Investigação da diversidade proteica, transcricional e genômica de TP53 e seu impacto em adenocarcinomas colorretais / Investigation of protein, transcriptional and genomic diversity of TP53 and its impact on colorectal adenocarcinomas

RESUMO

O câncer colorretal (CCR) é resultado da interação de fatores ambientais com múltiplos fatores genéticos. O gene TP53 regula muitas funções celulares e apresenta-se mutado na maioria dos casos de CCR. Mutações, polimorfismos e variações de expressão gênica fornecem a base genética para a diversidade humana e podem ter um papel crucial na variabilidade fenotípica e susceptibilidade às doenças. O estudo analisou as alterações em TP53 encontradas e buscou associações entre os achados com a expressão imunoistoquímica e os dados clinicopatológicos. Foram realizadas análises da proteína, do cDNA e gDNA de TP53 em 101 pacientes com CCR submetidos à cirurgia no Hospital AC Camargo, no período de 2000-2006. Foram encontradas mutações em TP53 em 54,5% dos tumores. As mutações foram mais frequentes no grupo de pacientes que apresentaram reação imunoistoquímica positiva para p53 (48,5%) do que no grupo negativo (51,5%) (p < 0,001). Foram encontradas três (3%) mutações sinônimas, o que corresponde a 8,8% das mutações pontuais; uma (33,4%) delas levando à ruptura do sítio de splicing. Foram encontradas oito inserções/deleções (7,9%), quatro (50%) delas descritas pela primeira vez e três (37,5%) delas levando à ruptura do sítio de splicing. O polimorfismo PIN2 (c.74+38C>G) foi encontrado em 89,1% dos pacientes. A frequência do alelo G foi de 0,72. O polimorfismo PIN3 (c.96+41_96+56del16) foi encontrado em 21,8% dos pacientes. A frequência do alelo A2 foi de 0,12. O polimorfismo 72Pro>Arg foi encontrado em 85,4% dos pacientes. A frequência do alelo Pro72 foi de 0,26 para o cDNA e 0,23 para o gDNA, diferença encontrada devido a expressão preferencial de um dos alelos em 40,7% dos heterozigotos. A expressão de p53, a mutação de TP53, a presença do alelo A2 e expressão do alelo Pro72 foram associadas significativamente às características clinicopatológicas que conferem pior comportamento tumoral e prognóstico adverso. Assim, a análise do cDNA de TP53 foi importante para determinar seu padrão de alteração e a contribuição específica do alelo expresso. Os dados obtidos foram congruentes com a forte associação que existe entre a mutação de TP53 e o seu acúmulo proteico, ainda que este acúmulo tenha sido verificado na minoria das amostras. Existe envolvimento de mutação sinônima com o mecanismo de splicing. As associações com os dados clinicopatológicos indicam que os polimorfismos em TP53 podem ter um papel na agressividade do CCR

ABSTRACT

Colorectal cancer (CRC) is the result of the interaction of environmental factors with multiple genetic factors. The TP53 gene regulates many cellular functions and is presented mutated in the majority of CRC cases. The mutations, polymorphisms and variations in gene expression provide the genetic basis for human diversity and may have a crucial role in the phenotypic variability and disease susceptibility. The study examined the TP53 alterations and sought associations between the findings with the immunohistochemical expression and clinicopathological data. We studied 101 patients, who underwent surgery at AC Camargo Hospital in the 2000-2006 period, through analysis of the protein, cDNA and gDNA of TP53. We found 54.5% of tumors with mutations in TP53. The mutations were significantly more frequent in the group of patients with positive immunohistochemistry reactions for p53 than in the negative group (p < 0.001). Synonymous mutations were found in three tumors, one of them leading to disruption of the splicing site. We found eight insertions/deletions, four of them described for the first time and three of them leading to the rupture of the splicing site. The PIN2 (c.74+38C>G) polymorphism was found in 89.1% of patients. The frequency of the G allele was 0.72. PIN3 (c.96+41_96+56del16) polymorphism was found in 21.8% of patients. The frequency of the A2 allele was 0.12. The polymorphism 72Pro>Arg was found in 85.4% of patients. The frequency of allele Pro72 was 0.26 for the cDNA and 0.23 for the gDNA. This difference was found because it was noticed the preferential expression of one allele in 40.7% of heterozygotes.The expression of p53, the TP53 mutation, the presence of the A2 allele and the allele Pro72 expression were significantly associated with tumor characteristics that confer worse tumor behavior and unfavorable prognosis. The analysis of TP53 cDNA is important to determine the pattern of alteration and the specific contribution of the allele expressed. This approach is consistent with the strong association that exists between TP53 mutation and its protein accumulation. Synonymous mutations are involved with splicing. The associations with linocophatological characteristics indicate that TP53 polymorphisms may play a role in the aggressiveness of CRC.