Cultivo de las células estromales de la médula ósea en un medio suplementado con los nutrientes N2: implicaciones sobre la generación de células neurales / Marrow stromal cells cultured in n2-supplemented medium: implications on the generation of neural cells

RESUMEN

Introducción. La mayoría de los sistemas de cultivo para el mantenimiento in vitro y la diferenciación neural de las células estromales de la médula ósea (CEM) utilizan medios sintéticos suplementados con suero fetal bovino (SFB) al 10 o al 20%. Sin embargo, el suero se compone de cantidades desconocidas de sustancias no definidas que podrían interferir el efecto de las sustancias exógenas sobre la diferenciación neural de estas células. Objetivo. En este trabajo describimos la supervivencia de las CEM en condiciones de cultivo donde se redujo la concentración del SFB al 0,5 y al 1% y se utilizó la fórmula N2 de Bottenstein y Sato (1979) y un sustrato tratado con poli-L-lisina (PLL). Materiales y métodos. Se cultivaron células estromales aisladas de los fémures de rata en el medio de Eagle modificado por Dulbecco, con concentraciones de SFB del 10, el 1 y el 0,5% o en medio libre de suero, que contenían la fórmula N2. En los cultivos crecidos en medios libres de suero o con baja concentración de éste, la superficie de cultivo se trató con PLL. La supervivencia celular se midió por el método del MTT o por recuento de las células vivas. Resultados. La supervivencia de las CEM cultivadas en la fórmula N2 disminuyó hasta aproximadamente el 40% de la observada en el medio con SFB al 10%, y se afectó la morfología celular. Un aumento significativo de la supervivencia con respecto al cultivo en N2 se produjo cuando, además de este nutriente, se añadió SFB al 0,5 y al 1%. En los cultivos sembrados sobre superficies tratadas con PLL la supervivencia celular aumentó en comparación con los sembrados sobre superficies no tratadas. Conclusiones. Este sistema de cultivo que combina la fórmula N2 con SFB al 1% y emplea un sustrato tratado con PLL, es adecuado para el mantenimiento de las CEM. Estas condiciones son ventajosas para estudiar la diferenciación neural de estas células, ya que reducen la interferencia del suero. Se discute la posible implicación de este sistema de cultivo para los estudios de diferenciación neural en estas células

ABSTRACT

Introduction. Most of the culture system for in vitro maintenance and neural differentiation of marrow stromal cells (MSCs) use synthetic media supplemented with 10 or 20% fetal bovine serum (FBS). Serum, however, is comprised of unknown quantities of undefined substances which could interfere the effect of exogenous substances on neural differentiation of MSCs. Aim. Here we describe survival of MSCs cultured in culture conditions where serum was reduced at 0.5 and 1% using Bottenstein and Sato’s N2 formula (1979) and poly-L-lysine (PLL)-coated substrate. Materials and methods. Stromal cells isolated from rat femurs were cultivated in Dulbecco’s modified Eagle medium at 10, 1, 0.5% FBS or in serum free medium containing N2 formula. In serum free medium or at low serum concentration culture surface was coated with PLL. Cell survival was determined by MTT method or by counting viable cells. Results. Survival of MSCs cultured in N2 supplement was reduced at about 40% of that observed in 10% FBS containing medium. Under these conditions cell morphology was also affected. When N2 containing medium was supplemented with FBS at 0.5 or 1% a significant increase of survival with respect to that observed in N2-supplemented cultures was observed. Cells seeded on PLL-coated surface increased their survival by contrast with their homologous cultures seeded on uncoated surface. Conclusions. The culture system which combines N2 formula with FBS 1% and PLL-coated surface is useful for the maintenance of MSCs. These conditions offer advantages for the study of differentiation of these cells because they reduce the confounding influence of serum. The possible implication of this culture system for the study of neural differentiation by these cells is discussed