Enhancing radiotherapy response via intratumoral injection of a TLR9 agonist in autochthonous murine sarcomas.

Radiation therapy (RT) is frequently used to treat cancers, including soft-tissue sarcomas. Prior studies established that the toll-like receptor 9 (TLR9) agonist cytosine-phosphate-guanine oligodeoxynucleotide (CpG) enhances the response to RT in transplanted tumors, but the mechanisms of this enhancement remain unclear. Here, we used CRISPR/Cas9 and the chemical carcinogen 3-methylcholanthrene (MCA) to generate autochthonous soft-tissue sarcomas with high tumor mutation burden. Treatment with a single fraction of 20 Gy RT and 2 doses of CpG significantly enhanced tumor response, which was abrogated by genetic or immunodepletion of CD8+ T cells. To characterize the immune response to CpG+RT, we performed bulk RNA-Seq, single-cell RNA-Seq, and mass cytometry. Sarcomas treated with 20 Gy and CpG demonstrated increased CD8 T cells expressing markers associated with activation and proliferation, such as Granzyme B, Ki-67, and IFN-γ. CpG+RT also upregulated antigen presentation pathways on myeloid cells. Furthermore, in sarcomas treated with CpG+RT, TCR clonality analysis suggests an increase in clonal T cell dominance. Collectively, these findings demonstrate that CpG+RT significantly delays tumor growth in a CD8 T cell-dependent manner. These results provide a strong rationale for clinical trials evaluating CpG or other TLR9 agonists with RT in patients with soft-tissue sarcoma.

Efecto de la ciclosfosfamida sobre el crecimiento de un sarcoma transplantable de rata S-E 100 / Effect of cyclophosphamide on a transplantable rat sarcoma S-E 100

La ciclosfosfamida (Cy) se utiliza en el tratamiento del cáncer como droga citotóxica, produciendo grados variables de inmunodepresión. En trabajos experimentales se ha observado que al administrarse en dosis bajas aumenta la respuesta inmune, preferentemente la mediada por células. Este efecto se debería a una acción selectiva sobre los linfocitos T supresores. Con el objeto de investigar la Cy como moduladora de la respuesta inmune antitumoral se estudió el efecto de una dosis única (20 mg/Kg de peso) sobre el crecimiento de un sarcoma transplantable de rata (S-E100). La droga se administró a distintos días del desafío tumoral. Previamente, se evaluó el efecto de la droga sobre el peso del bazo, el número de células esplénicas y la viabilidad de las células S-E100 in vivo ]cámaras de difusión) con el objeto de determinar una dosis que no ejerciera una acción citotóxica inmediata sobre las células esplénicas ni sobre las células tumorales. Los resultados mostraron que una dosis única de 20mg/Kg de peso no modificó el peso del bazo, el número de células esplénicas ni la viabilidad de las células neoplásicas. Esta misma dosis produjó, en cambio, distintos efectos sobre el crcimiento del S-E100 dependidendo del día de su administración. Cuando se administró la Cy a los 7, 14 o 21 días del crcimiento tumoral se obtuvo la regresión del 100% de los tumores. la histopatología de los tumoes en regresión mostró alteraciones compatibles con un rechazo mediado por células (AU)

Efecto de la ciclosfosfamida sobre el crecimiento de un sarcoma transplantable de rata S-E 100 / Effect of cyclophosphamide on a transplantable rat sarcoma S-E 100

La ciclosfosfamida (Cy) se utiliza en el tratamiento del cáncer como droga citotóxica, produciendo grados variables de inmunodepresión. En trabajos experimentales se ha observado que al administrarse en dosis bajas aumenta la respuesta inmune, preferentemente la mediada por células. Este efecto se debería a una acción selectiva sobre los linfocitos T supresores. Con el objeto de investigar la Cy como moduladora de la respuesta inmune antitumoral se estudió el efecto de una dosis única (20 mg/Kg de peso) sobre el crecimiento de un sarcoma transplantable de rata (S-E100). La droga se administró a distintos días del desafío tumoral. Previamente, se evaluó el efecto de la droga sobre el peso del bazo, el número de células esplénicas y la viabilidad de las células S-E100 in vivo ]cámaras de difusión) con el objeto de determinar una dosis que no ejerciera una acción citotóxica inmediata sobre las células esplénicas ni sobre las células tumorales. Los resultados mostraron que una dosis única de 20mg/Kg de peso no modificó el peso del bazo, el número de células esplénicas ni la viabilidad de las células neoplásicas. Esta misma dosis produjó, en cambio, distintos efectos sobre el crcimiento del S-E100 dependidendo del día de su administración. Cuando se administró la Cy a los 7, 14 o 21 días del crcimiento tumoral se obtuvo la regresión del 100% de los tumores. la histopatología de los tumoes en regresión mostró alteraciones compatibles con un rechazo mediado por células

Influencia de los macrofagos intratumorales en el crecimiento de un sarcoma de rata / Influence of intratumoral macrophages on the growth of a rat sarcoma

La eliminación de las células fagocíticas activas (CFA) de las suspensiones de um sarcoma de rata (S-E 100), provoca um menor desarrollo del mismo en ratas de línea "m", probablemente porque esas células que infiltran el tumor poseen funciones inhibitorias de la respuesta inmune antitumoral. En este trabajo se investiga si el efecto atribuido a las CFA es general, o depende del tipo de interación que se genera entre los macrófagos (MY) que infiltran el tumor donante y el huesped receptor. El S-E 100 se inoculó en ratas de línea "m" (S-E 100) y de línea "c" (S-E 100, c); las CFA se eliminaron con hierro carbonílico (FeC), inoculando las células sobrenadantes (S.FeC - m) y (S.FeC-c) y las suspensiones celulares testigos (S.Te-m) y (S.Te - c). Todos los inóculos fueron de 1 x 10**6 células vía s.c., enreceptores adultos "m" y "c". La eliminación de las CFA indujo un menor desarrollo del tumor en receptores "m", sólo si el inóculo provenía de S-E 100,m. En el receptor "c" no se observó ninguna variación en el crecimiento del tumor, tanto si el inóculo prevenía de S-E 100, como de S-E 100,c.Se postula que el efecto inhibidor de la respuesta inmune ejercio por los MY que infiltran el S-E 100 no es un efecto general, sino particular de una línea y sólo obtiene si los MY intratumorales son singénicos con el receptor (AU)

Influencia de los macrofagos intratumorales en el crecimiento de un sarcoma de rata / Influence of intratumoral macrophages on the growth of a rat sarcoma

La eliminación de las células fagocíticas activas (CFA) de las suspensiones de um sarcoma de rata (S-E 100), provoca um menor desarrollo del mismo en ratas de línea "m", probablemente porque esas células que infiltran el tumor poseen funciones inhibitorias de la respuesta inmune antitumoral. En este trabajo se investiga si el efecto atribuido a las CFA es general, o depende del tipo de interación que se genera entre los macrófagos (MÝ) que infiltran el tumor donante y el huesped receptor. El S-E 100 se inoculó en ratas de línea "m" (S-E 100) y de línea "c" (S-E 100, c); las CFA se eliminaron con hierro carbonílico (FeC), inoculando las células sobrenadantes (S.FeC - m) y (S.FeC-c) y las suspensiones celulares testigos (S.Te-m) y (S.Te - c). Todos los inóculos fueron de 1 x 10**6 células vía s.c., enreceptores adultos "m" y "c". La eliminación de las CFA indujo un menor desarrollo del tumor en receptores "m", sólo si el inóculo provenía de S-E 100,m. En el receptor "c" no se observó ninguna variación en el crecimiento del tumor, tanto si el inóculo prevenía de S-E 100, como de S-E 100,c.Se postula que el efecto inhibidor de la respuesta inmune ejercio por los MÝ que infiltran el S-E 100 no es un efecto general, sino particular de una línea y sólo obtiene si los MÝ intratumorales son singénicos con el receptor