Las células dendríticas plasmacitoides evocan la respuesta efectora de los linfocitos T citotóxicos específicos para Salmonella / The plasmacytoid dendritic cells evoke Salmonella-specific CTL effector response

Resumen Introducción. La función inmunológica de las células dendríticas plasmacitoides durante las infecciones bacterianas, como la de Salmonella spp., es poco conocida. En ese contexto, se analizó su función efectora para presentar antígenos de Salmonella Typhimurium ante linfocitos T citotóxicos. Objetivo. Analizar la respuesta de los linfocitos T citotóxicos específicos para Salmonella evocada por las células dendríticas plasmacitoides. Materiales y métodos. Se usaron células dendríticas plasmacitoides marcadas con éster de succinimidil-carboxifluoresceína, pulsadas con el epítopo de Salmonella OmpC73 Kb- restringido o infectadas con S. Typhimurium como blanco en ensayos de citotoxicidad. Resultados. La lisis específica tuvo significación estadística usando células dendríticas plasmacitoides positivas pulsadas con OmpC73 en todas las relaciones de células efectoras y blanco (E:B) (p≤0,05); en cuanto a las células dendríticas plasmacitoides positivas para S. Typhimurium, solo se observó significación estadística en la relación de 1:100 (p≤0,05) usando las células efectoras OmpC73. Conclusión. Las células dendríticas plasmacitoides pueden evocar la respuesta de los linfocitos T citotóxicos durante la infección con S. Typhimurium.

Abstract Introduction: The immunological role of plasmacytoid dendritic cells (pDC) in bacterial infections such as Salmonella has been poorly documented. Therefore, we analyzed the effector function of these cells by presenting cytotoxic T lymphocytes (CTL) with Salmonella Typhimurium antigens. Objective: To analyze the Salmonella-specific CTL response evoked by pDCs. Materials and methods: We used plasmacytoid dendritic cells stained with carboxyfluorescein succinimidyl ester (CFSE) and pulsed with OmpC73, Salmonella Kb- restricted epitopes or S. Typhimurium as targets for cytotoxicity assays. Results: Specific lysis was shown to be statistically significant in pDC + OmpC73 for all effector:target ratios (p≤0.05). For pDC + S. Typhimurium, statistical significance was only observed at a 1:100 ratio (p≤0.05) using OmpC73. Conclusion: Plasmacytoid dendritic cells evoke CTL response during S. Typhimurium infection.

Biocompatibilidade de pigmentos e a influência de diferentes métodos de incorporação em propriedades físicas e mecânicas de silicones para próteses bucomaxilofaciais / Biocompatibility of pigments and the influence of different incorporation methods on physical properties of silicones for bucomaxillofacial prostheses

Uma prótese ideal deve reproduzir as estruturas perdidas nos mínimos detalhes e ser imperceptível em público. Entretanto a natureza do defeito, as habilidades do protesista e os materiais de escolha limitam a beleza da prótese e, consequentemente o seu uso, já que a sua principal função é a recuperação da estética. Sendo assim, cor, forma e textura, são características primordiais que irão determinar o sucesso ou falha da prótese bucomaxilofacial, bem como a sua durabilidade. O presente estudo tem como objetivo analisar a biocompatibilidade de um novo pigmento para coloração de próteses bucomaxilofaciais, bem como a influência dos métodos de incorporação de três pigmentos na estabilidade cromática, absorção e solubilidade, estabilidade dimensional e reprodução de detalhes dos silicones A2 A-2186 e Silastic MDX4-4210. Para a confecção das amostras, foram utilizados dois silicones faciais, três tipos de pigmentos, sendo dois deles específicos para caracterização de próteses bucomaxilofaciais nas cores bronze e preto, e um novo pigmento na cor rosa médio. Para se verificar a biocompatibilidade através dos testes in vitro de citotoxicidade com ensaios de MTT, Alamar Blue e Neutral Red com cultura de células foram confeccionadas 40 amostras, dividas em 8 grupos (n=5), de acordo com o silicone e pigmentos. Já para os testes físicos, foram confeccionadas 200 amostras para cada ensaio, divididas em 20 grupos (n=10), distribuídos de acordo com o tipo de silicone, pigmento adicionado e método de incorporação utilizado (industrial, laboratorial mecânica ou convencional). As leituras dos testes de estabilidade cromática, absorção e solubilidade, reprodução de detalhes e estabilidade dimensional foram realizadas no período inicial e ao término de cada ciclo de envelhecimento de 252, 504 e 1008 horas. Os dados obtidos foram submetidos à análise estatística, utilizando-se os testes de ANOVA (p<.05) e teste de Bonferroni para a biocompatibilidade e de Tukey para os ensaios físicos. Verificou-se, por meio dos resultados que o método de incorporação, pigmento, silicone e período avaliado influenciou as propriedades estudadas. Pode-se concluir que todos os materiais utilizados são biocompatíveis, o melhor método de Incorporação de pigmentos para estabilidade cromática é o industrial e o melhor pigmento o Rosa, todos os grupos apresentaram alterações cromáticas dentro do limite clínico considerado aceitável, os valores de absorção e solubilidade foram baixos para todos os grupos, a alteração dimensional resultou em contração das amostras, todos os grupos apresentaram uma ótima reprodução de detalhes (Escore 2)(AU)

An ideal prosthesis should reproduce the structures lost to the smallest details and be imperceptible in public. However, the nature of the defect, the skills of the prosthodontist and the materials of choice limit the beauty of the prosthesis and consequently its use, since its main function is the recovery of aesthetics. Thus, color, shape and texture are prime characteristics that will determine the success or failure of the bucomaxillofacial prosthesis as well as its durability. The present study aims to analyze the influence of the incorporation of three pigments on the color stability, absorption and solubility, dimensional stability and detail reproduction of the silicones A2 A-2186 and Silastic MDX4-4210, as well as the biocompatibility of a new pigment for staining of buccomaxillofacial prostheses. For the preparation of the samples, two facial silicones, three types of pigments were used, two of them specific for the characterization of bucomaxillofacial prostheses in bronze and black, and a new pigment in the medium pink color. In order to verify biocompatibility through in vitro cytotoxicity tests MTT, Alamar Blue and Neutral Red assays with cell culture, and 40 samples were prepared, divided into 8 groups (n=5), according to the silicon and pigments. For the physical tests, 200 samples were prepared for each test, divided into 20 groups (n=10), distributed according to the type of silicone, pigment added and method of incorporation used (industrial, mechanical or conventional laboratory). The chromatic stability, absorption and solubility, detail reproduction and dimensional stability readings were performed at baseline and at the end of each aging cycle of 252, 504 and 1008 hours. The data were submitted to statistical analysis, using ANOVA (p <.05) and Bonferroni test for biocompatibility and Tukey for physical tests. It was verified, through the results that the method of incorporation, pigment, silicone and period evaluated influenced the properties studied. It can be concluded that all the materials used are biocompatible, the best method of incorporation of pigments for chromatic stability is the industrial and pink is the best pigment, all groups presented chromatic alterations within the clinical limit considered acceptable, the absorption values and solubility were low for all groups, the dimensional change resulted in contraction of the samples, all groups presented a good reproduction of details (Score 2)(AU)

Análise do perfil fenotípico e funcional das células natural Killer e linfócitos TCD8+ no Líquen plano / Analysis of phenotypic and functional profile of Natural Killer cells and CD8 + T lymphocytes in Lichen planus

Líquen plano (LP) é uma doença mucocutânea de natureza inflamatória crônica de etiologia ainda desconhecida. Alterações na resposta imune inata, como aos padrões moleculares associados à patógenos (PAMPs) e padrões moleculares associados ao dano (DAMPs) podem levar à inflamação crônica e contribuir com a patogênese do LP. OBJETIVO: Avaliar o efeito da ativação via o DAMP S100A8 e o receptor Toll-like 4 (TLR-4) em células Natural killer (NK) e TCD8 citotóxicas e suas subpopulações de memória/efetoras em pacientes com LP. MÉTODOS: Foram selecionados 25 pacientes com LP (22 mulheres, 3 homens) com idade média de 43,46 anos ± 8,46 e um grupo controle com 25 indivíduos (22 mulheres, 3 homens) com idade média de 42 anos ± 5,5. A determinação transcricional e da expressão por imunohistoquimica dos DAMPs S100A8, HMGB-1 e de TLR-4 e RAGE foi realizada em biópsias de lesões cutâneas de indivíduos com LP, e os níveis séricos de S100A8, HMGB-1, MICA e MICB foram determinados por ELISA. As células mononucleares (CMNs) de sangue periférico foram avaliadas por citometria de fluxo quanto a frequência de TNF, IL-1beta e o marcador de desgranulação CD107a em células TCD8+ e células NK CD56+ e suas subpopulações. A avaliação da via de sinalização de TLR em células TCD8+ purificadas e ativadas com S100A8 foi analisada por PCR array e a determinação da expressão de mRNA dos componentes do inflamassoma em células TCD8+ ativadas com S100A8 por PCR em tempo real. RESULTADOS: Foi evidenciado nos indivíduos com LP elevada expressão da proteína S100A8 nas lesões cutâneas e de HMGB-1, TLR-4 e RAGE na derme, em paralelo ao aumento da expressão de mRNAs para S100A8 e S100A9 e diminuição de RAGE. Além disto, uma elevação dos níveis séricos do dímero S100A8/A9 foi detectada nos pacientes comparados aos controles, ao contrário do DAMP HMGB-1 que mostrou níveis similares em ambos os grupos. A influência do S100A8 em células TCD8+ e células NK, foi analisada em CMNs pela ativação...

Lichen planus (LP) is a mucocutaneous inflammatory chronic disease of unknown etiology. Alterations in the innate immune response such as the pathogen-associated molecular pattern (PAMPs) and damage-associated molecular pattern (DAMPs) can lead to chronic inflammation and contribute to the pathogenesis of LP. OBJECTIVE: Evaluate the effect of the activation trough the DAMP S100A8 and the Toll-like receptor 4 (TLR-4) on the Natural killer cells (NK) and cytotoxic TCD8 cells and their memory / effector subsets in LP disease. METHODS: We selected 25 patients with LP (22 women, 3 men) with a mean age of 43.46 years ± 8.46 and a control group of 25 subjects (22 women, 3 men) with a mean age of 42 ± 5, 5. The transcriptional determination and protein expression by immunohistochemistry of DAMPs, S100A8 and HMGB-1 as well as TLR-4 and RAGE was performed on biopsies of skin lesions from patients with LP, and serum levels of S100A8, HMGB-1, MICA and MICB were determined by ELISA. Peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) were assessed by flow cytometry to evaluate the frequency of TNF, IL-1beta and the degranulation marker CD107a in CD8+ T cells and CD56 + NK cells and their subsets. The evaluation of the TLR signaling pathway in purified CD8 + T cells activated with S100A8 were analyzed by PCR array and the determination of mRNA expression of inflammasome components on CD8 + T cells activated by S100A8 was measured by real time PCR. RESULTS: It was shown in the LP individuals an increased expression of the S100A8 protein in the cutaneous lesions and HMGB-1, TLR-4 and RAGE in the dermis, in parallel to increased level of mRNAs for S100A8 and S100A9 and decreased expression of RAGE. Moerover, increased serum levels of the dimer S100A8 / A9 was detected in patients compared to controls, in contrast to DAMP HMGB1 that revealed similar levels in both groups. The influence of S100A8 in CD8 + T cells and NK cells, was analyzed in PBMC activating with...

Cytotoxicity and genotoxicity of calcium silicate-based cements on an osteoblast lineage

Abstract Several calcium silicate-based biomaterials have been developed in recent years, in addition to Mineral Trioxide Aggregate (MTA). The aim of this study was to evaluate the cytotoxicity, genotoxicity and apoptosis/necrosis in human osteoblast cells (SAOS-2) of pure calcium silicate-based cements (CSC) and modified formulations: modified calcium silicate-based cements (CSCM) and three resin-based calcium silicate cements (CSCR1) (CSCR 2) (CSCR3). The following tests were performed after 24 hours of cement extract exposure: methyl-thiazolyl tetrazolium (MTT), apoptosis/necrosis assay and comet assay. The negative control (CT-) was performed with untreated cells, and the positive control (CT+) used hydrogen peroxide. The data for MTT and apoptosis were submitted to analysis of variance and Bonferroni's posttest (p < 0.05), and the data for the comet assay analysis, to the Kruskal-Wallis and Dunn tests (p < 0.05). The MTT test showed no significant difference among the materials in 2 mg/mL and 10 mg/mL concentrations. CSCR3 showed lower cell viability at 10 mg/mL. Only CSC showed lower cell viability at 50 mg/mL. CSCR1, CSCR2 and CSCR3 showed a higher percentage of initial apoptosis than the control in the apoptosis test, after 24 hours exposure. The same cements showed no genotoxicity in the concentration of 2 mg/mL, with the comet assay. CSC and CSCR2 were also not genotoxic at 10 mg/mL. All experimental materials showed viability with MTT. CSC and CSCR2 presented a better response to apoptosis and genotoxicity evaluation in the 10 mg/mL concentration, and demonstrated a considerable potential for use as reparative materials.

Non Hodgkin T cell lymphoma: an atypical clinical presentation / Linfoma não Hodgkin de células T citotóxico: uma apresentação clínica atípica

Cytotoxic lymphomas comprise a spectrum of peripheral T-cell lymphomas that can have a initial or late cutaneous presentation. We describe a 46-year-old man from Cape Verde, with a dermatosis involving his face and trunk, consisting of monomorphic papules with a smooth surface and both motor and sensory polyneuropathy.The hypothesis of leprosy was supported by the clinical and initial hystopathological findings and the patient was referred to our hospital with suspected Hansen's disease. In the new skin and lymph node biopsies a lymphocyte population was identified whose immunohystochemistry study allowed the diagnosis of T-cell lymphoma with expression of cytotoxic markers. The patient was started on chemotherapy with initial remission of the skin lesions but, subsequently, progression of systemic disease.

Os linfomas citotóxicos compreendem um espectro de linfomas de células T periféricos e linfomas Natural Killer que podem ter expressão cutânea primária ou secundária. Descrevemos o caso de um homem com 46 anos de idade, natural de Cabo Verde,com dermatose envolvendo a face e tronco constituída por pápulas monomorfas superfície lisa e polineuropatia sensitivo motora.A hipótese de Hanseníase foi colocada suportada por achados histopatológicos sugestivos sendo o doente referenciado à consulta de Doença de Hansen do nosso hospital. Em biopsia de pele e de gânglio identificou-se proliferação linfocitária cujo estudo imunohistoquímico permitiu o diagnóstico de linfoma T com expressão de marcadores citotóxicos. Iniciou quimioterapia verificando-se inicialmente remissão parcial das lesões cutâneas mas posteriormente a progressão da doença sistémica.