Localização subcelular de XIAP: implicações na proliferação celular, resistência às drogas e prognóstico no câncer de mama / [Subcellular localization of XIAP: implications for cell proliferation, drug resistance and prognosis in breast cancer]

RESUMO

O câncer de mama é o tipo tumoral que mais acomete as mulheres no Brasil e no mundo, além de causar elevadas taxas de morbidade e mortalidade. Essa neoplasia tem como importante característica o desbalanço entre proliferação e morte celular. Nesse contexto, se insere a XIAP, uma proteína inibidora da apoptose (IAP), que exerce sua função antiapoptótica através da ligação e inibição de caspases, bem como ubiquitinação de proteínas-alvo. A XIAP é encontrada principalmente na porção citoplasmática tanto em células tumorais quanto em não neoplásicas, porém estudos mostram que também é possível detectar a sua expressão no núcleo. Dados prévios do nosso grupo mostram que a XIAP pode estar localizada tanto no citoplasma quanto no núcleo em pacientes com câncer de mama, porém não há muitos relatos acerca dos papéis exercidos pela XIAP em diferentes compartimentos celulares. O objetivo do presente estudo é elucidar o impacto da XIAP e sua localização subcelular na proliferação celular, resistência às drogas e no prognóstico no câncer de mama. Nossos dados mostram que todas as linhagens celulares investigadas apresentaram XIAP citoplasmática, exceto as células MCF-7 DoxR , resistentes à doxorrubicina (dox), que também apresentaram XIAP na fração nuclear, como avaliado por fracionamento subcelular e Western blotting. Pelos ensaios de MTT e clonogênico, observamos que o tratamento com a dox diminuiu a viabilidade celular e a capacidade de formação de colônias nas células MDA-MB-231 e MCF-7, porém o mesmo resultado não foi observado nas células MCF-7 DoxR , sugerindo que a localização nuclear de XIAP esteja associada ao fenótipo de resistência à dox. Corroborando esses achados, as células MCF-7 TaxR , resistentes ao paclitaxel, apresentaram expressão nuclear de XIAP, confirmando uma possível correlação da presença de XIAP nuclear com o perfil de resistência aos quimioterápicos utilizados no tratamento do câncer de mama, independentemente do mecanismo de ação. Além disso, o tratamento com as drogas não alterou a localização subcelular de XIAP em nenhuma das células testadas. Adicionalmente, a indução da superexpressão dos mutantes XIAP∆RING e XIAPNLS C-term por transfecção transiente, onde é possível detectar expressão de XIAP nuclear, resultou no aumento da capacidade proliferativa das células MCF-7, como examinado pela contagem de células, ensaio clonogênico e de viabilidade celular. De maneira consistente, a indução de XIAP no núcleo promoveu a resistência ao tratamento com dox, confirmando os nossos achados prévios referentes à presença da XIAP no núcleo de células quimiorresistentes. Por fim, a análise de curvas de Kaplan-Meyer revelou que a localização nuclear da XIAP conferiu um prognóstico adverso nas pacientes negativas para receptores hormonais, enquanto que a presença de XIAP citoplasmática conferiu uma tendência ao melhor prognóstico nas pacientes desse subgrupo. De acordo, a expressão de XIAP citoplasmática foi associada à idade igual ou superior a 50 anos e ao tamanho de tumor T1, fatores de prognóstico favorável no câncer de mama. Em conjunto, nossos dados mostram que a expressão de XIAP pode ser encontrada em diferentes compartimentos subcelulares em linhagens celulares e amostras de pacientes com câncer de mama, estando a presença de XIAP no núcleo associada a um fenótipo de maior proliferação e resistência às drogas in vitro, além de um prognóstico desfavorável em pacientes com câncer de mama negativas para receptores hormonais.