Determinación del tiempo máximo para recuperar y criopreservar espermatozoides obtenidos de la cola del epidídimo en caninos post orquiectomía / Optimal time for recovery and cryopreservation of epididymal canine sperm after orchiectomy

RESUMEN

El objetivo del estudio fue determinar el tiempo máximo para recuperar y criopreservar espermatozoides obtenidos de la cola del epidídimo de caninos post orquiectomía. Se obtuvo testículos de 20 caninos entre 1 y 8 años de edad. Los testículos se colocaron en cloruro de sodio al 0.9% y se almacenaron a 5 ºC durante 0, 24, 48 y 72 horas. Los espermatozoides fueron recuperados al cortar la cola del epidídimo en un dilutor en base a Tris-citrato-fructosa. Para el proceso de criopreservación, se añadió yema de huevo (20%) y glicerol (5%) a la muestra diluida (espermatozoides + dilutor). La nueva dilución fue envasada en pajillas de 0.5 ml y sometidas a una curva de enfriamiento para luego sercolocadas en nitrógeno líquido. Se evaluó motilidad total, motilidad progresiva e integridad funcional de membrana. Previo a la criopreservación, la motilidad total varió significativamente después de 24 y 72 horas de almacenamiento a 5 ºC (p<0.05). Sin embargo, la motilidad total encontrada después del proceso de criopreservación sólo varió después de 72 horas de almacenamiento a 5 ºC (p<0.05). Similar tendencia se observó para la motilidad progresiva. La integridad funcional de membrana plasmática, tanto antes como después del proceso de criopreservación, no sufrió cambios significativos entre los grupos. Los resultados demuestran que es posible recuperar y criopreservar espermatozoides epididimarios hasta después de 48 horas de la orquiectomía del animal.

ABSTRACT

The aim of the study was to determine the maximum time to recover and cryopreserve spermatozoa from the tail of canine epididymis post orchiectomy. The testes were obtained through orchiectomy from 20 dogs aged 1 to 8 years. The testis were placed in sodium chloride 0.9% and stored at 5 °C for 0, 24, 48 and 72 hours. Spermatozoa were recovered by cutting the tail of the epididymis in an extender based on Tris-citrate-fructose. For the cryopreservation process, egg yolk (20%) and glycerol (5%) was added to the diluted sample (sperm + dilutor).The new dilution was packaged in 0.5 ml straws, which were subjected to a cooling curve and then placed in liquid nitrogen. Total motility, progressive motility and functional integrity of the membrane were evaluated. Before cryopreservation process, total motility after 24 and 72 hours of storage at 5 ºC decreased (p<0.05). However, total motility found after cryopreservation process varied significantly only after 72 hours of storage at 5 ºC (p<0.05). Similar trend was observed for progressive motility. The functional integrity of membrane, both before and after the cryopreservation process, did not suffer significant changes between groups. The results showed that it is possible to collect and cryopreserve epididymal sperm until 48 hours of orchiectomy.