Generación de un sustituto de mucosa oral humana y comprobación de su viabilidad mediante ingeniería tisular / Generation of a substitute for human oral mucosa and verification of its viability by tissue-engineering

RESUMEN

La reconstrucción de grandes defectos de mucosa oral a menudo es desafiante, por la escasez de mucosa oral sana para reemplazar tejidos dañados. De esta forma, las técnicas de ingeniería tisular pueden suponer una fuente de tejidos autólogos disponible para trasplantar a estos pacientes. En este trabajo hemos desarrollado un nuevo modelo de mucosa oral artificial generada mediante ingeniería tisular usando un soporte de fibrina-agarosa. Para ello, se han generado cultivos primarios de fibroblastos de la mucosa oral humana y queratinocitos a partir de pequeñas biopsias de mucosa oral normal y aplicándoles tratamiento senzimáticos. Después, se ha determinado la viabilidad de las células cultivadas mediante microanálisis por rayos-X, demostrando que la mayoría de las células de los cultivos primarios estaban vivas y tenían elevados K/Na ratios. Una vez que la viabilidad celular fue determinada, se usaron los fibroblastos y queratinocitos cultivados para desarrollar un constructo de mucosa oral sobre una matriz extracelular de (..) (AU)

ABSTRACT

Reconstruction of large oral mucosa defects is often challenging, since the shortage of healthy oral mucosa to replace the excised tissues. This way, tissue ingineering techniques may provide a source of autologoustissues available for transplant in these patients. In this work, wehave developed a new model for artificial oral mucosa generated by tissue engineering using a fibrin-agarosa scaffold. For that purpose, we have generated primary cultures of human oral mucosa fibroblasts and keratinocytes from small biopsies of normal mucosa oral using enzymatic treatments. Then, we have determined the viability of cultured cells by electron probe quantitative X-ray microanalysis, and we have demonstrated that most of the cells in the primary cultures were alive and hd high K/Na ratios. Once cell viability was determined, we used cultured fibroblasts and keratinocytes to develop an artificial oral mucosaconstruct by using a fibrin-agarosa extracellular matrix and a sequential culture technique using porous culture inserts. Histological analysis of the artificial tissues showed high similarities with normal oral (..) (AU)