Aislamiento y caracterizacion parcial de fracciones con actividad ribonucleasa a partir del latex de calotropis procera (Aiton) W.T. Aiton y pedilanthus tithymaloides (L.) poit / Isolation and partial characterization of fractions with ribonuclease activity from latex of calotropis procera (Aiton) W.T. Aiton and pedilanthus tithymaloides (L.) poit

Con el objetivo de aislar y caracterizar parcialmente las enzimas ribonucleasas (RNasas) contenidas en el látex de Calotropis procera y Pedilanthus tithymaloides, se colectaron muestras de plantas adultas. Las proteínas solubles fueron extraídas con acetato de sodio y centrifugación a 16.000 x g durante 15 min y fraccionadas por cromatografía de intercambio iónico. Se estimó la masa molecular a través de ecuaciones de regresión lineal. Se realizaron pruebas de glicosilación. En ambas especies, las proteínas con actividad RNasa presentaron una masa molecular entre 28 y 30 kDa. No existe evidencia de proteínas glicosiladas en el látex de C. procera. En P. tithymaloides la RNasa es una proteína glicosilada.

In order to isolate and characterize partially ribonucleases (RNases) enzymes contained in the latex from Calotropis procera and Pedilanthus tithymaloides, samples were collected from mature plants. Soluble proteins were extracted with sodium acetate and centrifugation at 16,000 xg for 15 min and fractionated by ion exchange chromatography. Molecular mass was estimated by linear regression equations. Glycosylation tests were conducted. In both species, proteins with RNase activity showed a molecular mass between 28 and 30 kDa. No evidence of glycosylated proteins in latex from C. procera. In P. tithymaloides, RNase may be a glycosylated protein.

Ensayo colorimétrico de hibridación en microplacas para la detección de Mycobacterium leprae 16s rRNA en muestras clínicas

Se ha desarrollado un ensayo colorimétrico de hibridación en microplacas para simplificar la detección de Mycobacterium leprae en muestras clínicas. La técnica detecta los productos amplificados por un ensayo muy sensible RT-PCR con diana sobre una secuencia especie-específica del rRNA 16S bacteriano. El test detectó hasta 10 bacilos aislados de los nódulos linfáticos de ratones desnudos infectados o biopsias cutáneas humanas. La sensibilidad para el diagnóstico en nuestras clínicas se evaluó en 58 biopsias cutáneas de 58 pacientes de lepra sin tratar. El ensayo detectó amplificados RT-PCR de M. leprae en el 100 por ciento de las biopsias de pacientes con lepra multibacilar y el 80 por ciento de biopsias de pacientes paucibacilares, con una sensibilidad total de 91.3 por ciento. El test resultó ser muy específico ya que no se detectaron amplificaciones en las biopsias de pacientes normales o afectados de otras enfermedades distintas a la lepra. La variante colorimétrica es más rápido, sensible y simplifica la detección de los amplificados RT-PCR comparado con el análisis por Southern blot. Puede ser útil para el diagnóstico de los casos difíciles de lepra y como el RNA se degrada rápidamente después de la inactivación celular siendo útil para la evaluación de la respuesta al tratamiento y distinción de recidivas de reacción (AU)