Estudo do perfil citogenético e de expressão dos genes do complexo Polycomb na leucemia mielóide aguda da infância / [Study of the cytogenetic profile and expression of the Polycomb complex genes in acute childhood myeloid leukemia]

RESUMO

A LMA é uma neoplasia hematológica caracterizada pela proliferação anormal de precursores mielóides na medula óssea decorrente de uma parada no processo de diferenciação destas células. A etiologia da leucemia ainda é desconhecida, mas alguns fatores, incluindo a presença de translocações cromossômicas podem contribuir para o aparecimento desta neoplasia.Três subgrupos de alterações genéticas vêm sendo definidos nos últimos anos como os de maior freqüência em LMA primária da criança. O grupo que envolve rearranjos do gene CBF (core binding factor) t(8;21)(q22;q22) e inv(16)(p13;q22); as leucemias associadas a alterações no gene MLL (anormalidades da região 11q23); e as leucemias associadas ao rearranjo PML-RAR t(15;17)(q22;q12). Apesar de todo o conhecimento já acumulado sobre as bases moleculares dos processos leucemogênicos da LMA, alterações em reguladores epigenéticos vem ganhando destaque na patologia da leucemia. Neste contexto, os genes pertencentes ao complexo Gênico Polycomb (PcG) estão associados ao silenciamento epigenético durante o desenvolvimento embrionário e durante a carcinogênese de diversos tumores, incluindo a leucemia mielóide aguda (LMA). Portanto, o objetivo deste estudo foi realizar uma análise citogenética e de expressão dos genes do complexo PcG em crianças diagnosticadas com LMA para contribuir para o entendimento da biologia desta neoplasia tão heterogênea. As amostras de medula óssea de 84 pacientes foram tratadas de acordo com os protocolos padrões e, as técnicas de citogenética, envolvendo técnicas moleculares foram realizadas, sendo possível evidenciar uma alta taxa de anormalidades cromossômicas de 89%. Além disso, uma alta taxa da t(15;17)(q22;q12) pode ser observada, assim como, várias alterações não-recorrentes puderam ser identificadas, já que várias técnicas de citogenética molecular de alta resolução foram utilizadas. Dos 84 pacientes, 52 pacientes foram avaliados quanto ao perfil de expressão de alguns dos genes PcG, utilizando a metodologia de PCR em tempo real (RT-qPCR). Com isso, foi possível observar altos níveis relativos de mRNA dos genes PcG nos pacientes quando comparados com os doadores saudáveis. Quando foram comparados os níveis de expressão destes genes de acordo com os subtipos morfológicos, o subtipo LMA-M3 apresentou os níveis mais aumentados, principalmente nos pacientes menores de 8 anos de idade. Com relação aos dados clínicos, apesar da grande variação, a LMA apresentou altos níveis de mRNA dos genes PcG em pacientes com mais de 50.000 leucócitos e a LMA-M3 apresentou níveis aumentados de mRNA destes genes nos pacientes com baixa contagem de plaquetas. Com isso, podemos concluir que apesar da variação nos níveis de mRNA dos genes PcG estudados na LMA, foi possível observar uma correlação destes níveis com os dados clínicos dos pacientes, como os subtipos morfológicos, com a idade, contagem leucocitária e plaquetas na LMA-M3. (AU)

ABSTRACT

AML is a hematologic malignancy characterized by the abnormal proliferation of myeloid precursors in the bone marrow due to an arrest of differentiation process of these cells. The etiology of leukemia is unknown, but some factors, including the presence of chromosomal translocations may contribute to the emergence of this neoplasia. Three subgroups of genetic alterations have been defined in recent years as the most frequent in primary childhood AML. The group involving core binding factor gene rearrangements t(8;21)(q22; q22), and inv(16)(p13;q22); leukemias associated with alterations in the MLL gene (11q23 abnormalities in the region ); leukemias associated with PML-RARa rearrangement t(15;17)(q22;q12). Despite all the knowledge already accumulated regarding the molecular basis of AML leukemogenic processes, changes in epigenetic regulators have been gaining attention in the pathology of leukemia. In this context, the Polycomb Complex genes (PcG) are associated with epigenetic silencing during embryonic development and during carcinogenesis of several tumors, including acute myeloid leukemia (AML). Therefore, the aim of this study was to evaluate a cytogenetic and PcG genes expression profiles in children diagnosed with AML to contribute to the understanding of the biology of this heterogeneous tumor. The bone marrow samples of 84 patients were treated according to standard protocols, and the cytogenetic analysis involving molecular techniques were performed, and were able to demonstrate a high rate of chromosomal abnormalities in 89% of cases. In addition, a high rate of t(15;17)(q22;q12) may be observed, as well as several non -recurring changes could be identified, since several high resolution molecular cytogenetic techniques were used. From the 84 patients' samples, 52 were evaluated for the expression of some of the PcG genes profile, using the real-time PCR methodology. Thus, it was possible to observe mRNA high relative levels of PcG genes in patients compared with healthy donors. When the expression levels of these genes according to the morphological subtypes were compared, AML-M3 subtype showed the most increased levels, mainly in children under the age of 8. Regarding clinical data, despite the wide variation AML showed high mRNA levels of PcG genes in patients with more than 50,000 leukocytes and AML - M3 showed increased mRNA levels of these genes in patients with low platelet counts. Thus, we conclude that despite the variation in mRNA levels of PcG genes studied in AML, we observed a correlation of these levels with clinical patient data, such as morphological subtypes, with age, white blood count and platelets in AML - M3. (AU)