Conceptos de criobiología y fisiología ovárica en la preservación de la fertilidad / Concepts of cryobiology and ovarian physiology in fertility preservation

La criobiología se enfoca en entender cómo reaccionan los materiales biológicos a temperaturas muy bajas. Este campo ha experimentado avances significativos, particularmente en el ámbito de la reproducción asistida, donde se han desarrollado programas para preservar la fertilidad. Estos desarrollos revisten importancia crítica para quienes exploran alternativas en materia de fertilidad y preservación de gametos. Por otro lado, la preservación de la fertilidad tiene como objetivo proteger la capacidad reproductiva de una persona por diferentes condiciones de salud, tratamientos médicos o razones sociales que la puedan comprometer. Las técnicas aceptadas para la preservación de fertilidad en humanos son la criopreservación de gametos y de embriones. Existe evidencia prometedora creciente sobre distintas técnicas experimentales dentro de este campo, como la crioconservación del tejido gonadal, o estrategias de maduración in vitro, así como nuevas metodologías en los protocolos criogénicos que supondrán una optimización de los resultados y un punto de inflexión dentro del campo de la reproducción asistida. Este trabajo tiene como objetivo explorar el estado del arte de las estrategias actuales ofrecidas a las mujeres en el contexto de preservación de la fertilidad, revisar los avances en criobiología y su papel en la evolución de este ámbito.(AU)

Cryobiology focuses on understanding how biological materials react to very low temperatures. This field has experienced significant advances, particularly in the field of assisted reproduction, where programs have been developed to preserve fertility. These developments are of critical importance for those exploring alternatives in fertility and gamete preservation. Fertility preservation aims to protect a person's reproductive capacity under various health conditions, medical treatments, and social reasons that may compromise it. Accepted techniques for human fertility preservation include the cryopreservation of gametes and embryos. There is growing promising evidence on different experimental techniques within this field, such as cryopreservation of gonadal tissue or in vitro maturation strategies, as well as new methodologies in cryogenic protocols that will optimize results and mark a turning point in the field of assisted reproduction. This work aims to explore the current state-of-the-art strategies offered to women in the context of fertility preservation, review advances in cryobiology, and its role in the evolution of this area.(AU)

Preservación de la fertilidad en el tumor ovárico borderline / Fertility preservation in borderline ovarian tumors

Los tumores ováricos borderline (TOBL) son definidos como «tumores de bajo potencial maligno». Se trata de neoplasias epiteliales que debutan principalmente en mujeres jóvenes, siendo habitualmente diagnosticados en estadios iniciales de la enfermedad. La clave principal de su tratamiento es la cirugía, viéndose así comprometida la fertilidad de la paciente que no ha cumplido su deseo genésico. En general, la elección de la cirugía para los TOBL debe considerar las características del tumor, los deseos de fertilidad de la paciente y la extensión de la enfermedad. Las decisiones tomadas al respecto deben ser individualizadas y asesoradas por un equipo multidisciplinar. La preservación de la fertilidad (PF) juega un papel importante en el manejo de estas pacientes, existiendo distintas estrategias para mejorar y mantener su calidad de vida. El asesoramiento reproductivo debería ser una parte integral del manejo clínico, debiendo considerarse cuidadosamente los riesgos y beneficios. Dada su baja incidencia existe poca literatura al respecto, necesitándose estudios prospectivos bien diseñados para abordar los problemas específicos de fertilidad tanto en el diagnóstico inicial como en las recurrencias de los pacientes con TOBL.(AU)

Borderline ovarian tumors (BOTs) are defined as “tumors of low malignant potential”. These are epithelial neoplasms that debut mainly in young women, and are usually diagnosed in the initial stages of the disease. The main key to its treatment is surgery, thus compromising the fertility of the patient who has not fulfilled her reproductive desire. In general, the choice of surgery for BOTs should consider the characteristics of the tumor, the patient's fertility desires, and the extent of the disease. The decisions made in this regard must be individualized and advised by a multidisciplinary team. Fertility preservation (FP) plays an important role in the management of these patients, and there are different strategies to improve and maintain their quality of life. Reproductive counseling should be an integral part of clinical management, with risks and benefits carefully considered. Given its low incidence, there is little literature on the matter, requiring well-designed prospective studies to address specific fertility problems both in the initial diagnosis and in recurrences of patients with BOTs.(AU)

Preservación de la fertilidad en personas transgénero del espectro masculino. Revisión narrativa de la literatura / Fertility preservation in transmasculine people: Narrative review

La terapia hormonal de afirmación de género con testosterona (GAHT, por sus siglas en inglés) permite, a las personas transgénero del espectro masculino, modificar las características sexuales secundarias del sexo asignado al nacer, aliviando así los síntomas de la disforia de género durante el proceso denominado transición. Sin embargo, se debe tener presente que se desconoce, en la actualidad, el efecto de la GAHT sobre la fertilidad a largo plazo, y el potencial efecto gonadotóxico de la misma. La demanda de un correcto asesoramiento reproductivo y la opción de realizar técnicas de preservación de la fertilidad (PF) han aumentado de forma exponencial en los últimos años, comportando cambios profundos en el manejo clínico de estas personas. En este artículo se realiza una revisión bibliográfica sobre el efecto de la GAHT a nivel reproductivo y en la fertilidad, junto con las técnicas de PF disponibles en este colectivo, principalmente la vitrificación de ovocitos. Además, realizamos un análisis de los resultados reproductivos publicados hasta la fecha tras el uso de técnicas de preservación, y exponemos los últimos avances de laboratorio en relación con la criopreservación de tejido ovárico y la maduración in vitro de ovocitos, junto con las opciones de futuro en población transgénero del espectro masculino.(AU)

Gender affirming hormone therapy (GAHT) in transmasculine people (individuals who identify as men or on the masculine spectrum and were assigned female sex at birth) makes it possible to modify the secondary sexual characteristics of the sex assigned at birth, thus alleviating the symptoms of gender dysphoria, during the process called transition. However, it is necessary to highlight that the effect of GAHT on long-term fertility and its potential gonadotoxic effects are currently unknown. Knowledge of the effects of testosterone on fertility and reproduction has increased recently, whilst the request for comprehensive reproductive counselling and the option of performing fertility preservation (FP) techniques have increased exponentially in recent years, leading to profound changes in the clinical management of this population. In this review, we analyzed all the information published regarding the effect of GAHT on reproduction and the FP techniques available in this group, mainly oocyte vitrification. In addition, we carry out an exhaustive analysis of the reproductive results published to date after the use of preservation techniques and present the latest laboratory advances concerning ovarian tissue cryopreservation and in vitro oocyte maturation, together with future options in the transmasculine people.(AU)

Fertility preservation in endometriosis: Review of current evidence and best practices / Preservación de la fertilidad en la endometriosis: revisión de la evidencia actual

In recent decades, the field of female fertility preservation has experienced substantial growth. Reliable techniques such as cryopreservation of oocytes and ovarian tissue have emerged, along with more established methods such as embryo freezing. Among the group of patients who can benefit from these new techniques are patients with endometriosis, a common disease capable of compromising ovarian reserve and fertility prospects. Unfortunately, comprehensive recommendations for fertility preservation in patients with endometriosis are still lacking. This narrative review comprehensively explores fertility preservation in patients with endometriosis, using a range of relevant literature, including available national and international guidelines. Additionally, it explains the weight of several factors that contribute to the decision-making process for fertility preservation, including age, severity of endometriosis, ovarian reserve, and previous or future surgery. This manuscript summarizes available recommendations that provide guidance for this vital but challenging aspect of reproductive medicine. Underlines the need for personalized care for patients with an early diagnosis of endometriosis and initial medical treatment to try to reduce the deterioration of ovarian reserve and emphasizes the importance of research to refine fertility preservation strategies in people with endometriosis.(AU)

En las últimas décadas, el campo de la preservación de la fertilidad femenina ha experimentado un crecimiento sustancial. Han surgido técnicas fiables, como la criopreservación de ovocitos y tejido ovárico, junto con algunas más establecidas como la congelación de embriones. Entre el grupo de pacientes que se pueden beneficiar de estos nuevos métodos, están aquellas con endometriosis, una enfermedad frecuente y capaz de comprometer la reserva ovárica y las perspectivas de fertilidad. Desafortunadamente, todavía faltan recomendaciones integrales para la preservación de esta en pacientes con endometriosis. Esta revisión narrativa explora exhaustivamente la conservación de la fertilidad en pacientes con endometriosis, utilizando una variedad de literatura pertinente, incluidas las pautas nacionales e internacionales disponibles. Además, explica el peso de varios factores que contribuyen al proceso de toma de decisiones para conservar la fertilidad, incluida la edad, la gravedad de la endometriosis, la reserva ovárica y la cirugía previa o futura. Este manuscrito, resume las recomendaciones disponibles que brindan orientación para este aspecto vital pero desafiante de la medicina reproductiva. Subraya la necesidad de una atención personalizada a la paciente con un diagnóstico de endometriosis precoz y un tratamiento inicial médico para intentar disminuir el deterioro de la reserva ovárica y enfatiza la importancia de la investigación para refinar las estrategias de preservación de la fertilidad en las personas que presentan endometriosis.(AU)

Leptin and prolactin reduce cryodamage in normozoospermic human semen samples during cryopreservation / La leptina y la prolactina reducen el criodaño en muestras de semen humano normozoospérmico durante la criopreservación

Objectives: Cryopreservation has destructive effects on the function and structure of spermatozoa. It is known that leptin and prolactin play an active role in decreasing the rates of reactive oxygen species and DNA fragmentation, as well as enhancing sperm motility. Hence, this experiment aimed to investigate the effects of leptin and prolactin as pro-survival factors on the normozoospermic human semen samples during cryopreservation. Material and methods: Semen samples were collected from 15 healthy, fertile men ranging from 25 to 40 years. Cryopreservation of the samples was performed in liquid nitrogen over a period of two weeks, using five varying concentrations of leptin/prolactin, 0, 10, 100, 500, and 1000ng/ml respectively. Sperm motility, total caspase activity, and mitochondrial and cytosolic ROS were measured by flowcytometry, TUNEL, and other appropriate tests after thawing of the samples. Results: Both hormones were observed to have positive effects on the motility of the samples post-cryopreservation, the highest improvement being in the 100ng/ml concentration leptin and prolactin in comparison to the control group (P=0.01 and P=0.041, respectively). A significant reduction of mitochondrial ROS was also observed in 100 and 1000ng/ml of leptin (P=0.042), and there was a considerable decrease in the cytosolic ROS in the 100ng/ml of prolactin in comparison to the control group (P=0.048). Total caspase activity was also highly reduced in the 100, 500, and 1000ng/ml of leptin compared to the control group (P=0.039). Interestingly, both hormones also significantly decreased DNA fragmentation in 1000ng/ml compared to the control group (P=0.042). (AU)

Objetivos: La criopreservación tiene efectos destructivos sobre la función y estructura de los espermatozoides. Se sabe que la leptina y la prolactina desempeñan un papel activo en la disminución de las tasas de especies reactivas de oxígeno (ROS) y la fragmentación del ADN, así como en la mejora de la motilidad de los espermatozoides. Por lo tanto, este experimento tuvo como objetivo investigar los efectos de la leptina y la prolactina como factores de supervivencia en las muestras de semen humano normozoospérmico durante la criopreservación. Material y métodos: Se recolectaron muestras de semen de 15 hombres sanos y fértiles de entre 25 y 40 años. La crioconservación de las muestras se realizó en nitrógeno líquido durante un período de 2 semanas, utilizando 5 concentraciones variables de leptina/prolactina: 0, 10, 100, 500 y 1000ng/ml respectivamente. La motilidad de los espermatozoides, la actividad de caspasa total y las ROS mitocondriales y citosólicas se midieron mediante citometría de flujo, TUNEL y otras pruebas apropiadas después de descongelar las muestras. Resultados: Se observó que ambas hormonas tienen efectos positivos sobre la motilidad de las muestras después de la crioconservación, la mayor mejora se encuentra en la concentración de leptina y prolactina de 100ng/ml en comparación con el grupo de control (p=0,01 y p=0,041, respectivamente). También se observó una reducción significativa de las ROS mitocondriales en 100 y 1000ng/ml de leptina (p=0,042), y hubo una disminución considerable en las ROS citosólicas en los 100ng/ml de prolactina en comparación con el grupo de control (p=0,048). La actividad de la caspasa total también se redujo considerablemente en los 100, 500 y 1000ng/ml de leptina en comparación con el grupo de control (p=0,039). Curiosamente, ambas hormonas también redujeron significativamente la fragmentación del ADN en 1000ng/ml en comparación con el grupo de control (p=0,042). (AU)

Leptin and prolactin reduce cryodamage in normozoospermic human semen samples during cryopreservation.

OBJECTIVES: Cryopreservation has destructive effects on the function and structure of spermatozoa. It is known that leptin and prolactin play an active role in decreasing the rates of reactive oxygen species and DNA fragmentation, as well as enhancing sperm motility. Hence, this experiment aimed to investigate the effects of leptin and prolactin as pro-survival factors on the normozoospermic human semen samples during cryopreservation. MATERIAL AND METHODS: Semen samples were collected from 15 healthy, fertile men ranging from 25 to 40 years. Cryopreservation of the samples was performed in liquid nitrogen over a period of two weeks, using five varying concentrations of leptin/prolactin, 0, 10, 100, 500, and 1000ng/ml respectively. Sperm motility, total caspase activity, and mitochondrial and cytosolic ROS were measured by flowcytometry, TUNEL, and other appropriate tests after thawing of the samples. RESULTS: Both hormones were observed to have positive effects on the motility of the samples post-cryopreservation, the highest improvement being in the 100ng/ml concentration leptin and prolactin in comparison to the control group (P=0.01 and P=0.041, respectively). A significant reduction of mitochondrial ROS was also observed in 100 and 1000ng/ml of leptin (P=0.042), and there was a considerable decrease in the cytosolic ROS in the 100ng/ml of prolactin in comparison to the control group (P=0.048). Total caspase activity was also highly reduced in the 100, 500, and 1000ng/ml of leptin compared to the control group (P=0.039). Interestingly, both hormones also significantly decreased DNA fragmentation in 1000ng/ml compared to the control group (P=0.042). CONCLUSION: It can be concluded that leptin and prolactin act as protective agents against cryodamage to spermatozoa during cryopreservation.

Modeling genetic benefits and financial costs of integrating biobanking into the conservation breeding of managed marsupials.

Managed breeding programs are an important tool in marsupial conservation efforts but may be costly and have adverse genetic effects in unavoidably small captive colonies. Biobanking and assisted reproductive technologies (ARTs) could help overcome these challenges, but further demonstration of their potential is required to improve uptake. We used genetic and economic models to examine whether supplementing hypothetical captive populations of dibblers (Parantechinus apicalis) and numbats (Myrmecobius fasciatus) with biobanked founder sperm through ARTs could reduce inbreeding, lower required colony sizes, and reduce program costs. We also asked practitioners of the black-footed ferret (Mustela nigripes) captive recovery program to complete a questionnaire to examine the resources and model species research pathways required to develop an optimized biobanking protocol in the black-footed ferret. We used data from this questionnaire to devise similar costed research pathways for Australian marsupials. With biobanking and assisted reproduction, inbreeding was reduced on average by between 80% and 98%, colony sizes were on average 99% smaller, and program costs were 69- to 83-fold lower. Integrating biobanking made long-standing captive genetic retention targets possible in marsupials (90% source population heterozygosity for a minimum of 100 years) within realistic cost frameworks. Lessons from the use of biobanking technology that contributed to the recovery of the black-footed ferret include the importance of adequate research funding (US$4.2 million), extensive partnerships that provide access to facilities and equipment, colony animals, appropriate research model species, and professional and technical staff required to address knowledge gaps to deliver an optimized biobanking protocol. Applied research investment of A$133 million across marsupial research pathways could deliver biobanking protocols for 15 of Australia's most at-risk marsupial species and 7 model species. The technical expertise and ex situ facilities exist to emulate the success of the black-footed ferret recovery program in threatened marsupials using these research pathways. All that is needed now for significant and cost-effective conservation gains is greater investment by policy makers in marsupial ARTs.

Los programas de reproducción controlada son una herramienta importante para los esfuerzos de conservación de marsupiales, aunque pueden resultar costosos y tener efectos genéticos adversos en las colonias cautivas incapaces de aumentar en tamaño. Los biobancos y las tecnologías de reproducción asistida (TRA) podrían ayudar a superar estos problemas, pero es necesario seguir demostrando su potencial para mejorar su adopción. Utilizamos modelos genéticos y económicos para analizar si la introducción de esperma fundador proveniente de biobancos mediante tecnologías de reproducción asistida a poblaciones cautivas hipotéticas de los marsupiales Parantechinus apicalis y Myrmecobius fasciatus podría reducir la endogamia, disminuir el tamaño efectivo de las colonias y reducir el costo de los programas. También pedimos a los profesionales del programa de recuperación en cautiverio del hurón de patas negras (Mustella nigripes) que respondieran un cuestionario para analizar los recursos y los métodos de investigación de las especies modelo necesarias para desarrollar un protocolo de biobanco optimizado para el hurón de patas negras. Utilizamos los datos de este cuestionario para diseñar métodos de investigación con costos similares para los marsupiales australianos. Con el biobanco y la reproducción asistida, la endogamia se redujo en promedio entre un 80 y un 98%, el tamaño de las colonias fue en promedio un 99% más pequeño y los costos del programa entre 69 y 83 veces menores. La integración del biobanco posibilitó los objetivos de retención genética en cautiverio a largo plazo en marsupiales (90% de heterocigosidad de la población de origen durante un mínimo de 100 años) dentro de un marco realista de costos. Entre el aprendizaje extraído del uso de la tecnología de biobancos que contribuyó a la recuperación del hurón de patas negras figuran la importancia de una financiación adecuada de la investigación (4.2 millones de dólares), colaboraciones profundas que faciliten el acceso a instalaciones y equipos, colonias de animales, especies modelo adecuadas para la investigación y el personal profesional y técnico necesario para abordar las lagunas de conocimiento y ofrecer un protocolo optimizado para los biobancos. Una inversión en investigación aplicada de 133 millones de dólares australianos para la investigación de los marsupiales podría proporcionar protocolos de biobancos para 15 de las especies de marsupiales australianos en mayor riesgo y 7 especies modelo. Existen los conocimientos técnicos y las instalaciones ex situ para emular el éxito del programa de recuperación del hurón de patas negras en marsupiales amenazados utilizando estas vías de investigación. Ahora sólo se necesita una mayor inversión por parte de los responsables políticos de las TRA para marsupiales para obtener beneficios de conservación significativos y rentables.

Evaluación in vitro de la eficacia de plaquetas convencionales, atemperadas y congeladas. Posible empleo en el medio militar / In vitro evaluation of the efficacy of fresh, temperatured and frozen platelets. Possible employment in the military environment

Introducción: La hemorragia exanguinante es la primera causa de muerte prevenible del combatiente en los conflictos armados, convirtiendo así la posibilidad de transfundir hemocomponentes de manera precoz en una prestación absolutamente fundamental durante la asistencia sanitaria a las bajas generadas en las operaciones militares. A lo largo de los numerosos conflictos acontecidos durante el pasado siglo, se han producido importantes cambios en el tratamiento hemoterápico a las bajas junto con una evolución de la doctrina sanitaria respecto a este tema. En algunos protocolos de transfusión masiva se ha empleado la técnica diagnóstica de la tromboelastometría (TE). La TE es una prueba que muestra las propiedades viscoelásticas de la sangre desde la formación del coágulo hasta su fibrinólisis, evalúa la función plaquetaria y se correlaciona con el proceso fisiológico de la hemostasia de una forma rápida. El objetivo principal de este estudio es evaluar in vitro la capacidad hemostática de los diversos concentrados de plaquetas frías, congeladas y frescas mediante pruebas de coagulación estandarizadas y tromboelastometría, esclareciendo si se mejora significativamente la contribución al coágulo con los pool de plaquetas frías (conservadas a 4ºC), en comparación con las plaquetas frescas y congeladas. También se pretende determinar qué ventajas supondría la incorporación de las plaquetas frías en la medicina transfusional realizada en el medio militar. Material y método: Se diseñó un estudio experimental para comparar in vitro plaquetas frías (refrigeradas), congeladas y frescas (convencionales), analizando su rendimiento y efectividad mediante análisis sistemático de sangre, mecanismos de laboratorio de coagulación rutinarios (Tiempo de Protrombina, Actividad de Protrombina, Tiempo de Cefalina y Fibrinógeno) y Tromboelastometría rotacional (ROTEM)...(AU)

Introduction: Exsanguinating hemorrhage is the first preventable cause of death for combatants in armed conflicts, thus making the possibility of transfusing blood components early an absolutely essential benefit during health care for casualties generated in military operations. Throughout the numerous conflicts that have occurred during the past century, there have been important changes in the hemotherapy treatment of casualties along with an evolution of the health doctrine regarding this issue. In some massive transfusion protocols, the diagnostic technique of thromboelastometry (TE) has been used. TE is a test that shows the viscoelastic properties of blood from clot formation to fibrinolysis, evaluates platelet function and correlates quickly with the physiological process of hemostasis. The main objective of this study is the evaluation in vitro of the hemostatic capacity of the various cold, frozen and fresh platelet concentrates through standardized coagulation tests and thromboelastometry, clarifying whether the contribution to the clot is significantly improved with cold platelet pools (preserved at 4ºC), compared to fresh and frozen platelets. It is also intended to determine what advantages would be the incorporation of cold platelets in transfusion medicine performed in the military environment. Material and methods: An experimental study was designed to compare cold (refrigerated), frozen and fresh (conventional) platelets in vitro, analyzing their performance and effectiveness through systematic blood analysis, routine laboratory coagulation mechanisms (Prothrombin Time, Prothrombin Activity, Cephalin and Fibrinogen) and Rotational Thromboelastometry (ROTEM).A sample of 20 healthy patients was recruited, after informing them in writing and obtaining the mandatory informed consent, they donated 6 tubes with 10 ml citrate. of blood per patient...(AU)

Proyecto lázaro (2016): de la criopreservación celular a humana. Mito y realidad para la formación docente en el área de ciencias de la salud / Realive (2016): from cellular to human cryopreservation. Myth and reality for teacher training in the area of health sciences

Existe un creciente pensamiento de postergar el avance de una enfermedad terminal mediante la criopreservación de los cuerpos de los pacientes. Ante el miedo a morir de enfermedades se confían que en el futuro podrán ser reanimados y tratados con novedosas terapias que le supondrán la cura y eliminación de la patología. Aunque parezca ciencia ficción la realidad es que ya se está realizando con organismos celulares para la conservación de especies y ante enfermedades que alteran la reproducción. Sin embargo, cuando se trata de embriones los comités éticos no tienen todavía una estrategia definida. Por esa razón, este trabajo intenta enfocar una interrelación entre profesorado y alumnado para la discusión y reflexión de la criopreservación de pacientes, mostrando los últimos avances e informes sobre este aspecto. (AU)

There is a growing thought of delaying the progression of a terminal illness by cryopreservation of the bodies of patients. Faced with the fear of dying from diseases, they are confident that in the future they will be able to be revived and treated with novel therapies that will lead to the cure and elimination of the pathology. Although it seems science fiction, the reality is that it is already being carried out with cellular organisms for the conservation of species and against diseases that alter reproduction. However, when it comes to embryos, the ethical committees do not yet have a defined strategy. For this reason, this work tries to focus on an interrelation between teachers and students for the discussion and reflection of the cryopreservation of patients, showing the latest advances and reports on this aspect. (AU)

Gestión farmacoterapéutica de los medicamentosde terapias avanzadas / Pharmacotherapeutic management of advanced therapy medicinal products

Los medicamentos de terapia avanzada han emergido en los últimosaños como nuevas estrategias farmacoterapéuticas. En este contexto, los serviciosde farmacia hospitalaria nos hemos tenido que adaptar al nuevo retoque ha supuesto su inclusión en nuestra cartera de servicios dentro del complejoproceso farmacoterapéutico en el que están inmersos los pacientes.Todas las actividades que se desarrollan en los servicios de farmaciahospitalaria cumplen con una base legal establecida en nuestra legislacióny garantizan la calidad y seguridad tanto de los pacientes atendidos comode todos y cada uno de los medicamentos que se gestionan.Los medicamentos de terapia avanzada tienen unas característicasespeciales a considerar que van desde las fases iniciales de seleccióny evaluación de los pacientes candidatos y su modelo de financiación,basado en riesgo compartido, hasta una fragilidad en su manipulación querequiere de una adecuada y adaptada formación del personal implicadoen la logística para mantener su viabilidad, al necesitar unas condicionesde conservación, en ocasiones, a temperaturas de menos 180 ºC, en elcaso de las células T con receptores quiméricos de antígenos.Además, la utilización clínica de los medicamentos de terapia avanzadaha necesitado de documentos de consenso de las sociedades científicas utiliquepongan en valor el posicionamiento del farmacéutico hospitalario, comomiembro indispensable dentro del equipo multidisciplinar asistencial, y quegaranticen, como en cualquier otro medicamento, la trazabilidad, la correctaconservación y custodia y el seguimiento farmacoterapéutico asociado auna adecuada atención farmacéutica de nuestros pacientes, sin olvidar laimportancia de la creciente investigación clínica, necesaria e imprescindiblepara una incorporación segura de nuevas dianas terapéuticas.

Advanced therapy medicinal products have emerged in recentyears as new pharmacotherapeutic strategies. In this context, hospitalpharmacy services have had to adapt to the new challenges posed bythe inclusion of advanced therapies in their roster of services againstthe background of the complex pharmacotherapeutic process patientstypically go through.All the activities carried out in the hospital pharmacy services mustabide by the rules established in the Spanish legislation and ensure boththe quality of the different drugs they manage and the safety of every singlepatient.Advanced therapy medicinal products are associated certain peculiarities,including the need to select and evaluate potential candidates toreceive them; recourse to financing mechanisms based on risk sharing; andtheir extreme fragility, which means that the personnel in charge of handlingthem must be properly trained to maintain their viability and that specialstorage conditions, involving temperatures below 180 ºC in the case ofchimeric antigen receptor T cell therapies, must be maintained.In addition, use of advanced therapy medicinal products in the clinicalsetting has made it necessary for scientific societies to produce consensus documents recognizing the pivotal role of hospital pharmacists as indispensablemembers of the multidisciplinary healthcare team and ensuringthe same traceability, conservation, custody and pharmacotherapeuticalmonitoring standards imposed on other drugs to provide for adequate pharmaceuticalcare. Scientific societies have also highlighted the importance ofintensifying clinical research, an essential requirement for the safe incorporationof new therapeutic targets.The present document is intended to describe the challenges pharmacistsmay face when using advanced therapy medicinal products at thedifferent stages or processes in the patient’s clinical journey.

Effect of low-density lipoproteins and trehalose on the quality of cryopreserved bovine semen / Efecto de las lipoproteínas de baja densidad y la trehalosa en la calidad del semen bovino criopreservado / Efeito das lipoproteínas de baixa densidade e trealose na qualidade do sêmen bovino criopreservado

Abstract Background: In artificial insemination, chicken egg yolk is added to bovine semen to protect it during the cryopreservation process, although it contains substances that can affect the microbiological quality and metabolism of sperm. Objective: To evaluate post-thaw quality of bovine cryopreserved semen added with centrifuged and non-centrifuged egg yolk, low-density lipoproteins (LDL), and trehalose (T). Methods: Ten ejaculates from five bulls were cryopreserved under the treatments T1: pure egg yolk (PEY) at 20% v/v, T2: centrifuged egg yolk (CEY) at 20% v/v, T3: LDL at 8% v/v, T4: T at 100 mM, and T5: T at 100 mM plus LDL at 8% v/v (TLDL). Spermatic motility and kinetics, functional membrane integrity (FMI), structural membrane integrity (SMI), sperm vitality (SV) and abnormal morphology (AM) were assessed using the Sperm Class Analyzer (SCA®) system, hypoosmotic test (HOST), SYBR/PI probes, and eosin-nigrosin staining, respectively. A completely randomized design was used. Normal distribution of the variables was validated through the Kolmogórov- Smirnov test. A generalized linear model was used to determine sources of variation. Means were compared using the Tukey test. Results: Inclusion of CEY or LDL had a similar effect on sperm protection, and were superior for motility, kinetics and membrane integrity compared to the other treatments (p<0.05). CEY was superior for progressive motility (p<0.05). The cryoprotective action of LDL was similar to TLDL for motility and kinetics, SMI, SV, and AM (p<0.05). Inclusion of PEY and T resulted in the lowest semen quality (p<0.05). The use of T resulted in a reduction in FMI and SMI (p<0.05). No differences in AM between treatments were found (p>0.05). Conclusions: Egg yolk can be replaced by centrifuged egg yolk or low-density lipoproteins in the freezing extender used for bovine semen used in artificial insemination.

Resumen Antecedentes: la yema de huevo de gallina se agrega al semen bovino usado en inseminación artificial para protegerlo durante el proceso de criopreservación, aunque ésta tiene sustancias que pueden afectar el metabolismo espermatico y la calidad microbiológica del semen. Objetivo: evaluar la calidad post-descongelación del semen bovino criopreservado agregado con yema de huevo centrifugada y no centrifugada, lipoproteínas de baja densidad (LDL) y trehalosa (T). Métodos: diez eyaculados de cinco toros se criopreservaron bajo los tratamientos, T1: yema de huevo pura (PEY) al 20% v/v, T2: yema de huevo centrifugada (CEY) al 20% v/v, T3: LDL al 8% v/v, T4: T a 100 mM, y T5: T a 100 mM más LDL al 8% v/v (TLDL). La movilidad y la cinética espermática, la integridad funcional de la membrana (FMI), la integridad estructural de la membrana (SMI), la vitalidad espermática (SV) y la morfología anormal (AM), se determinaron mediante el sistema Sperm Class Analyzer (SCA®), la prueba hipoosmótica (HOST), las sondas SYBR/PI y la tinción con eosina-nigrosina, respectivamente. Se utilizó un diseño completamente al azar. La normalidad de las variables se validó mediante la prueba de Kolmogórov-Smirnov. Se utilizó un modelo lineal generalizado para determinar las fuentes de variación. Las medias de los tratamientos se compararon mediante la prueba de Tukey. Resultados: CEY y LDL tuvieron un efecto similar en la protección de los espermatozoides, siendo superiores a los demás tratamientos respecto a movilidad, cinética e integridad de la membrana (p<0,05). CEY fue superior para la movilidad progresiva (p<0,05). La acción crioprotectora de LDL fue similar a TLDL para movilidad y cinética, SMI, AM y SV (p<0,05). PEY y T resultaron en la más baja calidad seminal (p<0,05). El uso de T redujo la FMI y la SMI (p<0,05). No se encontraron diferencias en AM entre los tratamientos (p>0,05). Conclusiones: la yema de huevo puede reemplazarse por yema de huevo centrifugada o por lipoproteinas de baja densidad en el diluyente de congelación usado para semen bovino destinado a inseminacion artificial.

Resumo Antecedentes: a gema de ovo de galinha tem sido utilizada com a finalidade de proteger o sêmen bovino durante o processo de criopreservação, embora tenha substâncias que possam afetar o metabolismo dos espermatozóides e a qualidade microbiológica do sêmen utilizado para a inseminação artificial. Objetivo: avaliar a qualidade pós-descongelamento do sêmen bovino criopreservado com gema de ovo centrifugada e não centrifugada, lipoproteínas de baixa densidade (LDL) e trealose (T). Métodos: dez ejaculados de cinco touros foram criopreservados sob os tratamentos, T1: gema de ovo pura (PEY) 20% v/v, T2: gema de ovo centrifugada (CEY) 20% v/v, T3: LDL 8% v/v, T4: T 100 mM e T5: T 100 mM mais LDL 8% v/v (TLDL). Mobilidade e cinética espermática, integridade funcional da membrana (FMI), integridade estrutural da membrana (SMI), vitalidade espermática (SV) e morfologia anormal (AM) foram determinadas por o sistema Sperm Class Analyzer (SCA®), teste hiposmótico (HOST), coloração com SYBR/PI e eosina-nigrosina, respectivamente. Um design completamente aleatoriedade foi usado. A normalidade das variáveis foi validada pelo teste de Kolmogorov-Smirnov. Um modelo linear generalizado foi utilizado para determinar as fontes de variação. As médias dos tratamentos foram comparadas pelo teste de Tukey. Resultados: T2 (CEY) e T3 (LDL) tiveram efeito similar na proteção espermática, sendo superior aos demais tratamentos para mobilidade, cinética e integridade da membrana (p<0,05). T2 (CEY) foi superior para mobilidade progressiva (p<0,05). A ação crioprotetora de T3 (LDL) foi semelhante à T5 (TLDL) para motilidade e cinética, SMI, SV e AM (p<0,05). T1 (PEY) e T4 (T) tiveram a menor qualidade seminal (p<0,05). O uso de T4 (T) produziu uma redução na SMI e FMI (p<0,05). Não foram encontradas diferenças na AM entre os tratamentos (p>0,05). Conclusões: a gema de ovo pode ser substituída por gema de ovo centrifugada ou lipoproteínas de baixa densidade no diluente de congelamento de sêmen bovino.

Biobancos privados, biotecnologias e as promessas de segurança biológica / Private biobanks, biotechnologies and the promises of biological security / Biobancos privados, biotecnologías y las promesas de seguridad biológica

INTRODUÇÃO: Este artigo tem o objetivo de compreender como a adesão à biotecnologia de armazenamento de células-tronco do cordão umbilical para uso autólogo produz a adoção de práticas, no presente, que visam prevenir riscos em nome de segurança biológica no futuro. MÉTODO: O material empírico foi constituído de depoimentos extraídos de sites de biobancos privados credenciados na Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA), analisados a partir da análise do discurso. RESULTADOS: as publicações dos sites estimulam o consumo do armazenamento de células-tronco do cordão umbilical, em nome da obtenção de segurança biológica para o futuro. Discussões: Esta busca é povoada por discursos de riscos que oferecem "garantias" relacionadas a futuros somáticos, associados a práticas educativas que produzem formas de cuidar dos filhos. CONCLUSÃO: Tais discursos produzem significados acerca de questões que envolvem segurança biológica e riscos, inscrevendo pais e mães em práticas de hiperprevenção em saúde.

INTRODUCTION: This article aims to understand how adherence to biotechnology of stem cell storage of umbilical cord for autologous use produces the adoption of practices, in the present, that aim to prevent risks in the name of biological security in the future. METHOD: The empirical material consisted of testimonies extracted from private biobank sites accredited by ANVISA, analyzed from the analysis of the discourse. RESULTS: the websites' publications encourage the consumption of the storage of umbilical cord stem cells, in the name of obtaining biological security for the future. Discussions: This search is populated by risk speeches that offer "guarantees" related to somatic futures, associated with educational practices that produce ways of taking care of children. CONCLUSION: Such speeches produce meanings about issues involving biological safety and risks, enrolling fathers and mothers in practices of hyperprevention in health.

INTRODUCCIÓN: Este artículo tiene el objetivo de comprender cómo la adherencia a la biotecnología del almacenamiento de células madre del cordón umbilical para uso autólogo produce la adopción de prácticas, en el presente, que apuntan a prevenir riesgos en nombre de la seguridad biológica en el futuro. MÉTODO: El material empírico consistió en declaraciones extraídas de sitios de biobancos privados acreditados por ANVISA, analizadas a partir del análisis del discurso. RESULTADOS: las publicaciones en los sitios fomentan el consumo de almacenamiento de células madre en el cordón umbilical, en nombre de la obtención de seguridad biológica para el futuro. Discusiones: esta búsqueda está poblada por discursos de riesgo que ofrecen "garantías" relacionadas con futuros somáticos, asociados con prácticas educativas que producen formas de cuidar a los niños. CONCLUSIÓN: Tales discursos producen significados sobre temas que involucran seguridad y riesgos biológicos, inscribiendo a padres y madres en prácticas de hiperprevención en salud.

Deseados pero abandonados: el incierto destino de los embriones criopreservados / Desired but abandoned: the uncertain fate of cryopreserved embryos

La reproducción asistida, de la mano de ciencias afines como la genómica y la criobiología, ha transformado de modo vertiginoso el abordaje de la fertilidad, no solamente por los avances científico-técnicos, sino por la coyuntura social contemporánea. Como es conocido, en la actualidad se ha elevado el porcentaje de mujeres y parejas que deben recurrir a estas técnicas biomédicas y, con ellas, se han diversificado las etiologías de la infertilidad. El continuo avance por superar los obstáculos biológicos y ofrecer nuevas opciones con las que solventar la infertilidad, lleva también asociados interrogantes y dilemas éticos y normativos. Entre esos dilemas nos encontramos los usos y destinos de los embriones criopreservados sobrantes de las técnicas de reproducción asistida (TRA). Tras más de cuatro décadas de fecundación in vitro (FIV), la problemática surgida a raíz de la criopreservación embrionaria y la incesante acumulación de embriones parece no haber alcanzado su fin. Así, las diferentes opciones contempladas por la normativa vigente no acaban de satisfacer a los pacientes y profesionales para poder responder a la situación existente de almacenamiento de un número importante de embriones criopreservados en los biobancos de los centros de reproducción asistida, sin destino definido (AU)

La reproducció assistida, de la mà de ciències afins com la genòmica i la criobiologia, ha transformat de manera vertiginosa l'abordatge de la fertilitat, no solament pels avanços cientificotècnics, sinó per la conjuntura social contemporània. Com és conegut, en l'actualitat s'ha elevat el percentatge de dones i parelles que han de recórrer a aquestes tècniques biomèdiques i, amb elles, s'han diversificat les etiologies de la infertilitat. El continu avanç per superar els obstacles biològics i oferir noves opcions amb les quals solucionar la infertilitat, porta també associats interrogants i dilemes ètics i normatius. Entre aquests dilemes ens trobem els usos i destinacions dels embrions criopreservats sobrants de les tècniques de reproducció assistida (TRA). Després de més de quatre dècades de fecundació in vitro (FIV), la problemàtica sorgida arran de la criopreservació embrionària i la incessant acumulació d'embrions sembla no haver aconseguit la seva fi. Així, les diferents opcions contemplades per la normativa vigent no acaben de satisfer als pacients i professionals per a poder respondre a la situació existent d'emmagatzematge d'un nombre important d'embrions criopreservats en els biobancs dels centres de reproducció assistida, sense destinació definida (AU)

Assisted reproduction, hand in hand with related sciences such as genomics and cryobiology, has vertiginously transformed the approach to fertility, not only because of scientific and technical advances, but also because of the contemporary social context. As is well known, a high percentage of women and couples who have to resort to this biotechnology and, with them, the aetiologies of infertility have diversified. The continuous progress in overcoming biological barriers and provide new therapeutic options to address infertility also raises ethical and regulatory questions and dilemmas. Among these dilemmas are the uses and purpose of cryopreserved embryos left over from assisted reproduction techniques. After more than four decades of in vitro fertilization (IVF), the concern arising from embryo cryopreservation and the incessant accumulation of embryos do not seem to have reached an end. Thus, the different options contemplated by the current regulations do not satisfy users and professionals to be able to respond to the existing situation of storage of a significant number of cryopreserved embryos in the biobanks of assisted reproduction clinics, with no defined destination (AU)

[Current state regarding fertility cryopreservation in pre-pubertal boys]. / Estado actual de la criopreservación de la fertilidad en varones prepúberes.

Some treatments for any cancer therapy and hematological diseases may have gonadotoxic side effects that can result in infertility, and thus sperm cryopreservation is routinely offered to patients as the strategy to preserve their fertility. However, there are many cases where sperm banking cannot be applied, as is the case of pre-pubertal cancer patients and others unable to produce mature gametes at the moment of diagnosis. Regarding this, recent breakthroughs have gained public attention to the fertility preservation options that Regenerative Medicine can offer to these patients. In this review, we tried to compile and discuss the latest updates about all these strategies from a critical point of view.

Crioconservación seminal de Colossoma macropomum como estrategia de producción y conservación en la Orinoquia Colombiana / Seminal cryopreservation of Colossoma macropomum as a production and conservation strategy in the Colombian Orinoquia / Criopreservação seminal de Colossoma macropomum como estratégia de produção e conservação na Orinoquia Colombiana

Resumen La Cachama negra (Colossoma macropomum) es un pez nativo de Sur América. En Colombia, no hay estudios publicados sobre protocolos estandarizados para su crioconservación seminal. La implementación de esta biotecnología permitiría su producción comercial continua e introducción en bancos de recursos genéticos. El objetivo del presente estudio fue evaluar los efectos de la crioconservación sobre el semen de C. macropomum sometido a diferentes crioprotectores y sistemas de empaque con miras a consolidar un protocolo eficiente para la especie. Se utilizó semen de tres machos sexualmente maduros (4.6 ± 1.6 kg). El semen fue diluido en una proporción 1:4 usando tres diferentes agentes crioprotectores (Dimetilsulfoxido 10% [DMSO], Metanol 10% [MET], Etilenglicol 5% [ETG]) con o sin la inclusión de yema de huevo 12% (YH) y glucosa 5.5%. Además, fueron evaluados dos sistemas de empaque (pajillas de 0.5 ml y macrotubos de 2.0 ml), las cuales fueron expuestas a vapores de nitrógeno líquido (NL) y luego almacenadas durante 8 meses. El semen fue descongelado en baño de agua a 37°C por 60 s y se determinó la motilidad masal (%) [MM], duración de la motilidad (s) [DM], integridad de membrana plasmática (%) [IMP] y fertilidad (%). La motilidad postdescongelación en todos los tratamientos fue significativamente diferente (P<0,05) al control siendo MET 2.0 ml el mejor (53 ± 5.8%). Respecto al control la DM tuvo un comportamiento similar para todos los tratamientos siendo solo diferente significativamente para ETG+YH 0.5 ml. La IMP se mantuvo sin diferencias significativas en MET 2.0 ml con respecto al control. La fertilidad fue significativamente menor en la mayoría de tratamientos con YH, siendo MET 2.0 ml el mejor (94.7 ± 0.6%). En conclusión, el semen de Colossoma macropomum es susceptible de crioconservación no siendo necesaria la utilización de YH en los diluyentes.

Abstract Cachama Negra (Colossoma macropomum) it´s a native fish of South America. In Colombia, there are no published studies on standardized protocols about their seminal cryopreservation. The implementation of this biotechnology would allow its continuous commercial production and introduction in genetic resources banks. The aim of this study was to evaluate the effects of cryopreservation on C. macropomum sperm subjected to different cryoprotectants and packaging systems in order to consolidate an efficient protocol for this specie. Semen from three sexually mature males (4.6 ± 1.6 kg) was used. The semen was diluted in a 1:4 ratio using three different cryoprotective agents (Dimethylsulfoxide 10% [DMSO], Methanol 10% [MET], Ethylene glycol 5% [ETG]); with or without the inclusion of 12% egg yolk (YH) and glucose 5.5%. In addition, two packing systems were evaluated (0.5 ml straws and 2.0 ml macrotubes), wich were exposed to liquid nitrogen (NL) vapors and then stored for 8 months. The sperm was thawed in a water bath at 37° C for 60 s and was determined the mass motility (%) [MM], motility duration (s) [DM], plasma membrane integrity (%) [IMP] and fertility (%). Post-thaw motility in all treatments was significantly different (P <0.05) to control, being MET 2.0 ml the best (53 ± 5.8%). Respect to the control the DM had a similar behavior for all treatments, being only significantly different for ETG+YH 0.5 ml. The IMP remained without significant differences in MET 2.0 ml with respect to the control. Fertility was significantly lower in the majority of treatments with YH, being MET 2.0 ml the best (94.7 ± 0.6%). In conclusion, semen of Colossoma macropomum is susceptible to cryopreservation, and the use of YH in diluents is not necessary.

Resumo O tambaqui (Colossoma macropomum) é um peixe nativo da América do Sul. Na Colômbia, não há trabalhos publicados sobre protocolos padronizados para sua criopreservação seminal. A implementação dessa biotecnologia permitiria sua produção comercial contínua e sua introdução nos bancos de genes. O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da criopreservação no sêmen de C. macropomum submetido a diferentes crioprotectores e envases, e poder consolidar um protocolo eficiente para esta espécie. Foi utilizado sêmen de três machos sexualmente maduros (4.6 ± 1.6 kg). O sémen foi diluído em uma proporção 1:4 usando três diferentes agentes crioprotectores (10% de dimetil sulfóxido [DMSO], 10% de Metanol [MET] Etileno glicol 5% [ETG]), com e sem a presencia de gema de ovo ao 12% (YH) e glucose a 5.5%. Além foram avaliados dos sistemas de envase (palhetas de 0.5 ml e 2.0 ml de macrotubos) que foram expostos a vapores de nitrogênio líquido (NL) e armazenados por 8 meses em NL. O sémen foi descongelado em banho-água a 37 ° C durante 60 segundos e determinou-se a motilidade massal (%) [MM], duração de motilidade (s) [DM], a integridade da membrana plasmática (%) [IMP] e Fertilidade (%). A motilidade pós-descongelação nos tratamentos foi significativamente diferente (P<0.05) sendo a melhor combinação MET 2.0 ml (53 ± 5.8%) comprados com o controle. Em relação ao controle, o DM teve um comportamento similar para todos os tratamentos sendo significativamente diferente para o ETG+YH 0.5 ml. O IMP permaneceu sem diferenças significativas no MET 2.0 ml em relação ao controle. A fertilidade foi significativamente menor na maioria dos tratamentos com YH, sendo o MET 2.0 ml o melhor (94.7 ± 0.6%). Em conclusão, o sêmen Colossoma macropomum é suscetível à criopreservação e o uso de YH em diluentes não é necessário.

Assessment of mouse oocytes ultrastructure following vitrification before and after in vitro maturation / Evaluación de la ultraestructura de los ovocitos de ratón después de la vitrificación antes y después de la maduración in vitro

SUMMARY: Vitrification is a physical process in which the concentrated cryoprotectant solution after exposure to extreme cold without ice crystal formation in living cells to be converted glassing state. In this study, maturation rate and ultrastructure of mouse oocytes followed by vitrification before or after in-virto maturation (IVM) were evaluated. A total of 373 germinal vesicle oocytes were obtained from ovaries and divided into three fresh IVM, IVM vitrified, vitrified IVM groups. Ten metaphase II oocytes were obtained from uterine tubes and considered as the control group. Oocytes in vitrified groups were vitrified by Cryotop using vitrification medium and kept in liquid nitrogen. The maturation media was a-MEM supplemented with rFSH + hCG. After 24-48 h of incubation, the oocytes were investigated for nuclear maturation and ultrastructural changes using transmission electron microscopy (TEM). The oocyte maturation rate in vIVM group was significantly lower than IVMv group, when the two groups were compared with vIVM had the highest maturity. The evaluation ultrastructure of the four groups showed that the number of cortical granules, microvilli and mitochondria-SER aggregates in vIVM group were lowest and the highest amongst the number of vacuoles. Zona pellucida was darker than the control group in two freeze groups vIVM and IVMv. Most similar groups to the control group were group vIVM, Group IVMv and ultimately vIVM group, respectively. According to the results, IVM procedure is more efficient when it is performed before oocyte vitrification.

RESUMEN: La vitrificación es un proceso físico en el que la solución concentrada de crioprotectores, después de la exposición al frío extremo sin formación de cristales de hielo en las células vivas, se convierte en estado de cristal. En este estudio, se evaluaron la velocidad de maduración y la ultraestructura de los ovocitos de ratón seguidos por la vitrificación antes o después de la maduración in vitro (IVM). Se obtuvieron un total de 373 ovocitos, de vesículas germinales de ovarios, y se dividieron en tres grupos de IVM vitrificados, IVM e IVM frescos. Diez ovocitos metafase II se obtuvieron a partir de tubas uterinas y se consideraron como el grupo de control. Los ovocitos en grupos vitrificados fueron vitrificados por Cryotop usando medio de vitrificación y mantenidos en nitrógeno líquido. El medio de maduración fue a-MEM suplementado con rFSH + hCG. Después de 24-48 h de incubación, fueron observados en los ovocitos la maduración nuclear y cambios ultraestructurales utilizando microscopía electrónica de transmisión (MET). La tasa de maduración de los ovocitos en el grupo vIVM fue significativamente más baja que en el grupo IVM v, cuando los dos grupos se compararon con los que tenían la mayor madurez. La evaluación de la ultraestructura de los cuatro grupos mostró que el número de gránulos corticales, microvellosidades y acúmulos de mitocondrias-SER en el grupo vIVM fue el más bajo y el más alto entre el número de vacuolas. La zona pelúcida fue más oscura en dos grupos de congelación vIVM e IVMv, que en el grupo control. La mayoría de los grupos, similares al grupo de control, fueron los grupos vIVM, IVMv y,finalmente, el grupo vIVM, respectivamente. De acuerdo con los resultados, el procedimiento de IVM es más eficiente cuando se realiza antes de la vitrificación de ovocitos.

Efecto del isoespintanol y el timol en la actividad antioxidante de semen equino diluido con fines de congelación / Effect of isoespintanol and thymol on the antioxidant activity of equine semen diluted for freezing purposes / Efeito do isoespintanol e o timol na atividade antioxidante de sêmen equino diluído para fins de congelação

Resumen Una amplia variedad de antioxidantes evaluados en la congelación de semen equino no ha arrojado resultados satisfactorios en el mantenimiento de su calidad y fertilidad. El isoespintanol y el timol son moléculas de origen natural con una alta actividad antioxidante, lo que las hace potencialmente útiles para reducir el estrés oxidativo del semen durante la criopreservación. Este estudio tuvo como objetivo evaluar el efecto del isoespintanol y el timol en la actividad antioxidante total y enzimática de semen equino diluido con fines de congelación. El semen de cinco caballos criollos colombianos se diluyó en un medio de congelación, se dividió en tres alícuotas que se asignaron aleatoriamente a los tratamientos isoespintanol (40 µM), timol (50 µM) o control (sin antioxidante). Se evaluó la capacidad antioxidante total (TAC) por los ensayos ORAC y FRAP. La actividad de catalasa (CAT), superóxido dismutasa (SOD) y glutatión peroxidasa (GPx) se evaluaron mediante pruebas enzimáticas. La evaluación estadística se realizó mediante modelos mixtos, análisis de correlación y comparación de medias por la prueba de Tukey. Las actividades de SOD y GPx fueron menores para el isoespintanol (6,7 ± 2,2 U/ ml y 0,16 ± 0,02 U/ml), comparadas con el timol (6,9 ± 2,2 U/ml y 0,20 ± 0,02 U/ml) y el control (7,2 ± 2,2 U/ml y 0,22 ± 0,02 U/ml) (p < 0,05). No hubo diferencias para la TAC o la CAT del semen (p > 0,05). El isoespintanol reduce la actividad de SOD y GPx en el semen equino diluido con fines de congelación.

Abstract A wide variety of antioxidants that were evaluated for freezing equine semen failed to yield satisfactory results in maintaining their quality and fertility. Isoespintanol and thymol are molecules of natural origin with a high antioxidant activity, which makes them potentially useful for reducing semen oxidative stress during cryopreservation. This study aimed to evaluate the effect of isoespintanol and thymol on total antioxidant and enzymatic activity of equine semen diluted for freezing purposes. The semen of five Colombian creole horses was diluted in a freezing medium, divided into three aliquots that were randomly assigned to treatments with isoespintanol (40 µM), thymol (50 µM), or control (no antioxidant). Total antioxidant capacity (TAC) was evaluated using ORAC and FRAP tests. Catalase (CAT), superoxide dismutase (SOD) and glutathione peroxidase (GPx) activity were evaluated by enzymatic assays. The statistical evaluation was performed using mixed models, correlation analysis, and comparison of means by Tukey's test. SOD and GPx activities were lower for isoespintanol (6.7 ± 2.2 U/ml and 0.16 ± 0.02 U/ml), compared to thymol (6.9 ± 2.2 U/ml and 0.20 ± 0.02 U/ml) and to control (7.2 ± 2.2 U/ml and 0.22 ± 0.02 U/ml) (p < 0.05). There were no differences for TAC or CAT in semen (p > 0.05). Isoespintanol reduces SOD and GPx activity in equine semen diluted for freezing purposes.

Resumo Uma ampla variedade de antioxidantes avaliados na congelação de sêmen equino não tem mostrado resultados satisfatórios na manutenção de sua qualidade e fertilidade. O isoespintanol e o timol são moléculas de origem natural com uma alta atividade antioxidante, fator que as faz potencialmente úteis para reduzir o estresse oxidativo do sêmen durante a criopreservação. Este estudo teve como objetivo avaliar o efeito do isoespintanol e do timol na atividade antioxidante total e enzimática de sêmen equino diluído para fins de congelação. O sêmen de cinco cavalos nativos da Colômbia foi diluído em um meio de congelação, depois dividido em três partes designadas aleatoriamente aos tratamentos isoespintanol (40 µM), timol (50 µM) o controle (sem antioxidante). Avaliou-se a capacidade antioxidante total (TAC) pelos ensaios ORAC e FRAP. A atividade de catalase, superóxido dismutase (SOD) e glutationa peroxidase (GPx) se avaliaram mediante provas enzimáticas. A avaliação estatística realizou-se mediante modelos mistos, análise de correlação e comparação de médias pela prova de Tukey. As atividades de SOD e GPx foram menores para o isoespintanol (6,7 ± 2,2 U/ml e 0,16 ± 0,02 U/ml), comparadas com o timol (6,9 ± 2,2 U/ml e 0,20 ± 0,02 U/ml) e o controle (7,2 ± 2,2 U/ ml e 0,22 ± 0,02 U/ml) (p < 0,05). Não houve diferenças para a TAC ou a CAT do sêmen (p > 0.05). O isoespintanol reduz a atividade de SOD e GPx no sêmen equino diluído para fins de congelação.

Consentir na criopreservação de embriões: perceção de casais usuários de medicina da reprodução / Consent on embryo cryopreservation: perception of couples using reproductive medicine / Consentir en la crio-preservación de embriones: percepción de parejas usuarias de medicina de la reproducción

Este estudo qualitativo analisou as perceções de casais quanto aos fatores que contextualizam o consentimento livre e esclarecido na criopreservação de embriões, a partir de 34 entrevistas semiestruturadas, em Portugal. Analisaram-se os dados segundo os princípios da grounded theory. Dos resultados emergiram as seguintes necessidades: provisão de informações detalhadas, rigorosas, coerentes e no tempo adequado sobre os custos e duração da criopreservação e o destino dos embriões; reforço da privacidade física; tempo para refletir sobre o destino dos embriões e a divulgação da identidade dos beneficiários. As condições de aplicação do consentimento parecem ameaçar três dos seus elementos fundamentais: informação, voluntarismo e ponderação. Importa desenvolver orientações ético-profissionais que assegurem um consentimento assente em práticas de aconselhamento e prestação de informação adequadas às necessidades e expectativas dos pacientes.(AU)

This qualitative study analyzed couples' perceptions about the factors that contextualize informed consent regarding embryo cryopreservation, through 34 semi-structured interviews, in Portugal. Data were analyzed according to the principles of grounded theory. The results revealed the following needs: timely provision of detailed, accurate and intelligible information about the costs of cryopreservation, embryo storage limit and embryo disposition; reinforcement of physical privacy; availability of time to reflect about embryo disposition and disclosure of users' identities. The conditions of administration of the informed consent appear to threaten three of its fundamental elements: information, voluntarism and reflection. The development of professional and ethical guidelines is necessary to ensure the implementation of a consent process characterized by practices of counseling and information adapted to patients' needs and expectations.(AU)

Este estudio cualitativo analizó las percepciones de parejas en lo que se refiere a los factores que contextualizan el consentimiento libre e informado en la crio-preservación de embriones, a partir de 34 entrevistas semi-estructuradas realizadas en Portugal. Se analizaron los datos según los principios de la grounded theory. De los resultados surgieron las necesidades siguientes: provisión de informaciones detalladas, rigurosas, coherentes y en el tiempo adecuado sobre los costos y duración de la crio-preservación y el destino de los embriones; refuerzo de la privacidad física, tiempo para reflexionar sobre el destino de los embriones y la divulgación de la identidad de los beneficiarios. Las condiciones de aplicación del consentimiento parecen amenazar tres de sus elementos fundamentales: información, voluntarismo y ponderación. Es importante desarrollar orientaciones ético-profesionales que aseguren un consentimiento pleno en prácticas de aconsejamiento y prestación de informaciones adecuadas a las necesidades y expectativas de los pacientes.(AU)

Comparación de resultados posterior a la transferencia electiva de embrión único euploide en ciclos frescos vs criopreservados / Results after elective single embryo transfer: Fresh euploid embryo transfer versus frozen-thawed transfer cycles

Resumen OBJETIVO: analizar las tasas de implantación y embarazo en ciclos de fertilización in vitro con transferencia electiva de un solo blastocisto, con control del factor embriónico mediante transferencia de embriones euploides. MATERIALES Y MÉTODOS: estudio retrospectivo de pacientes atendidas entre los años 2010 a 2015 en un centro privado, en protocolo de fertilización in vitro y que tuvieron, por lo menos, un embrión euploide disponible para transferencia. Para fines de estudio las pacientes se dividieron en dos grupos: 1) transferencia de embriones frescos y 2) embriones desvitrificados. Las variables categóricas se analizaron con χ2 y prueba exacta de Fisher; las variables continuas con t de Student. Se estableció significación estadística con un valor de p < 0.05. Para el análisis estadístico se usó SAS-STAT versión 9.4. RESULTADOS: se incluyeron 637 ciclos (frescos: 243 vs criopreservados: 394). La tasa de embarazo fue de 75.5% (n = 289) vs 66.3% (n = 159), embarazo clínico 62.5% (n = 235) vs 53.1% (n = 127) que fue estadísticamente significativo a favor de los ciclos criopreservados. Las tasas de embarazo múltiple fueron bajas (1.7 vs 1.6%) en ambas cohortes. CONCLUSIONES: la transferencia de un solo embrión disminuye significativamente la incidencia de embarazos múltiples y la morbilidad materna y neonatal. El mejor pronóstico en ciclos de fertilización in vitro homólogos se consigue con la transferencia de un solo embrión genéticamente equilibrado, en un ciclo posterior de preparación endometrial sintética o natural.

Abstract OBJECTIVE: To analyze the implantation and pregnancy rates in cycles of in vitro fertilization with elective transfer of a single blastocyst, with control of the embryonic factor by transfer of euploid embryos. MATERIALS AND METHODS: Retrospective analysis who included patients that underwent IVF and had at least one euploid embryo available for transfer between 2010 and 2015 on a single academic private practice. Cohorts were segregated in fresh embryo transfers (ET) vs frozen/thawed ET. Categorical variables were analyzed with χ2 and Fisher test when appropriate. Continuous variables were analyzed with Students t test. P value < 0.5 was established as statistically significant. SAS/STAT 9.4 was used for analysis. RESULTS: Six hundred and thirty-seven euploid SETs cycles (fresh cycle: n = 243; frozen/thaw cycle: n = 394) were identified. Pregnancy (75.5% (n=289) vs 66.3% (n = 159)) and clinical pregnancy rates (PR) (62.5% (n = 235) vs 53.1% (n = 127)) were statistically higher in the frozen/thaw cycles. Low rates of multiple pregnancies (1.7 and 1.6%) were observed in both cohorts. CONCLUSIONS: In one of the largest studies to date, a euploid SET during a frozen/thaw cycle showed significantly improved pregnancy and clinical PR compared to embryo transfer in fresh cycles. Single embryo transfer significantly reduces the incidence of multiple gestation and improves maternal and neonatal outcomes. An optimal outcome is achieved by the performance of a SET in FET cycles.

Capacidad antioxidante y calidad post-descongelación del semen equino criopreservado con quercetina y ergotioneina / Antioxidant capacity and post-thaw quality of stallion semen cryopreserved with quercetin and ergothioneine

Se evaluó la capacidad antioxidante y la calidad post-descongelación del semen equino criopreservado con quercetina y ergotioneina. Nueve eyaculados provenientes de tres caballos criollos colombianos se criopreservaron bajo tres tratamientos: ergotioneina (100 pM), quercetina (100 pM) y control (sin antioxidante). Posteriormente a la descongelación se evaluaron los siguientes parámetros: la capacidad antioxidante total (CAT) del semen mediante el ensayo del ácido 2,2'-azino-bis-[3-etilbenzotiazolina]-6-sulfónico (ABTS•+); la movilid ad total (MT); la movilidad progresiva (MP); la hiperactividad (HA) y las velocidades curvilínea (VCL), lineal (VSL) y media (VAP) mediante el sistema computarizado SCA ; además, la integridad estructural de la membrana y la integridad acrosómica por microscopia de fluorescencia mediante las sondas SYBR/IP y FITC/ PNA, respectivamente; la morfología mediante la tinción eosina-nigrosina y la integridad funcional de membrana a través de la prueba hipoosmótica (HOS). Se realizó el ajuste de modelos lineales generalizados (GLM) y la comparación de medias por Tukey. La CAT (pmol trolox/ml) del semen descongelado fue superior para la ergotioneina (4,0 ± 0,3) y la quercetina (3,9 ± 0,4), respecto del control (2,6 ± 1,5). Para la MT se encontró una media superior para la ergotioneina (70,3 ± 11,2 %), respecto a la quercetina (63 ± 10,5 %) y al control (66,1 ± 11,2 %) (P < 0,05). Para MP, HA, VCL, VSL y VAP, el tratamiento control presentó valores superiores a los tratamientos con antioxidantes (P < 0,05). Se concluye que la ergotioneina y la quercetina incrementan la CAT e influyen sobre la movilidad y la cinética post-descongelación del semen equino.

The aim of this study was to evaluate the antioxidant capacity and post-thaw quality of stallion semen cryopreserved with quercetin and ergothioneine. Nine ejaculates from three Colombian Creole horses were cryopreserved under three treatments: ergothioneine (100 pM), quercetin (100 pM) and control (no antioxidant). Post-thaw were evaluated the parameters: total antioxidant capacity (TAC) of semen through the acid test of azino 2,2'-bis[3-ethylbenzothiazoline]-6-sulfonic acid (ABTS•+); total motility (MT), progressive motility (MP), hyperactivity (HA) and curvilinear (VCL), linear (VSL) and average path (VAP) velocities by the computerized system SCA ; structural membrane integrity and acrosome integrity by fluorescence microscopy using SYBR / IP and FITC / PNA probes, respectively; morphology by eosinnigrosin staining and functional membrane integrity by hypoosmotic swelling test (HOS). The adjustment of generalized linear models (GLM) and comparison of means by Tukey was performed. The TAC (pmol trolox/ml) of thawed semen was higher for ergothioneine (4.0 ± 0.3) and quercetin (3.9 ± 0.4), compared to control (2.6 ± 1.5). For MT a higher average for ergothioneine (70.3 ± 11.2%) compared to quercetin (63 ± 10.5%) and control (66.1 ± 11.2%) was found (P < 0.05). For MP, HA, VCL, VSL and VAP, the control showed higher values compared to the antioxidant treatments (P < 0.05). It is concluded that ergothioneine and quercetin increased the TAC and have influence on post-thawed motility and kinetics of stallion semen.