Avaliação da associação entre a doença periodontal e o parto prematuro e o baixo peso ao nascer: estudo experimental em ratas / Evaluation of the association between the disease periodontal and premature birth and low birth weight: study experimental in rats

RESUMO

A Periodontite é definida como a destruição das estruturas de suporte dentário, uma complexa relação entre um processo infeccioso oral que induz uma resposta inflamatória no hospedeiro, modificada por fatores ambientais. Antígenos e fatores de virulência derivados do biofilme oral aderido à superfície do dente, levam ao recrutamento de células da resposta imune, e a produção de citocinas pró-inflamatórias, que mediam a destruição dos tecidos periodontais. Tem sido, portanto, proposto, que a periodontite possa ser um fator de risco para desfechos adversos da gestação, como o parto prematuro e o baixo peso ao nascimento. O presente estudo foi conduzido para verificar a plausibilidade biológica da possível associação entre a periodontite e o parto prematuro e o baixo peso ao nascer. Um estudo experimental em modelo animal por indução de periodontite por ligaduras em 50% dos sítios, avaliando a presença de citocinas no tecido gengival, soro, placenta, cordão e liquido amniótico foi desenhado para testar a hipótese nula de que a indução da periodontite em ratas não ocasiona resultados adversos da gravidez. Quarenta fêmeas foram incluídas em dois grupos controle, sem periodontite (sem ligaduras) e teste, com periodontite induzida experimentalmente (ligaduras colocadas ao redor dos segundos molares superiores e dos primeiros molares inferiores). Quarenta e cinco dias após a indução, foi iniciado o acasalamento. Machos foram colocados com as fêmeas, na proporção 12, por um período de 12 horas. O peso corporal da fêmea, a partir de então, foi registrado diariamente. Confirmada a prenhez, no 20º dia do período gestacional, foi realizada a laparotomia e as seguintes coletas foram feitas líquido amniótico, embriões, placenta, cordão umbilical, sangue materno, maxila e mandíbula. O peso corporal das mães, a quantidade de fetos por fêmea e o peso de cada um foram registrados.O pool de líquido amniótico de cada fêmea, as placentas removidas, os cordões umbilicais, o sangue (soro) materno e o tecido gengival coletados foram submetidos à análise quantitativa para IL1-α, IL6, TNF-α, IL10, IL4, IL12p70, IFN-γ e IL17a pela metodologia multiplex (LabMAP, Luminex Corp., Austin, TX, USA). Para confirmação da periodontite, a maxila e a mandíbula removidas foram processadas e submetidas à morfometria. A periodontite induzida em ratas Wistar não resultou em resultados adversos da prenhez. Não houve diferenças estatisticamente significativas entre os grupos em relação à prematuridade, número de fetos ou peso ao nascer. Em relação às citocinas , também não houve diferenças estatisticamente significativas para as concentrações mensuradas em cada tecido, entre os grupos com periodontite e controle. Além disso, os níveis de todas as citocinas na placenta, exceto a IL-6, estavam diminuídos em relação ao soro materno ou líquido amniótico, o que sugere que as citocinas não podem ser facilmente transferidas através deste tecido em direção materno-fetal ou feto-maternal. A taxa de fecundidade foi reduzida significativamente para o grupo com periodontite. As medidas clínicas dos resultados da gravidez, associadas aos resultados das citocinas permitem concluir que a periodontite generalizada induzida experimentalmente em ratos não é um fator de risco para prematuridade ou baixo peso ao nascer. (AU)

ABSTRACT

Periodontitis, defined as the destruction of the tooth surrounding supportive tissues, is an intricate interrelation between an oral infection process inducing an inflammatory response in the host, modified by behavioral elements. Antigens and various virulence factors derived from plaque biofilm on the root surface initiate a recruitment of immune response cells and the production of proinflammatory cytokines, as IL-1, IL-6 and TNF-α, which are mediators of the connective tissue and bone destruction. Therefore, periodontitis has been proposed as a risk factor for adverse pregnancy outcomes, as preterm birth (PTB) and low birth weight (LBW). The present study was then conducted to verify the biological plausibility of the possible association between periodontitis and preterm birth and low birth weight. An experimental animal model study inducing periodontitis with ligatures in 50% of sites and assessing the presence of cytokines in the gingival tissue, serum, placenta, cord and amniotic fluid was designed to test the null hypothesis that the induction of periodontitis in rats does not result in adverse pregnancy outcomes. Fourty females were included in two groups a periodontally healthy control (without ligatures) and an experimentally induced periodontitis group (test, with ligatures placed around the cervical region of the second maxillary molars and of the first mandible molars). Forty-five days after the induction, the mating was initiated. Males were placed with females in the ratio of 12 for a period of 12 hours. The body weight of the female, from then on, was recorded daily. Confirmed the pregnancy, on the 20th day, laparotomy was performed and the following collections were made amniotic fluid, embryos, placenta , umbilical cord blood, maternal blood and the jaws . The maternal body weight, the number of fetuses per female and the weight of each were recorded.The pool of amniotic fluid from each female, the removed placenta, umbilical cord, blood (serum) and maternal and gingival tissue samples were subjected to quantitative analysis for IL1 - α, IL-6, TNF - α, IL10, IL4, IL12p70, IFN - γ and IL17a by multiplex methodology (LabMAP, Luminex Corp., Austin, TX, USA). For confirmation of periodontitis, the maxilla and mandible removed were processed and submitted to morphometry. The induced periodontitis in Wistar rats did not result in adverse outcomes of pregnancy. There were no statistically significant differences between groups in relation to prematurity, fetal or birth weight. Regarding cytokines, there were no statistically significant differences in concentrations measured in each tissue between the groups with periodontitis and control. Furthermore, the levels of all cytokines in the placenta, except IL-6 were diminished compared to the amniotic fluid or maternal serum, suggesting that the cytokines can not easily be transferred via this tissue in maternal-fetal or feto- maternal direction. The fertility rate was significantly reduced in the group with periodontitis. Clinical measures of pregnancy outcomes, associated with the results of cytokines showed that the generalized periodontitis induced in rats is not a risk factor for preterm birth or low birth weight . (AU)