Técnica de tunel em embriões de ratas wistar: avaliação da qualidade e da capacidade de desenvolvimento dos embriões / Tunel technique in wistar rats embryos: evaluation of qualify and development capacity of embryos

RESUMO

A técnica do TUNEL tem se mostrado eficiente como indicadora de qualidade embrionária em embriões bovinos e de camundongos. Entretanto, em ratos, a técnica não é amplamente utilizada. Objetivou-se avaliar a qualidade do desenvolvimento de embriões de ratas Wistar e o uso da técnica de TUNEL. Animais (n=8) foram superovulados através da injeção intraperitoneal de 150 UI/kg de peso via intraperitoneal (IP) de PMSG (Pregnant Mare Gonadotropin) e de 75 UI/kg de hCG 48h após. Fêmeas superovuladas foram colocadas para acasalar. 107 embriões de 4-8 células foram coletados 72 horas após hCG e cultivados em meio KSOM com 5% albumina sérica humana (BSA), em incubadora com 5% de CO2, 95% de umidade a 37,0ºC, por 48 horas. Após o cultivo, foi calculada a taxa de blastocisto e realizada a técnica do TUNEL. A taxa de blastocisto foi de 83,17% (89/107), com 19,62% (21/107) de blastocisto inicial, 14,01% (15/107) de blastocisto, e 49,53% (53/107) de blastocisto expandido. O número total de blastômeros foi de 28,82±4,76. A taxa apoptótica foi de 10.32 ± 8.91% e 94% (31/34) dos embriões apresentavam pelo menos uma célula apoptótica. Em conclusão, a técnica de TUNEL se mostrou viável na avaliação da qualidade embrionária de embriões de ratas Wistar.

ABSTRACT

The TUNEL technique has proven to be efficient as indicator of embryo quality in cattle and mice. Athough the technique is not yet widely used in rats. Thus the aim of this study was to evaluate the quality of Wistar rat embryos and the use of the TUNEL technique. Animals (n=8) were superovulated by intraperitoneal injection of 150 IU/kg PMSG (Pregnant Mare Gonadotropin) and 75 IU/kg 48h after hCG. Superovulated females were placed with males at a ratio of 1/1. 107 4-8 cells embryos were collected 72 hours after hCG and were cultured in KSOM medium with 5% bovine serum albumin (BSA), for 48h ,with 5% CO2, 95% humidity at 37.0ºC. After cultured, the blastocyst rate was calculated and the TUNEL technique was performed. The blastocyst rate was 83.17% (89/107), with 19.62% (21/107) of initial blastocyst, 14.01% (15/107) of blastocyst and 49.53% (53 / 107) of expanded blastocyst. The total number of blastomeres was 28.82 ± 4.76. The apoptotic cells rate was 10.32 ± 8.91% and 94% (31/34) of embryos had at least one apoptotic cell. In conclusion, the TUNEL technique showing that it can be used to evaluation embryo quality, in Wistar rats embryos.