Reproductive outcomes of intracytoplasmic sperm injection (ICSI) in good-prognosis patients who electively decided to limit the number of oocytes used for microinjection: a two-center comparative study.

OBJECTIVES: The aim of the study was to compare the outcomes of intracytoplasmic sperm injection/embryo transfer (ICSI/ET) between two IVF centers with similar pregnancy rates and embryo transfer policy but with two different approaches to good-prognosis patients who intentionally chose to limit the number of oocytes used for ICSI. MATERIAL AND METHODS: It was a retrospective two-center comparative study A total of 218 patients after successful retrieval of >10 mature oocytes following ovarian hyperstimulation were included in the study The number of fertilized oocytes used during ICSI/ET was limited to 6 and 10 in 108 and 110 patients of the Centre for Reproductive Medicine KRIOBANK and VitroLive Fertility Clinic, respectively RESULTS: No significant differences in the implantation rate (29.93% vs. 29.54%; p=0.94) and ongoing pregnancy rate (39.81% vs. 45.45%, p=0.40) were observed between patients who electively fertilized 6 as compared to 10 oocytes, respectively However in patients who deliberately limited the number of fertilized oocytes to 6 the following were observed: i) significantly fewer embryos available for ET (2.89 ± 1.23 vs. 3.77 ± 1.48, p<0.0 1); ii) considerably lower number of frozen embryos per cycle (1.05 ± 1.30 vs. 2.00 ± 1.67, p<0.01), and iii) lower rates of cycles with embryo cryopreservation (4 7.22% vs. 72.72%, p<0.01) as compared to patients with 10 fertilized oocytes. CONCLUSIONS: Elective fertilization of 6 vs. 10 oocytes does not adversely affect fresh ICSI/ET outcome in normal-responding patients. Restricted number of oocytes used for ICSI/ET may be a favorable alternative for couples who do not wish to cryopreserve surplus human embryos.

Oocyte degeneration after intracytoplasmic sperm injection: a multivariate analysis to assess its importance as a laboratory or clinical marker.

OBJECTIVE: Oocyte degeneration has historically been associated with the intracytoplasmic (ICSI) technique. We sought to determine whether oocyte degeneration rates were associated with the technician performing the procedure, the baseline characteristics of the patient, and/or ovarian stimulation variables. We also evaluated whether the degeneration rate could serve as a surrogate marker for implantation potential. DESIGN: Cohort study. SETTING: Academic medical center. PATIENT(S): Couples undergoing ICSI. INTERVENTION(S): Six thousand six hundred fifty-three injected oocytes were analyzed to determine whether the degeneration rate was technician dependent. Two hundred thirty first-entry down-regulated cycles were examined to identify predictors associated with oocyte degeneration. Multivariate analyses were performed using generalized linear model routines. MAIN OUTCOME MEASURE(S): Oocyte degeneration rates and implantation rates. RESULT(S): Neither the ICSI technician nor the stripping technician was associated with the oocyte degeneration rate. However, the day 3 FSH, number of mature oocytes retrieved, and E2 levels on the day of hCG were significant independent predictors of degeneration rate. Physician-adjustable ovarian stimulation variables were not associated with the degeneration rate. The degeneration rate did not appear to be associated with the implantation rate. CONCLUSION(S): These data suggest that oocyte degeneration is not technician or physician dependent. Degeneration is likely a function of the inherent oocyte quality in women who underwent ovarian stimulation. However, the remaining cohort of retrieved oocytes appears to be unaffected by virtue of an uncompromised implantation rate.

Microinjection of orexin into the rat nucleus tractus solitarius causes increases in blood pressure.

Orexin A (OX-A) and orexin B (OX-B), also known as hypocretin-1 and hypocretin-2, have been suggested to play a role cardiovascular control. The nucleus tractus solitarius (NTS), located in the dorsal medulla plays an essential role in neural control of the cardiovascular system. Orexin-immunoreactive axons have been demonstrated within this nucleus suggesting that NTS may be a site through which OX acts to influence cardiovascular control. We report here that microinjection of OX-A into the NTS of urethane anesthetized rats causes increases in blood pressure (10(-9) M, mean AUC=607.1+/-65.65 mmHg s, n=5) and heart rate (10(-9) M, mean AUC=16.15+/-3.3 beats, n=5) which returns to baseline within 90 s. We show that these effects are dose related and site specific. Microinjection of OX-B into NTS elicited similar increases in BP (mean AUC=680.8+/-128.5 mmHg s, n=4) to that of OX-A suggesting specific actions at the OX(2)R receptor. These observations support the conclusion that orexins act as chemical messengers in the NTS likely influencing the excitability of cardiovascular neurons in this region and thus regulating global cardiovascular function.

Intrapreoptic microinjection of TNF-alpha enhances non-REM sleep in rats.

Tumor necrosis factor-alpha (TNFalpha) is involved in sleep regulation. Peripheral or central administration of TNFalpha induces non-rapid eye movement sleep (NREMS) in many species. However, the brain site responsible for TNF-enhanced NREMS remains unclear. Thus, we tested the hypothesis that the preoptic area (POA) of the anterior hypothalamus, a crucial site for sleep regulation, is involved in TNF-induced sleep responses in rats. Unilateral microinjection of TNFalpha (2, 20 and 100 ng) or a TNF receptor fragment (TNFRF; 1.25, 5.0 and 12.5 microg) into the POA was performed at dark onset and light onset, respectively. The two higher doses of TNFalpha increased NREMS and brain temperature with little effect on REMS and EEG slow wave activity. These effects were lost after the heat-treatment of TNFalpha. The two higher doses of the TNFRF decreased NREMS without affecting the other parameters measured. Combined with previous results showing diurnal variations of TNFalpha in the hypothalamus, the present data suggest that POA TNFalpha is involved, in part, in the regulation of physiological sleep.

Evaluación citológica de la falla de fertilización en el ICSI / Cytology valuation of failed of fertilization after intracytoplasmic sperm injection

Objetivo: Determinar si la falla de fertilización en el ICSI fue debida a problemas técnicos o a la calidad intrínseca de las gametas. Diseño: Aplicación de la técnica de Tarkowski en los ovocitos que no evindeciaron pronúcleos entre las 15 y 19 horas ni clivaron entre las 40y 48 horas después de efectuado el ICSI. Pacientes: Ovocitos no fertilizados provenientes de 152 mujeres que accedieron a 221 ciclos de ICSI, correspondiendo 82 por ciento a factores masculinos y 18 por ciento a fallas previas de FIV. Principal evolución: El hallazgo citológico de los ovocitos no fertilizados luego del ICSI. Resultados: De los 158 ovocitos citológicamente procesados, 32 fueron no informativos. En los 126 informativos los hallazgos fueron los siguientes: 16 (12,7 por ciento) ovocitos sin la presencia del espermatozoide inyectado, 32 (25,5 por ciento) con la presencia de un espermatozoide intacto, 14 (11 por ciento) con el espermatozoide hinchado, 34 (27 por ciento) con cromosomas de espermatozoides dispersos (condensación prematura de los cromosomas del espermatozoide), 1 (0,8 por ciento) con un pronúcleo, 19 (15 por ciento) con dos pronúcleos, 1 (0,8 por ciento) con cuatro pronúcleos, 2 (1,6 por ciento) con dos complementos haploides de cromosomas mitóticos correspondientes a los pronúcleos, 2 (1,6 por ciento) con un núcleo singámico y 5 (4 por ciento) con un complemento diploide de cromosomas mitóticos correspondiente a la primera división mitótica. Conclusiones: Las principales causas de fallas fueron ovocitos no embriogénicos (50,5 por ciento) e incapacidad fertilizante del espermatozoide (36,5 por ciento). El 13 por ciento fue debida a problemas técnicos de la inyección

Evaluación citológica de la falla de fertilización en el ICSI / Cytology valuation of failed of fertilization after intracytoplasmic sperm injection

Objetivo: Determinar si la falla de fertilización en el ICSI fue debida a problemas técnicos o a la calidad intrínseca de las gametas. Diseño: Aplicación de la técnica de Tarkowski en los ovocitos que no evindeciaron pronúcleos entre las 15 y 19 horas ni clivaron entre las 40y 48 horas después de efectuado el ICSI. Pacientes: Ovocitos no fertilizados provenientes de 152 mujeres que accedieron a 221 ciclos de ICSI, correspondiendo 82 por ciento a factores masculinos y 18 por ciento a fallas previas de FIV. Principal evolución: El hallazgo citológico de los ovocitos no fertilizados luego del ICSI. Resultados: De los 158 ovocitos citológicamente procesados, 32 fueron no informativos. En los 126 informativos los hallazgos fueron los siguientes: 16 (12,7 por ciento) ovocitos sin la presencia del espermatozoide inyectado, 32 (25,5 por ciento) con la presencia de un espermatozoide intacto, 14 (11 por ciento) con el espermatozoide hinchado, 34 (27 por ciento) con cromosomas de espermatozoides dispersos (condensación prematura de los cromosomas del espermatozoide), 1 (0,8 por ciento) con un pronúcleo, 19 (15 por ciento) con dos pronúcleos, 1 (0,8 por ciento) con cuatro pronúcleos, 2 (1,6 por ciento) con dos complementos haploides de cromosomas mitóticos correspondientes a los pronúcleos, 2 (1,6 por ciento) con un núcleo singámico y 5 (4 por ciento) con un complemento diploide de cromosomas mitóticos correspondiente a la primera división mitótica. Conclusiones: Las principales causas de fallas fueron ovocitos no embriogénicos (50,5 por ciento) e incapacidad fertilizante del espermatozoide (36,5 por ciento). El 13 por ciento fue debida a problemas técnicos de la inyección (AU)

Embarazo con espermatozoides testiculares / Pregnacy with testicular spermatozoa

En un paciente con diagnóstico de agenesia de vías espermáticas se propuso afectuar una aspiración epididimaria asociada a FIV (fertilización in vitro). En la exploración excrotal no se encontró epidídimo (debido probablemente a antecedente quirúrgico de biopsia epididimaria) por lo que se efectuó una biopsia testicular. Este material fue procesado obteniéndose escasos espermatozoides (algunos cientos). Estos espermatozoides fueron inyectados en el citoplasma de los ovocitos de la esposa (técnica de ICSI).De los 18 ovocitos inyectados, 3 se dañaron durante el procedimiento y a las 16 horas se observaron signos de fertilización normal en 6 de ellos, prosiguiendo el desarrollo 4 de embriones que fueron transferidos al útero por vía transcervical, 3 en estado de 8 células y uno de 6 células, habiéndosele efectuado previamnete en la zona pelúcida de cada uno de los embriones un orificio de 20 micrones con solución ácida de Tyrode. A los 15 días de la transferencia (2-1-95) el resultado de la subunidad beta de HCG fue positiva, detectándose al mes (2-2-95) por ecografía un embrión de 19 mm, cursando un embarazo normal

Embarazo con espermatozoides testiculares / Pregnacy with testicular spermatozoa

En un paciente con diagnóstico de agenesia de vías espermáticas se propuso afectuar una aspiración epididimaria asociada a FIV (fertilización in vitro). En la exploración excrotal no se encontró epidídimo (debido probablemente a antecedente quirúrgico de biopsia epididimaria) por lo que se efectuó una biopsia testicular. Este material fue procesado obteniéndose escasos espermatozoides (algunos cientos). Estos espermatozoides fueron inyectados en el citoplasma de los ovocitos de la esposa (técnica de ICSI).De los 18 ovocitos inyectados, 3 se dañaron durante el procedimiento y a las 16 horas se observaron signos de fertilización normal en 6 de ellos, prosiguiendo el desarrollo 4 de embriones que fueron transferidos al útero por vía transcervical, 3 en estado de 8 células y uno de 6 células, habiéndosele efectuado previamnete en la zona pelúcida de cada uno de los embriones un orificio de 20 micrones con solución ácida de Tyrode. A los 15 días de la transferencia (2-1-95) el resultado de la subunidad beta de HCG fue positiva, detectándose al mes (2-2-95) por ecografía un embrión de 19 mm, cursando un embarazo normal (AU)