Estudo da expressão de CLIC4 e proteínas associadas em queilites actínicas e carcinomas de células escamosas de lábio inferior / Study of the expression of CLIC4 and associated proteins in actinic cheilitis and lower lip squamous cell carcinomas

RESUMO

A proteína do canal de cloro intracelular 4 (CLIC4) regula a passagens dos íons de cloro e relaciona-se com a proteína p53, fator de necrose tumoral α (TNF-α), fator de crescimento transformante-ß (TGF-ß) e com a diferenciação de fibroblastos em miofibroblastos (-SMA) em alguns cânceres humanos. O objetivo desse estudo foi analisar a expressão imuno-histoquímicade CLIC4 e proteínas associadas em queilitesactínicas (QA) e carcinomas de células escamosas de lábio inferior (CCELI), bem como verificar a relação destas entre si e com as características clínicas e morfológicas das lesões.A amostra foi composta de 50casos de QAs e 50de CCELIs com dados clínicos, que inicialmente foram submetidos ao estudo morfológico para sua gradação do risco de transformação maligna (sistema binário) e do grau histológico de malignidade (Bryne, 1992), respectivamente.Todos os casos foram submetidos ao método da imunoperoxidase usando os anticorpos paraCLIC4, p53, TGF-, TNF- e - SMA, os quais foram submetidos à análise semiquantitativa, com exceção de p53, que inicialmente foi analisado de forma quantitativa e em sequência categorizada como as demais. Para a análise da expressão de CLIC4 foi considerada sua localização celular.Comparações das imunomarcações com os parâmetros clínicos e morfológicos das lesões foram realizadas pelo teste U de Mann-Whitney e o coeficiente de Spearmanfoi calculado para avaliar correlações entre as proteínas. A expressão nuclear da CLIC4 e TGF-ß estava aumentadaem QAs de baixo risco, quando comparada ao grupo de alto risco (p<0.0001), enquantoCLIC4 citoplasmática,p53 e TNF-α exibiram maior expressão em QAs de alto risco (p<0.05). No que diz respeito às características clínicas e morfológicas dos CCELIs, a expressão de CLIC4 citoplásmatica foi maior nos casos apresentando metástase linfonodal, casos com estágios clínicos mais avançados ou com alto grau de malignidade (p = 0,005; p = 0,029; p<0,0001). A expressão de p53 foi maior em CCELIs de alto grau de malignidade (p= 0,001) e a TGF-ß diminuiu significativamente conforme o avanço do estágio clínico e do grau histológico dos tumores (p< 0,05).As QAs exibiram uma expressão aumentada de CLIC4 (no núcleo, ou núcleo e citoplasma) e TGF-ß, comparadas aos CCELIs (p < 0,0001). Em contraste, houve aumento na marcação de CLIC4 citoplasmática e α-SMA nos casos de CCELI, quando comparados às QAs (p < 0,0001).Nas QAs observou-se correlação negativa entre a expressão de CLIC4 nuclear ea CLIC4 citoplasmática (r = -0,554; p = <0,0001), e entre a marcação de TGF-ß e α-SMA (r = -0,309; p = 0,029). Nos carcinomas, a expressão de p53 exibiu correlação positiva com TNF-α (r = 0,528; p = 0,0001) e αSMA (r = 0,435; p = 0,002).Os nossos resultados sugeremque uma mudança no padrão de expressão nuclear para citoplasmática de CLIC4 está envolvida no processo decarcinogênese labial, acompanhada de alterações na expressão de p53, TGF-ß, TNF-α e α-SMA, e se relacionamcom alguns dos aspectos morfológicos e clínicos das QAs e CCELIs (AU).

ABSTRACT

The intracellular chloride channel protein 4 (CLIC4) regulates chloride ions and is related to p53, tumor necrosis factor α (TNF-α), transforming growth factor-ß (TGFß), and with the differentiation of fibroblasts in myofibroblasts (-SMA) in some human cancers. The objective of this study was to analyze the immunohistochemical expression of CLIC4 and associated proteins in actinic cheilites (AC) and squamous cell carcinomas of the lower lip (SCCLL), as well as to verific their relationship with each other and with the clinical and morphological characteristics of the lesions . The sample consisted of 50 cases of AC and 50 of SCCLL with clinical data, which were initially submitted to the morphological study for their gradation of malignant transformation risk (binary system) and histological grade of malignancy (Bryne, 1992). All cases were submitted to the immunoperoxidase method using CLIC4, p53, TGF-ß, TNF- and - SMA antibodies, which were submitted to semiquantitative analysis, except for p53, which was initially analyzed quantitatively and a categorized sequence like the others. For the analysis of CLIC4 expression, its cellular location was considered. Comparisons of the immunoblots with the clinical and morphological parameters of the lesions were performed by the Mann-Whitney U test and the Spearman coefficient was calculated to evaluate correlations between the proteins. Nucleic expression of CLIC4 and TGF-ß was increased in low-risk AC compared to high-risk group (p <0.0001), whereas cytoplasmic CLIC4, p53 and TNF-α showed higher expression in high-risk AC (p < 0.05). As regards the clinical and morphological characteristics of SCCLL, the expression of cytoplasmic CLIC4 was higher in cases presenting lymph node metastasis, cases with more advanced clinical stages or with a high degree of malignancy (p = 0.005, p = 0.029, p <0, 0001). Expression of p53 was higher in highgrade malignant SCCLL (p = 0.001) and TGF-ß decreased significantly as the clinical stage progressed and tumor grade histologically (p <0.05). Increased CLIC4 (in the nucleus, or nucleus and cytoplasm) and TGF-ß, compared to SCCLL (p <0.0001). In contrast, there was an increase in the labeling of cytoplasmic CLIC4 and α-SMA in SCCLL cases, when compared to AC (p <0.0001). In the AC, a negative correlation was observed between nuclear CLIC4 expression and cytoplasmic CLIC4 (r = -0.554, p = <0.0001), and between TGF-ß and α-SMA (r = -0,309; = 0.029). In carcinomas, p53 expression exhibited a positive correlation with TNF-α (r = 0.528, p = 0.0001) and αSMA (r = 0.435, p = 0.002). Our results suggest that a change in CLIC4 cytoplasmic nuclear expression pattern is involved in the process of lip carcinogenesis, accompanied by changes in the expression of p53, TGF-ß, TNF-α and α-SMA, and are related to some of the morphological aspects and clinicians of AC and SCCLL (AU).