empregada para determinar qualitativamente a presença de AFM1 (limite de detecção = 0,05 ?g.kg-1). AFM1 não foi detectada em nenhuma das amostras avaliadas. Apesar dos resultados satisfatórios, se faz necessário a realização de uma vigilância ativa desta micotoxina, a fim de proporcionar segurança, qualidade e integridade a saúde humana.

Qualidade e segurança microbiológica de derivados lácteos fermentados de origem bovina produzidos no Distrito Federal, Brasil / Quality and microbiological safety of fermented bovine dairy produced in Federal District, Brazil

Considerando a crescente importância dos derivados lácteos fermentados no mercado nacional e a escassez de dados no Distrito Federal (DF), foi avaliada a qualidade e a segurança microbiológica destes produtos no DF e sua adequação aos padrões vigentes. O estudo foi desenvolvido em cinco laticínios sendo coletadas 105 amostras de derivados lácteos fermentados correspondentes a 21 lotes (n=5 por lote), com 65 amostras de iogurte, 20 de coalhada e 20 de bebida láctea fermentada. Todas as amostras foram submetidas à contagem de aeróbios mesófilos, psicrotróficos, coliformes a 35°C, Escherichia coli, Staphylococcus coagulase positivo, Salmonella spp., bolores, leveduras e bactérias ácido-láticas viáveis (BAL). Do total de lotes analisados, 62% foram considerados aceitáveis segundo as Instruções Normativas n° 46/2007 e n° 16/2005. Em ordem de qualidade, a bebida láctea fermentada foi a que apresentou mais lotes aptos ao consumo (75%), seguido do iogurte (61,5%) e, por último, da coalhada (50%). Por unidades amostrais, os resultados demonstraram que: 17% amostras de iogurtes, 15% de coalhada e 20% de bebida láctea fermentada apresentaram contagens de CT acima do permitido; 11% amostras de iogurtes e 30% de bebida láctea fermentada apresentaram contagens de BAL abaixo dos limites mínimos específicos; e 61% amostras de iogurtes e 30% de coalhada estavam com contagens de bolores e leveduras acima do permitido. Nenhuma amostra apresentou desenvolvimento de E. coli ou de Salmonella spp. Apesar da ausência de perigos microbiológicos nas amostras analisadas, o estudo realizado indica problemas na produção desses derivados no DF que podem estar relacionadas a deficiências na higiene dos processos, sendo necessário maior rigor nos controles de qualidade dos laticínios e na fiscalização das indústrias.

Considering the growing importance of fermented dairy products in the domestic market and the scarcity of data in the Federal District (DF), it was evaluated the quality and microbiological safety of these products in the DF and its adaptation to current standards. The study was conducted in five dairy being collected 105 samples of fermented dairy products corresponding to 21 lots (n = 5 per lot), with 65 samples of yogurt, 20 of curd and 20 of fermented dairy drink. All samples were submitted to a count of aerobic mesophilic, psychrotrophic, coliforms at 35 ° C, Escherichia coli, Staphylococcus coagulase positive, Salmonella spp., molds, yeasts and viable lactic acid bacteria (BAL). The total lots analyzed, 62% were considered acceptable under the Regulatory Instructions n ° 46/2007 and n ° 16/2005. In order of quality, fermented dairy drink was the one with lots more apt to consumption (75%) followed by yoghurt (61.5%) and, lastly, curd (50%). For samples units, the results showed that: 17% of yoghurt samples, 15% of curd and 20% of fermented dairy drink showed scores above the allowed CT; 11% of yoghurt samples and 30% of fermented dairy drink showed BAL counts below specific minimum limits; and 61% samples of yogurt and curd were 30% of curd was with yeasts and molds counts above permitted. No samples showed the development of E. coli or Salmonella spp. Despite the absence of microbiological hazards in the samples analyzed, the study indicates problems in the production of these products in the DF that may be related to deficiencies in hygienic of the processes, most rigor in the quality controls of dairy and oversight of industries is needed.

Leite instável não ácido: um problema solucionável? / Unstable non acid milk: a solvable problem?

O objetivo deste trabalho é apresentar os principais resultados da pesquisa sobre o leite instável não ácido ou LINA. A proporção de amostras de leite com estabilidade térmica, abaixo do mínimo exigido pela indústria brasileira, configura um sério problema, com uma ocorrência mais elevada durante os períodos de carência alimentar. Trata-se de um problema multifatorial, cujos fatores intervenientes são relacionados à execução do teste (concentração do álcool), ao manejo (alimentação, clima, relação homem-animal), ao animal (suscetibilidade ao estresse, potencial produtivo, estádio da lactação, sanidade, problemas digestivos e metabólicos, frações da caseína), entre outros. Existem dúvidas quanto à capacidade do teste do álcool em estimar a estabilidade térmica do leite. A indústria necessita de um teste rápido, de baixo custo e que realmente identifique o leite adequado ao processamento térmico. O manejo correto dos animais, aliado ao uso de parâmetros realistas de execução do teste do álcool, pode contribuir para melhorar a estabilidade do leite.

This paper aimed to present the main results about the unstable non acid milk (LINA). The proportion of milk samples with thermal stability below the Brazilian dairy industry standard is a serious problem, with highest occurrence at short food supply periods. It is a multi factorial problem, which causing factors are related to test execution (ethanol concentration used), to management (feeding, climate, human-animal relation), to animal (stress susceptibility, productive potential, lactation stage, sanitary condition, digestive and metabolic disorders), among others. There are doubts to the accuracy and precision of the alcohol test to detect stability problems. Dairy industry needs a fast, low price and easy test, but that can identify milk suitable to thermal processing. An adequate animal's management besides realistic parameters of milk test might contribute to improve milk stability.

Leite instável não ácido: um problema solucionável? / Unstable non acid milk: a solvable problem?

O objetivo deste trabalho é apresentar os principais resultados da pesquisa sobre o leite instável não ácido ou LINA. A proporção de amostras de leite com estabilidade térmica, abaixo do mínimo exigido pela indústria brasileira, configura um sério problema, com uma ocorrência mais elevada durante os períodos de carência alimentar. Trata-se de um problema multifatorial, cujos fatores intervenientes são relacionados à execução do teste (concentração do álcool), ao manejo (alimentação, clima, relação homem-animal), ao animal (suscetibilidade ao estresse, potencial produtivo, estádio da lactação, sanidade, problemas digestivos e metabólicos, frações da caseína), entre outros. Existem dúvidas quanto à capacidade do teste do álcool em estimar a estabilidade térmica do leite. A indústria necessita de um teste rápido, de baixo custo e que realmente identifique o leite adequado ao processamento térmico. O manejo correto dos animais, aliado ao uso de parâmetros realistas de execução do teste do álcool, pode contribuir para melhorar a estabilidade do leite.(AU)

This paper aimed to present the main results about the unstable non acid milk (LINA). The proportion of milk samples with thermal stability below the Brazilian dairy industry standard is a serious problem, with highest occurrence at short food supply periods. It is a multi factorial problem, which causing factors are related to test execution (ethanol concentration used), to management (feeding, climate, human-animal relation), to animal (stress susceptibility, productive potential, lactation stage, sanitary condition, digestive and metabolic disorders), among others. There are doubts to the accuracy and precision of the alcohol test to detect stability problems. Dairy industry needs a fast, low price and easy test, but that can identify milk suitable to thermal processing. An adequate animal's management besides realistic parameters of milk test might contribute to improve milk stability.(AU)

Avaliação de testes rápidos para análises da contagem de células somáticas de leite cru de tanques / Evaluate of rapid test for analysis of somatic cell count of bulk tank milk

Objetivou-se analisar a confiabilidade de testes alternativos para detecção da mastite subclínica em leite cru de tanques de resfriamento. No período de janeiro a maio de 2011, foram coletadas mensalmente amostras de leite cru de tanques de resfriamento em dez propriedades localizadas na região agreste no Estado do Rio Grande do Norte. As análises de contagem de células somáticas (CCS) foram obtidas pelo Somaticell®,DeLaval Cell Count® (DCC) e pela contagem eletrônica de células somáticas por citometria de fluxo, sendo esta última usada como metodologia padrão. Foram calculadas a sensibilidade, especificidade, valores preditivos positivos e negativos dos testes Somaticell®e DCC®. Que apresentou valores de70%, 77%, 46%,90%e 86%, 82%, 50%, 96%, respectivamente. Verificou-se ainda, o coeficiente Kappa para análise de concordância entre os testes, em que, k=0,40 para o Somaticell®ek=0,52 para o DCC®. Os testes apresentaram resultados satisfatórios como metodologia alternativa para determinação da CCS em leite cru de tanques de resfriamento.

The objective was to evaluate the reliability of alternative tests for detection of subclinical mastitis on bulk tank milk. In the period from January to may 2011, monthly samples were collected from bulk tank milk in ten properties located in the region agreste in the state of Rio Grande do Norte. Analyses of somatic cell count (SCC) were obtained by Somaticell®,DeLavalCellCount®(DCC) and the electronic counting of somatic cellsby flow cytometry, the latter being used as standard methodology.We calculated the sensitivity, specificity, positive and negative predictive valuesof the tests Somaticell® and DCC®. That showed values of70%, 77%, 46%, 90% and 86%, 82%, 50%, 96%, respectively. It was alsothe Kappa coefficientforagreement analysisbetween tests, inwhich, k= 0.40forSomaticell®and k= 0.52forDCC®. The tests showed satisfactory results as an alternative methodology for determination ofSCC inbulk tank milk.

Diversity and enzyme production by yeasts isolated from raw milk in Southern Brazil

Raw milk is generally considered an ideal environment for the growth of many microorganisms because of its nutrient richness. Although there have been numerous reports on the occurrence of yeasts in dairy products in the world, few have attempted to determine the diversity of these microorganisms in samples from raw milk, mainly in Brazil. Thirty six samples were collected from 25 dairy farms located at different districts of Rio Grande do Sul, during a period of 5 months. A total of 80 isolates were obtained and identified according to standard methods. Of these, 63 strains corresponded to true yeasts (51 with ascomycetic and 12 with basidiomycetic affinity), and 17 isolates were recognized as yeast-like strains. Yeast distribution was uneven among the producers analyzed. The most frequent yeasts isolated in this study belong to the genera Kluyveromyces, Rhodotorula, Candida, Geotrichum, and Trichosporon. The high frequency of isolation of Geotrichum and Trichosporon from raw milk is of great concern. Almost 79% of our isolates were lipolytic, while only 6% were proteolytic. Although these microorganisms are not expected to survive the pasteurization/sterilization treatments applied during milk processing, their enzymatic activities may alter milk constituents and affect its quality.

Diversity and enzyme production by yeasts isolated from raw milk in Southern Brazil

Raw milk is generally considered an ideal environment for the growth of many microorganisms because of its nutrient richness. Although there have been numerous reports on the occurrence of yeasts in dairy products in the world, few have attempted to determine the diversity of these microorganisms in samples from raw milk, mainly in Brazil. Thirty six samples were collected from 25 dairy farms located at different districts of Rio Grande do Sul, during a period of 5 months. A total of 80 isolates were obtained and identified according to standard methods. Of these, 63 strains corresponded to true yeasts (51 with ascomycetic and 12 with basidiomycetic affinity), and 17 isolates were recognized as yeast-like strains. Yeast distribution was uneven among the producers analyzed. The most frequent yeasts isolated in this study belong to the genera Kluyveromyces, Rhodotorula, Candida, Geotrichum, and Trichosporon. The high frequency of isolation of Geotrichum and Trichosporon from raw milk is of great concern. Almost 79% of our isolates were lipolytic, while only 6% were proteolytic. Although these microorganisms are not expected to survive the pasteurization/sterilization treatments applied during milk processing, their enzymatic activities may alter milk constituents and affect its quality.