Quality evaluation of DNA obtained from stored human saliva and its applicability to identification in Forensic Dentistry / Avaliação da qualidade do DNA extraído de saliva humana armazenada e sua aplicabilidade na identificação em Odontologia Legal

ABSTRACT

Purpose: This study evaluated the quality of DNA obtained from stored human saliva and its applicability to human identification. Methods: The saliva samples of 20 subjects, collected in the form of saliva in natura and from mouth swabs and stored at -20ºC, were analyzed. After 7 days, the DNA was extracted from the 40 saliva samples and subjected to PCR and electrophoresis. After 180 days, the technique was repeated with the 20 swab samples. Results: The first-stage results indicated that DNA was successfully extracted in 97.5% of reactions, 95% of saliva in natura and 100% of swab saliva samples, with no statistically significant difference between the forms of saliva. In the second phase, the result was positive for all 20 analyzed samples (100%). Subsequently, in order to analyze the quality of the DNA obtained from human saliva, the SIX3-2 gene was tested on the 20 mouth swab samples, and the PCR products were digested using the MbO1 restriction enzyme to evaluate polymorphisms in the ADRA-2 gene, with positive results for most samples. Conclusion: It was concluded that the quantity and quality of DNA from saliva and the techniques employed are adequate for forensic analysis of DNA.

RESUMO

Objetivo: Este trabalho objetivou avaliar a qualidade do DNA obtido de saliva humana armazenada e sua aplicabilidade da identificação de pessoas. Metodologia: Analisaram-se amostras salivares de n=20 sujeitos da pesquisa, coletadas nas formas de saliva in natura e de swab bucal, sendo armazenadas a 20ºC. Após 7 dias, o DNA foi extraído das 40 amostras de saliva e submetido à PCR e à eletroforese. Após 180 dias repetiu-se a técnica nas 20 amostras de swab. Resultados: Os resultados da primeira etapa indicaram que o DNA foi extraído com sucesso em 97,5% das reações, e, analisando-se separadamente, em 95% de saliva in natura e em 100% da saliva do swab, não havendo diferenças estatisticamente significantes entre as duas formas de saliva. Na segunda fase, o resultado foi positivo para as 20 amostras analisadas (100%). Posteriormente, para analisar a qualidade do DNA obtido da saliva humana, o gene SIX3-2 foi testado nas 20 amostras de swab bucal e foi feita a digestão do produto da PCR com a enzima de restrição MbO1 para avaliar polimorfismo do gene ADRA-2 obtendo-se resultados positivos para a maioria das amostras. Conclusão: Concluiu-se que a quantidade e a qualidade do DNA advindo de saliva e as técnicas empregadas estão adequadas à análise forense do DNA.