DNA immunization against proacrosin impairs fertility in male mice.

PROBLEM: Evaluation of proacrosin/acrosin ability to induce an immune response in male mice after genetic immunization and assessment of animal fertility. METHOD OF STUDY: Mice received 50 µg per animal of a plasmid containing the human proacrosin cDNA (pSF2-Acro) (control: empty plasmid, pSF2). The humoral response was evaluated by ELISA and immunocytochemistry. In vivo fertility was assessed by mating immunized males with control females. The effect of antibodies upon Ca(+2)-ionophore-induced acrosomal exocytosis (AE) and in vitro sperm-zona pellucida (ZP) binding was also studied. RESULTS: pSF2-Acro-immunized mice developed high levels of specific antibodies (P < 0.05) that recognized the sperm acrosomal cap. The number of fertile mice was lower (P = 0.027) in pSF2-Acro-immunized animals than in controls. Litter size was smaller (P < 0.05) in the pSF2-Acro group compared with controls. A negative correlation (P < 0.05) between antibody levels and litter size was found. Antiproacrosin/acrosin antibodies inhibited sperm-ZP binding (P < 0.0001) and Ca(+2)-ionophore-induced AE (P < 0.05). CONCLUSION: DNA immunization against proacrosin elicits an immune response in male mice associated with abnormal sperm functions and reduced fertility.

Identificación de proteínas espermáticas humanas involucradas en la interacción espermatozoide-zona pellucida / aaa

La interacción inicial entre las gametas es mediada por proteínas de superficie de la cabeza del espermatozoide y de la matriz extracelular del ovocito, la zona pellucida (ZP). El presente trabajo tuvo como objetivo la identificación de antígenos de superficie de espermatozoides humanos potencialmente involucrados en el reconocimiento de la ZP. Para ello se obtuvo un extracto de proteínas periféricas de espermatozoides humanos por tratamiento de las células con solución de alta fuerza iónica (HSE - High Salt Extract) (Buffer Pipes 100mM, pH 7,4; NaCl1M, sacarosa 0,25 M). Se desarrollaron anticuerpos policlonales (anti-HSE) que reconocieron numerosas proteínas en HSE (9-200 KDa). Las proteínas fueron separadas por electroforesis en geles de poliacrilamida, transferidas a membranas de nitrocelulosa y utilizadas para adsorber inmunoglobulinas de anti-HSE. Con éste método se obtuvieron anticuerpos contra dos polipéptidos mayoritarios de 49 (p49) y 66 (p66) kDa. Ambos anticuerpos (anti-p49 y anti-p66) reconocieron epitopes localizados en la cabeza y el flagelo de espermatozoides eyaculados y capacitados...(AU)

Identificación de proteínas espermáticas humanas involucradas en la interacción espermatozoide-zona pellucida / aaa

La interacción inicial entre las gametas es mediada por proteínas de superficie de la cabeza del espermatozoide y de la matriz extracelular del ovocito, la zona pellucida (ZP). El presente trabajo tuvo como objetivo la identificación de antígenos de superficie de espermatozoides humanos potencialmente involucrados en el reconocimiento de la ZP. Para ello se obtuvo un extracto de proteínas periféricas de espermatozoides humanos por tratamiento de las células con solución de alta fuerza iónica (HSE - High Salt Extract) (Buffer Pipes 100mM, pH 7,4; NaCl1M, sacarosa 0,25 M). Se desarrollaron anticuerpos policlonales (anti-HSE) que reconocieron numerosas proteínas en HSE (9-200 KDa). Las proteínas fueron separadas por electroforesis en geles de poliacrilamida, transferidas a membranas de nitrocelulosa y utilizadas para adsorber inmunoglobulinas de anti-HSE. Con éste método se obtuvieron anticuerpos contra dos polipéptidos mayoritarios de 49 (p49) y 66 (p66) kDa. Ambos anticuerpos (anti-p49 y anti-p66) reconocieron epitopes localizados en la cabeza y el flagelo de espermatozoides eyaculados y capacitados...

Antígenos de zona pelúcida en el ovocio humano: su importancia en las estrategias anticonceptivas / Zona pellucida antigens of human oocyte: its relevance in contraceptive strategies

La zona pelúcida (ZP) es una capa de glicoproteínas que rodea al ovocito de los mamíferos. Esta cubierta está formada por tre familias de glicoproteínas denominadas ZP1, ZP2 y ZP3, que difieren en sus propiedades inmunológicas y funcionales debido a modificaciones postraduccionales. Estudios llevados a cabo en el ratón sugieren que la función de estas proteínas se encuentra relacionada con el reconocimiento del espermatozoide por la ZP, confiriéndole muy probablemente la connotación de receptores. Esta observación ha permitido que varios laboratorios hayan iniciado la producción y obtención de las proteínas de la ZP, permitiendo la exploración de su papel en procesos fisiológicos y clínicos, y ha abierto la posibilidad de utilizarlas en el desarrollo de un método inmunológico anticonceptivo. En la actualidad la posibilidad de obtener anticuerpos específicos contra los constituyentes proteínicos de la ZP representa una estrategia novedosa para el control de la fertilidad en el humano.

Glicoesfingolípidos de membrana y test de viabilidad espermática / Glicosfingolipides ABH and sperm viability test

Los espermatozoides presentan estructuras glicoesfingolipídicas asociadas a la membrana que son propias de los antígenos ABH. Los glúcidos que conforman estas moléculas participan en la adhesión, reconocimiento e inhibición del contacto celular. Por esta razón los antígenos de grupo sanguíneo podrían tener relevancia en los mecanismos moleculares del proceso reproductivo. El objetivo de este trabajo fue evaluar si exite asociación entre los tests de integridad de la membrana espermática y la alteración en la expresión de los glicoesfingolípidos ABH. Se seleccionaron 50 pacientes infértiles cuyas muestras de semen fueron procesadas según normas OMS. La expresión ABH en los espermatozoides se estudió por técnicas inmunohematológicas y se clasificó según estuviera disminuida o ausente (grupo 1), o normal (grupo 2). La integridad de la membrana se evaluó con Test de Burgos y De Paola y Test Hiposmótico. Se efectuó la comparación de los dos grupos respecto de ambos test de viabilidad espermática. El análisis estadistico demostró que: 1) Existe diferencia significativa en la variable porcentaje de muertos (Burgos De Paola) para los dos grupos (p<0.001). 2) No existe diferencia significativa en la variable porcentaje de hinchados (Test Hiposmótico) para los dos grupos. Sobre la base de los resultados obtenidos podemos concluir que existe asociación entre expresión ABH disminuida e integridad de la menbrana del espermatozoide, principalmente a nivel de la cabeza. Lo que nos lleva a pensar que los glicoesfingolípidos ABH, se localizan preferentemente en esta zona del espermatozoide, involucrada fundamentalmente en la interacción con el ovocito. Nos proponemos ampliar la población en estudio e investigar el gen responsable de la estructura final de los antígenos del ABO tratando de profundizar en las alteraciones del plasmalema a nivel molecular (AU)

Glicoesfingolípidos de membrana y test de viabilidad espermática / Glicosfingolipides ABH and sperm viability test

Los espermatozoides presentan estructuras glicoesfingolipídicas asociadas a la membrana que son propias de los antígenos ABH. Los glúcidos que conforman estas moléculas participan en la adhesión, reconocimiento e inhibición del contacto celular. Por esta razón los antígenos de grupo sanguíneo podrían tener relevancia en los mecanismos moleculares del proceso reproductivo. El objetivo de este trabajo fue evaluar si exite asociación entre los tests de integridad de la membrana espermática y la alteración en la expresión de los glicoesfingolípidos ABH. Se seleccionaron 50 pacientes infértiles cuyas muestras de semen fueron procesadas según normas OMS. La expresión ABH en los espermatozoides se estudió por técnicas inmunohematológicas y se clasificó según estuviera disminuida o ausente (grupo 1), o normal (grupo 2). La integridad de la membrana se evaluó con Test de Burgos y De Paola y Test Hiposmótico. Se efectuó la comparación de los dos grupos respecto de ambos test de viabilidad espermática. El análisis estadistico demostró que: 1) Existe diferencia significativa en la variable porcentaje de muertos (Burgos De Paola) para los dos grupos (p<0.001). 2) No existe diferencia significativa en la variable porcentaje de hinchados (Test Hiposmótico) para los dos grupos. Sobre la base de los resultados obtenidos podemos concluir que existe asociación entre expresión ABH disminuida e integridad de la menbrana del espermatozoide, principalmente a nivel de la cabeza. Lo que nos lleva a pensar que los glicoesfingolípidos ABH, se localizan preferentemente en esta zona del espermatozoide, involucrada fundamentalmente en la interacción con el ovocito. Nos proponemos ampliar la población en estudio e investigar el gen responsable de la estructura final de los antígenos del ABO tratando de profundizar en las alteraciones del plasmalema a nivel molecular

Monoclonal antibody against a 52 K sperm surface protein inhibits sperm-zona pellucida interactions in the rat.

A major regulatory site for species specificity of fertilization in mammals lies at the level of sperm binding to the zona pellucida. This implies a high degree of complementarity between gamete and receptor molecules. These molecules support species-specific interactions between sperm and oocyte that lead to gamete fusion (fertilization). We identified a rat sperm head surface antigen using an IgG1 monoclonal antibody (HD1) against rat sperm of epididymis cauda. By electron microscopy the antigen was shown to be present on the plasma membrane surface of the sperm dorsal head. One- and two-dimensional immunoblotting analysis of sperm proteins demonstrated that HD1 reacted only with a 52 K molecule with a pI ranging from 6.6 to 7.2. The 52 K protein was first detected in situ by indirect immunofluorescence and showed to be underlining few elongated spermatids in testis. However, when the sperm reached the epididymis caput, the antigen was seen to be expressed on the dorsal surface of spermatozoa head. A similar fluorescence reaction was detected on sperms in the epididymis corpus and cauda. The specific spermatozoa-zona pellucida interaction was inhibited in the presence of monoclonal antibody HD1 in a sperm binding assay of in vitro fertilization.

Solubilización de la membrana de espermatozoide humano con n-dodecil sarcosinato de sodio: II. Estudios sobre el extracto / Spermatozoa submitted to ionic detergent treatment: studen on the sodium n-dodceyl sarcosinate extract

El n-dodecil sarcosinato de sodio produce la solubilización del espermatozoide humano con algo de contaminación acrosomal. El extracto está compuesto por una mezcla de productos con pesos moleculares y características inmunológicas similares a las del plasma seminal humano. El hecho de que la antigenicidad se mantenga luego de la solubilización, hace que ésta sea un comienzo útil en el aislamiento de moléculas que juegan un papel en la infertilidad por causas inmunológicas

Solubilización de la membrana de espermatozoide humano con n-dodecil sarcosinato de sodio: II. Estudios sobre el extracto / Spermatozoa submitted to ionic detergent treatment: studen on the sodium n-dodceyl sarcosinate extract

El n-dodecil sarcosinato de sodio produce la solubilización del espermatozoide humano con algo de contaminación acrosomal. El extracto está compuesto por una mezcla de productos con pesos moleculares y características inmunológicas similares a las del plasma seminal humano. El hecho de que la antigenicidad se mantenga luego de la solubilización, hace que ésta sea un comienzo útil en el aislamiento de moléculas que juegan un papel en la infertilidad por causas inmunológicas