Influência das células mioepiteliais neoplásicas benignas na invasão das células do melanoma: estudo in vitro / Influence of the benign neoplastic myoepithelial cells in the invasion of melanoma cells: an in vitro study

RESUMO

As células do microambiente tumoral apresentam papel fundamental no processo de invasão. Muitos estudos têm demonstrado, em tumores de mama, que as células mioepiteliais normais exercem efeitos parácrinos de supressão tumoral no epitélio glandular. As células mioepiteliais neoplásicas de tumores de glândula salivar também parecem atuar como supressoras naturais de tumor devido a algumas características, tais como expressão de altos níveis de inibidores de proteases. Desta maneira, o objetivo deste trabalho foi avaliar in vitro a influência das células mioepiteliais neoplásicas benignas de glândula salivar na invasão de células malignas. Para isso, células de melanoma (M2, ATCC) foram plaqueadas no compartimento superior das câmaras transwell com membrana de polietileno terefelato, com poros de 8µm de diâmetro, recoberto com Matrigel (BD). Após a aderência celular (4h), meio condicionado de células mioepiteliais provenientes de três adenomas pleomórficos de glândula salivar (AP3, AP4 e AP8) foi colocado no compartimento superior e meio DMEM (Sigma) no inferior do transwell. Após 48h, as células foram coradas em HE e o potencial de invasão e o número absoluto de células invadidas foram calculados em 1/3 da área da membrana (25 campos aleatórios, objetiva 20x), por meio de fotomicrografias em microscópio de luz. A análise de variância foi realizada aplicando o teste estatístico ANOVA seguido pelo teste de Tukey. Os resultados mostraram que a presença do meio condicionado de células mioepiteliais teve caráter supressor na invasão das células do melanoma. O índice de invasão foi estatisticamente significante no grupo AP8 (p<0,05) e os números absolutos de células invadidas, nos grupos AP3 e AP8 (p<0,05) quando comparados ao grupo controle. Desta maneira, pode-se concluir que, neste modelo de estudo, as células mioepiteliais neoplásicas benignas apresentaram efeito supressor na invasão das células do melanoma

ABSTRACT

Cells in the tumoral microenvironment have an important role in the invasion process. Many studies have shown, in breast tumors, that normal myoepithelial cells have paracrine effects as a tumor suppressor factor in the glandular epithelium. Myoepithelial cells from neoplastic salivary gland tumors also appear to act as natural suppressor tumor due to many characteristics, such as high levels expression of protease inhibitors. The aim of this study was an in vitro evaluation of the influence of neoplastic benign myoepithelial cells from salivary gland on the invasion of malignant cells. For this, melanoma cells (M2, ATCC) were plated on the upper compartment of transwell chambers with polyethylene terephthalate membrane with pore size diameter of 8 μm, coated with Matrigel (BD). After cell adherence (4 h), conditioned medium of myoepithelial cells from three salivary gland pleomorphic adenomas (AP3, AP4 and AP8) was added in the upper chamber and DMEM medium (Sigma) under the transwell. After 48 h, cells were stained with HE and the invasion potential and the absolute number of invaded cells were calculated in 1/3 part of the membrane area (25 random area, 20x objective), through photomicrographs by light microscopy. The analysis of variance was performed by ANOVA test followed by Tukey. The results showed that the conditioned medium of myoepithelial cells had a suppressor role in the melanoma cell invasion. The invasion potential was statistically significant in AP8 group (p <0.05) and also the absolute numbers of invaded cells in AP3 and AP8 groups (p <0.05) when compared with the control group. It can be concluded that in this model study, neoplastic benign myoepithelial cells showed suppressive effect on melanoma cells invasion