Protocolo de extracción de ADN en lotes de 10 mosquitos para la identificación de Plasmodium spp. mediante qPCR / Protocol for DNA extraction in batches of 10 mosquitoes for the identification of Plasmodium spp. thorough qPCR

RESUMEN

Las tropas que despliegan en zonas de operaciones endémicas de malaria, necesitan de una información precisa del riesgo sanitario para la toma de decisiones acerca de las medidas de prevención más adecuadas. El estado de portador de un mosquito se determina clásicamente por la presencia o ausencia de esporozoitos de Plasmodium spp. en las glándulas salivales. Los protocolos basados en la amplificación del ADN en tiempo real (qPCR) son muy sensibles, sin embargo existen dificultades en la qPCR debido a inhibidores presentes en los tejidos del mosquito, lo que obliga a trabajar de uno en uno. En este trabajo se diseña una qPCR para amplificar una región conservada entre mosquitos de diferentes especies y otros dípteros, con el objetivo de comparar varios protocolos de extracción de ADN y determinar el más eficiente a la hora de procesar lotes de 10 mosquitos (AU)

ABSTRACT

Troops deployed in operational areas where malaria is endemic, need accurate information on the health risk for this disease to make decisions about the most appropriate prevention measures. The carrier status of a mosquito is classically determined by the presence or absence of sporozoites of Plasmodium spp. in the salivary glands. Protocols based on DNA amplification in real time (qPCR) are very sensitive, however there are difficulties in qPCR due to inhibitors present in tissues of the mosquito, therefore it is necessary to work one by one. In this paper we design a qPCR to amplify a preserved region among different species of mosquitoes and other Diptera, in order to compare various DNA extraction protocols to determine the most efficient one when processing batches of 10 mosquitoes (AU)